微生物实验(第三节课)

1、微生物学实验微生物实验的意义、研究进展和实验内容一、研究内容一、研究内容 研究微生物的形态、结构、生理生化研究微生物的形态、结构、生理生化 遗传变异、微生物与其他生物、遗传变异、微生物与其他生物、 与自然界之间的关系与自然界之间的关系 机理研究：微生物适应环境的机制机理研究：微生物适应环境的机制 鞭毛运动的机理等鞭毛运动的机理等 是生化和分子生物学研究的重要内容是生化和分子生物学研究的重要内容 2. 微生物与实际应用微生物与发酵工程微生物与发酵工程微生物与环境工程微生物与环境工程微生物与农业微生物与农业微生物与医学领域微生物与医学领域微生物与食品工业微生物与食品工业二、微生物学研究进展微生物基

2、因组学研究（微生物基因组学研究（Microbial Microbial GenomicsGenomics）不可培养微生物不可培养微生物（Uncultured Microorganisms Uncultured Microorganisms ）DNADNA芯片（芯片（DNA ChipDNA Chip）三域学说（三域学说（Bacteria, Bacteria, ArchaeArchae, , EucaryoteEucaryote）三、微生物学与Nobel奖 到目前为止，几十项到目前为止，几十项NobelNobel生理学和医生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关学奖，化学奖都与微生物学有关 参考：沈

3、萍教授参考：沈萍教授微生物学微生物学绪论部分绪论部分 NobelNobel获奖者全书获奖者全书四、如何进行微生物学实验 严肃认真严肃认真 科学态度科学态度 分析问题分析问题 搞清原理搞清原理五、微生物实验安排与考核基础实验：基础实验：4 4次大实验次大实验 设计实验方案设计实验方案 实验操作实验操作 总结总结 汇报汇报课堂纪律课堂纪律u严格遵守实验室规章制度u严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（3次） 工作服实验室安全和卫生实验室安全和卫生u安全实验室严禁吸烟。注意用水、防电和防火正确使用化学试剂和仪器u卫生每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁实验一 实验室环境和人体体

4、表微生物的检测u实验目的实验目的u实验原理实验原理u实验材料实验材料u实验步骤实验步骤u实验结果实验结果u思考题思考题一、实验目的一、实验目的u通过实验验证在实验室内的空气、器、物和人通过实验验证在实验室内的空气、器、物和人体表面上存在着微生物。体表面上存在着微生物。u观察不同微生物的菌落形态特征。观察不同微生物的菌落形态特征。u比较不同取样处微生物的类型和数量。比较不同取样处微生物的类型和数量。u学习从自然环境中采集微生物的方法，了解并学习从自然环境中采集微生物的方法，了解并掌握无菌操作技术。掌握无菌操作技术。二、实验原理二、实验原理u空气中的微生物菌体和霉菌孢子空气中的微生物菌体和霉菌孢子

5、无处不在无处不在u接种于含有丰富营养，不带有任何其它微生物接种于含有丰富营养，不带有任何其它微生物的琼脂固体培养基上，在适宜条件下，微生物的琼脂固体培养基上，在适宜条件下，微生物吸收各种营养，可形成肉眼可见的群体吸收各种营养，可形成肉眼可见的群体菌菌落。落。u不同微生物形成的菌落差异很大。不同微生物形成的菌落差异很大。三、实验材料三、实验材料u培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂平板培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂平板u用具：接种环、酒精灯用具：接种环、酒精灯、无菌水、灭菌、无菌水、灭菌棉签、试管架、记号笔、废物缸、吸水棉签、试管架、记号笔、废物缸、吸水纸等。纸等。四、实验步骤四、实验步骤一、平板皿底标记姓名、日

