吴谦毕业-论文4 - 副本

1、高效液相色谱法测定化妆品中的防腐剂摘要本文建立了用高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯这两种常见防腐剂含量的测定方法。以MICROSORB-MV C18（250mm4.6mm,5m）为分离柱，以甲醇-水（60:40,V/V）为流动相，流速为1.5mL/min，UV检测器检测波长为254nm。两种防腐剂在内呈现良好线性关系（r0.99625），平均回收率为87.12%106.15%，相对标准偏差为2.13%4.25%。关键词: 防腐剂；化妆品；高效液相色谱Determination of Preservatives in Cosmetics by High Perform

2、ance Liquid ChromatographyAbstractA High Performance Liquid Chromatography (HPLC) was developed for the determination of Methyl-p-hydroxy benzoate and Butyl-p-hydroxy benzoate in cosmetic. A MICROSORB-MV C18 (250mm4.6mm,5m) was used as separation column with Methanol-water (60:40,V/V) as mobile phas

3、e which flow rate was 1.5mL/min, the UV detection wavelength was 254 nm.Preservatives showed good Linearity within the range of 0.250.025mg/mL ( r0.99625), average recovery was 87.12%116.15%, RSD was 2.13%4.25% .Key Words: Preservatives; Cosmetic; HPLC目录摘要IAbstractII1 绪论12 实验部分32.1 试剂和仪器32.2 色谱条件32.

4、3 样品处理42.4 储备液制备43 结果与讨论53.1 进样量的确定53.2 检测波长的确定53.3 流动相组成的确定63.4 流速的确定113.5 标准曲线的绘制123.6 加标回收与精密度实验133.7 化妆品的测定144 结论17参考文献181 绪论 化妆品中的防腐剂是为了使化妆品在生产、使用和保存的过程中免受微生物污染的一类化妆品添加剂，防腐剂具有抗菌活性，能有效防止化妆品腐败变质，延长化妆品保存时间和保持原有化妆品的功效1。防腐剂能够发生作用必须满足2个条件：首先，防腐剂具有一定的浓度，其次，防腐剂必须与微生物细胞直接接触。防腐剂最先是与微生物的细胞外膜接触并吸附，穿过细胞膜进入到

5、细胞质内，破坏细胞的分裂，抑制细菌生长和繁殖，从而达到防腐的目的2。 通常会根据防腐剂的结构、理化特性，将几种防腐剂按一定比例混合使用。虽然防腐剂对化妆品中的各种有害微生物有良好的抑制作用，能有效防止化妆品腐败变质，延长化妆品保存时间和保持原有化妆品的功效，但大多数防腐剂对人的皮肤会产生不同程度的刺激，容易出现皮肤过敏,常见的有接触性皮炎和过敏性皮炎，而对羟基苯甲酸甲酯为头号致敏原。因此，防腐剂在化妆品中的使用受到一定限制3。截至2007年，根据美国食品与药品管理局（FDA）和美国化妆品、盥洗用品和香料协会（CTFA）出版物公布的数据，允许在美国使用的化妆品防腐剂物质大概有60多种；欧盟化妆品

6、规程附录六（Annex VI to Directive 76H68/EEC）中允许在欧盟使用的化妆品防腐剂有56种；我国卫生部颁布的化妆品卫生规范（2007版）中允许在我国使用的化妆品防腐剂有56种4。 对羟基苯甲酸酯类是经过我国卫生部批准的化妆品组分中的限用防腐剂。化妆品卫生规范规定，对羟基苯甲酸酯类单一酯和混合酯的限量分别为0.4%和0.8% 4。在规定的范围内添加适量的防腐剂对于保证化妆品免受微生物的污染, 同时确保消费者的安全使用是非常必要的5。化妆品中防腐剂的含量测定，是评价化妆品防腐剂使用安全快捷、简便和直接的一种手段6。化妆品中常用防腐剂的同时测定国外有采用凝胶电泳7，毛细管电泳