6、期、组别、样品来一、平板皿底标记姓名、日期、组别、样品来 源等，字体要小。源等，字体要小。二、实验室空气及空气传播微生物的检查：二、实验室空气及空气传播微生物的检查：（1 1）空气）空气（2 2）口腔）口腔（3 3）头发）头发四、实验步骤四、实验步骤三、人体体表及钱币上微生物的检查三、人体体表及钱币上微生物的检查（1 1）无菌操作技术）无菌操作技术u各种培养基、玻璃器皿等进行高压蒸汽灭菌；接各种培养基、玻璃器皿等进行高压蒸汽灭菌；接种环、接种针用火焰灼烧灭菌。种环、接种针用火焰灼烧灭菌。u实验台用实验台用0.25%0.25%新洁尔灭溶液擦拭。新洁尔灭溶液擦拭。u火焰火焰3cm3cm区是无菌区，

7、无菌操作均需在此范围区是无菌区，无菌操作均需在此范围内。内。四、实验步骤四、实验步骤三、人体体表及钱币上微生物的检查三、人体体表及钱币上微生物的检查（2 2）人体体表和钱币上微生物的检查）人体体表和钱币上微生物的检查u平板标注；平板标注；u无菌操作法取无菌水、皮肤表面、手指、鼻腔、无菌操作法取无菌水、皮肤表面、手指、鼻腔、钱币上微生物，划线培养。钱币上微生物，划线培养。四、实验步骤四、实验步骤四、记录结果四、记录结果u菌落计数；菌落计数；u菌落形态观察。菌落形态观察。五、实验报告五、实验报告一、按下表所列各项将实验结果填入一、按下表所列各项将实验结果填入二、与其它同学所做的结果进行比较二、与其

8、它同学所做的结果进行比较六、思考题六、思考题u比较各种来源的样品，哪一种样品的平比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多：板菌落数与菌落类型最多：u实验室空气与飞沫的样品有无类型相同实验室空气与飞沫的样品有无类型相同的菌落？为什么？的菌落？为什么？u通过本次实验，你对环境中的微生物分通过本次实验，你对环境中的微生物分布有何认识？为什么在进行微生物学时布有何认识？为什么在进行微生物学时要严格按照无菌操作进行？要严格按照无菌操作进行？实验二 细菌形态的观察u实验目的实验目的u实验原理实验原理u实验材料实验材料u实验步骤实验步骤u实验结果实验结果u思考题思考题一、实验目的一、实验目的

9、u认识细菌的基本形态；认识细菌的基本形态；u学习掌握细菌压滴片和悬滴片的制学习掌握细菌压滴片和悬滴片的制作方法。作方法。二、实验原理二、实验原理u压滴法：将细菌悬液滴于载玻片中央，压滴法：将细菌悬液滴于载玻片中央，加上盖玻片，置于显微镜下观察。加上盖玻片，置于显微镜下观察。研究微生物形态最简单、最基本的方法研究微生物形态最简单、最基本的方法之一。之一。u悬滴法：将细菌悬液滴于盖玻片中央，悬滴法：将细菌悬液滴于盖玻片中央，翻转，置于凹玻片的凹窝中央。翻转，置于凹玻片的凹窝中央。用用于观察并区别细菌运动的方式，也可观于观察并区别细菌运动的方式，也可观察细菌的繁殖方式、孢子萌发等。察细菌的繁殖方式、

10、孢子萌发等。三、实验材料三、实验材料u菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、福氏志贺氏菌。草芽孢杆菌、福氏志贺氏菌。u用具：显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻用具：显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、纱布、镜头纸、镊子、特片、接种环、纱布、镜头纸、镊子、特种铅笔、无菌水、凡士林油、打火机、种铅笔、无菌水、凡士林油、打火机、火柴、酒精灯、玻片架、香柏油、二甲火柴、酒精灯、玻片架、香柏油、二甲苯、苯、0.85%NaCl0.85%NaCl。四、实验步骤四、实验步骤 一、压滴标本制作一、压滴标本制作（1 1）记号笔标记载玻片；）记号笔标记载玻片；（2 2）点燃酒