7、8的报导，国内也有其他报道9。王萍等10采用胶束电动毛细管色谱成功测定了化妆品中的重氮烷基脲和对羟基苯甲酸酯类防腐剂11。这些方法都有一定的局限性，不能满足现在检测的要求。吸光光度法多用于原料分析，例如4-氨基安替比林比色法适用含有羟基化合的定量，滴定法主要用于季胺盐类防腐剂的定量，气相色谱法在用于测定含有羟基和羧基等极性物质时，一般需经过甲基硅烷化、衍生化后再用气相色谱定性与定量。因此，在防腐剂检测中受到一定限制。高效液相色谱法是当前使用最广泛的方法。因为防腐剂大多是大分子有机物，并且有紫外吸收特性，最适于用高效液相色谱分析12。 本文采用高效液相色谱建立了对化妆品中对羟基苯甲酸甲酯（Me-

8、PHBA）、对羟基苯甲酸丁酯（Bu-PHBA）这两种常见防腐剂含量的测定方法。使用本方法检测眼霜、润体乳、洗发露、乳液四种化妆品。结果表明，新方法缩短了分析时间并提高了灵敏度。2 实验部分2.1 试剂和仪器表2-1 试剂和仪器Table2-1 The Reagents and instruments名称 厂家 纯度/型号对羟基苯甲酸甲酯 天津市光复精细化工研究所 化学纯对羟基苯甲酸丁酯 天津市光复精细化工研究所 分析纯甲醇 天津市博迪化工有限公司 分析纯无水乙醇 天津市富宇精细化工有限公司 分析纯乙腈 上海化学试剂研究所 分析纯液相色谱仪 日本日立公司 L-7000超声波清洗器 昆山市超声波仪

9、器有限公司 KQ-100E循环水多用真空泵 郑州杜甫仪器厂 SBH-3 800型电动离心机 山东菏泽南城益发仪器厂 TGL-16 电子分析天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司 TB-214超纯水器 日本日立公司实验用水均为超纯水(Ultra Pure Water)。2.2 色谱条件HITACHI液相色谱仪(日本日立公司)。配备L-7100型高压泵，L-7420型紫外-可见检测器，N3000色谱工作站（浙江大学智能信息研究所研制）。HPLC色谱柱：MICROSORB-MV C18（250mm4.6mm,5m)；流动相:V(甲醇):V(水)=60:40，流速为1.5mL/min，检测波长254nm，

10、柱温15。微量进样器：10L。2.3 样品处理 选择具有代表性的眼霜,乳液,润体乳,洗发露四种样品进行测定。准确称取眼霜0.5116g，乳液0.5135g，润体乳0.5000g，洗发露0.5104g，各置于50mL锥形瓶中,准确加入无水乙醇50mL，超声30min，4000r/min离心10min后，取上清液经0.45m有机膜过滤后待测定。2.4 储备液制备准确称取对羟基苯甲酸甲酯0.0501g、对羟基苯甲酸丁酯0.0502g于50mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀。经0.45m有机膜过滤后超声排气泡20min，作为储备液。3 结果与讨论3.1 进样量的确定 使用储备液进行进样量条件的优化。

11、通过从1L10L改变进样量，发现当进样量为1-4L时基线噪声较大，当进样量为10L时出现平头峰，当进样量为5L时峰高较适宜，并且方便后面标准溶液的配制，所以选择进样量为5L，见图3-1。注：1 - Me-PHBA，2 - Bu-PHBA。图3-1 进样量为5L时标准样品色谱图Figure3-1 Chromatogram for the injection volume 5L standard samples 3.2 检测波长的确定将混合标准溶液在波长190-340nm作紫外扫描,发现在254nm波长下带宽最小，且有最大吸收。为保证较好的灵敏度及最小的干扰，选择254nm为检测波长。各波长下带宽