11、精灯，无菌水滴于拨片中央；）点燃酒精灯，无菌水滴于拨片中央；（3 3）无菌操作取菌，与无菌水中，涂匀；）无菌操作取菌，与无菌水中，涂匀；（4 4）用镊子取盖玻片，由一端与载玻片菌液）用镊子取盖玻片，由一端与载玻片菌液 接触，轻轻放下，注意不要有气泡；接触，轻轻放下，注意不要有气泡；（5 5）置于显微镜下观察。）置于显微镜下观察。四、实验步骤四、实验步骤 二、悬滴标本制作二、悬滴标本制作（1 1）取清洁的凹玻片和盖玻片各一枚；）取清洁的凹玻片和盖玻片各一枚；（2 2）用火柴去少许凡士林涂于盖玻片的四角；）用火柴去少许凡士林涂于盖玻片的四角；（3 3）在盖玻片的中央用接种环蘸取一小滴无）在盖玻片的

12、中央用接种环蘸取一小滴无 菌水，然后无菌水，然后无 菌操作去少许菌苔在水滴上轻沾一下，注意水滴大小要菌操作去少许菌苔在水滴上轻沾一下，注意水滴大小要 适宜，放菌苔时不要使水滴破散；适宜，放菌苔时不要使水滴破散；（4 4）将凹玻片翻转向下，使凹窝中央对准盖玻片中央液滴，）将凹玻片翻转向下，使凹窝中央对准盖玻片中央液滴，然后轻压，使凹玻片与盖玻片粘合紧密，避免蒸发，然后然后轻压，使凹玻片与盖玻片粘合紧密，避免蒸发，然后很快将凹玻片翻转，使盖片向上；很快将凹玻片翻转，使盖片向上；（5 5）置于显微镜下观察。）置于显微镜下观察。五、实验报告五、实验报告一、试述油镜的使用方法；一、试述油镜的使用方法；二

13、、描述所观察的细菌菌苔形态；二、描述所观察的细菌菌苔形态；三、绘图表示细菌的形态。三、绘图表示细菌的形态。六、思考题六、思考题一、怎样观察细菌形态？细菌未染色时，用油一、怎样观察细菌形态？细菌未染色时，用油 镜观察有何困难？镜观察有何困难？二、试述无菌操作的步骤和要领。二、试述无菌操作的步骤和要领。本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请值日生留下值日下次课再见！ 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋电质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀

14、绿等)使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料如伊红美蓝、伊红天青等。 实验二实验二 细菌染色法及微生物的观察细菌染色法及微生物的观察 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法难于辨别细菌细胞的构造。 简单染色法简单染色法 荚膜染色法荚膜染色法的原理是因为荚膜和染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90以上，固染色时一般不加热

15、固定，以免荚膜皱缩变形。 荚膜染色法荚膜染色法芽胞染色法芽胞染色法: : 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状)。芽胞染色法芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 细菌的鞭毛极细，直径一般为1020nm，只有用电子显微镜才能观察到。但是，

16、如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色鞭毛染色的方法很多但其基本原理相同，即在染色前充用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上使鞭毛直径加粗。然后再进行染色。鞭毛染色法鞭毛染色法 革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G)和革兰氏阴性菌(G)两大类，是细菌学上是常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G菌和G菌。G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处

17、理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 革兰氏染色法革兰氏染色法一、实验目的和内容一、实验目的和内容目的：巩固无菌操作技求，掌握细菌及其结 构的染色技术。内容：1、学习细菌单染色操作技术。 2、学习革兰氏染色技术。3、学习细菌的荚膜、芽孢及鞭毛染色 方法。 二、实验材料和用具二、实验材料和用具 1、单染色法：、单染色法：（1）菌种：细菌：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 放线菌： 真菌：酵母 霉菌：黑曲霉、黑根霉菌（2）染料：吕氏美蓝染色液、齐氏石炭酸复红染色液、乳酸石碳酸棉兰、香柏油、二甲苯、无菌水（3）显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签。 2、荚