12、与峰高数据见表3-1。 表3-1 最佳检测波长数据表Table3-1 The best detection wavelength检测波长(nm) Me-PHBA带宽(nm)/峰高（v） Bu-PHBA带宽(nm)/峰高（v） 220 0.630/139875 0.530/89606 235 0.260/153721 0.824/99143 254 0.247/184791 0.525/123166 265 0.270/150294 0.846/129598 280 0.223/ 127731 1.783/918293.3 流动相组成的确定3.3.1 甲醇与超纯水做流动相对分离效果的影响考察了甲

13、醇与水多种配比作为流动相，优化标准品分离效果。包括V（甲醇）为100%，V（甲醇）：V（超纯水）=80:20，V（甲醇）：V（超纯水）=60:40，V（甲醇）：V（超纯水）=50:50。发现使用V（甲醇）：V（超纯水）=60:40作为流动相时，对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸丁酯混合液能达到完全分离并且峰宽较窄，保留时间令人满意，见图3-2。注：1 - Me-PHBA，2 - Bu-PHBA。图3-2 流动相V（甲醇）：V（超纯水）=60：40标准样品色谱图Figure3-2 Chromatogram for mobile phase V (methanol) : V (upw) = 60:40

14、 standard samples3.3.2 乙腈与超纯水做流动相对分离效果的影响考察了乙腈与超纯水多种配比作为流动相，优化标准品分离效果。包括V（乙腈）为100%，V（乙腈）：V（超纯水）=80：20，V（乙腈）：V（超纯水）=60：40，V（乙腈）：V（超纯水）=50:50。发现没有一种流动相配比可以使对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸丁酯混合液分离。以V（乙腈）：V（超纯水）=60：40为例的标准品色谱分离结果见图3-3。注：1 - Me-PHBA，2 - Bu-PHBA。图3-3 流动相V（乙腈）：V（超纯水）=60：40标准样品色谱图Figure3-3 Chromatogram for

15、mobile phase V (acetonitrile) : V (upw) = 60:40 standard samples3.3.3 乙腈与甲醇做流动相对分离效果的影响考察了乙腈与甲醇多种配比作为流动相，优化标准品分离效果。包括V（乙腈）为100%，V（乙腈）：V（甲醇）=80：20，V（乙腈）：V（甲醇）=60：40，V（乙腈）：V（甲醇）=50:50。发现没有一种流动相配比可以使对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸丁酯混合液分离。以V（乙腈）：V（甲醇）=60：40为例的标准品色谱分离结果见图3-4。注：1 - Me-PHBA，2 - Bu-PHBA。图3-4 流动相V（乙腈）：V（甲醇）

16、=60：40标准样品色谱图Figure3-4 Chromatogram for mobile phase V (acetonitrile) : V (methanol) = 60:40 standard samples3.3.4 混合流动相对分离效果的影响考察了多种甲醇、乙腈和超纯水不同比例混合液作为流动相，优化标准品分离效果。包括V（甲醇）：V（乙腈）：V（超纯水）=70:20:10，V（甲醇）：V（乙腈）：V（超纯水）=60:30:10，V（甲醇）：V（乙腈）：V（超纯水）=50:40:10，V（甲醇）：V（乙腈）：V（超纯水）=40:50:10。实验结果表明没有一种流动相配比可以使羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸丁酯混合液分离。以流动相V（甲醇）：V（乙腈）：V（超纯水）=50:40:10为例的标准品色谱分离结果见图3-5。注：1 - Me-PHBA，2 - Bu-PHBA。图3-5 流动相V（甲醇）：V（乙腈）：V（超纯水）=50：40：10标准样品色谱图Figure3-5 Chromatogram for mobile phase V (methanol) : V (acetonitrile) : V (upw) = 50:40:10 standard samples3.3.5分离效果总结根据中华人民共和国药典中规定，当分离度大于1.5时可以认为两种