18、膜染色：、荚膜染色： (1)菌种：褐球固氮菌菌种：褐球固氮菌 (2)硼酸钠美兰染色液、石炭酸复红染色液、硼酸钠美兰染色液、石炭酸复红染色液、黑色素液；绘图墨水黑色素液；绘图墨水 (3)载玻片、接种环、洗瓶。载玻片、接种环、洗瓶。 (4)显微镜。显微镜。3、芽孢染色：、芽孢染色：(1)(1)菌种：菌种： 培养培养24 36小时的枯草芽孢杆菌小时的枯草芽孢杆菌 (2)染料：染料： 孔雀绿染色液、蕃红染色液孔雀绿染色液、蕃红染色液 (3)载玻片、接种环、酒精灯、洗瓶、镊子、载玻片、接种环、酒精灯、洗瓶、镊子、 显微镜显微镜(4)香柏油、二甲苯、擦镜纸。香柏油、二甲苯、擦镜纸。4、鞭毛染色：、鞭毛染色

19、：(1)菌种：菌种： 培养培养19-24小时的小时的大肠杆菌大肠杆菌 ；普通变；普通变形菌形菌(2)染料：染料： 新配制的费氏及康氏鞭毛染色液新配制的费氏及康氏鞭毛染色液A和和B。(3)无菌水、无菌空试管、凹玻片。盖玻无菌水、无菌空试管、凹玻片。盖玻片、洁净载玻片、接种环、洗瓶。片、洁净载玻片、接种环、洗瓶。(4) 显微镜显微镜 5、革兰氏染色：、革兰氏染色：（1 1）菌种：）菌种： 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌（大肠杆菌（E.coli）菌液，待测菌菌液）菌液，待测菌菌液l 2种；种；（2 2）染料：）染料： 革兰氏染色试剂盒革兰氏染色试

20、剂盒(结晶紫染液、卢戈氏结晶紫染液、卢戈氏碘液、碘液、95乙醇、石炭酸复红液等乙醇、石炭酸复红液等)、（3 3）香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接）香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。酒精灯。三、操作步骤三、操作步骤 1、单染色法、单染色法 （1）涂片）涂片 在洁净无脂的载玻片中央滴一在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水（图小滴无菌水（图4- -10a），用无菌操作方法），用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约涂成薄膜，涂布面积约11.5cm2。

21、 （2）干燥）干燥 将涂片于室温中自然干燥。将涂片于室温中自然干燥。 （3）固定）固定 手执载片手执载片端，使涂菌的一面端，使涂菌的一面向上，将载片通过微火向上，将载片通过微火2 3次。在火上固定次。在火上固定时，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不时，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片在火上烤，否则细菌形态毁坏能将载片在火上烤，否则细菌形态毁坏(图图4-10c)。（4）染色）染色 将涂片置于水平位置，滴加染色液覆将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂菌处，染色约盖于涂菌处，染色约2min(图图4-10d)。 （5）水洗）水洗 倾去染色液，斜置载片，用自来水的倾去染色液，斜置载片，用自来水的

22、细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止(图图4-10e)。 （6）干燥）干燥 自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体意不要擦掉菌体(图图4-10f)。 （7）待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观）待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。 图410 单染色方法 （二）荚膜染色法（二）荚膜染色法1石炭酸复红染色石炭酸复红染色(1)取培养了取培养了72

23、h的褐球固氮菌制成涂片，自然干燥的褐球固氮菌制成涂片，自然干燥(荚膜是多糖类物质，不可用火焰烘干荚膜是多糖类物质，不可用火焰烘干)。(2)滴入滴入1 2滴滴95乙醇固定乙醇固定(不可加热固定不可加热固定)。(3)加石炭酸复红染液染色加石炭酸复红染液染色12min，水洗，自然干，水洗，自然干燥。燥。(4)在载玻片一端加一滴墨汁，另取一块边缘光滑的在载玻片一端加一滴墨汁，另取一块边缘光滑的载玻片与墨汁接触，在以匀速推向另一端，涂成载玻片与墨汁接触，在以匀速推向另一端，涂成均匀的一薄层，自然干燥。均匀的一薄层，自然干燥。(5)干燥后用油镜观察。菌体红色，荚膜无色，背景干燥后用油镜观察。菌体红色，荚膜

24、无色，背景黑色。黑色。 2荚膜背景染色法荚膜背景染色法(1)先加先加1滴墨水于洁净的玻片上，并挑少量褐滴墨水于洁净的玻片上，并挑少量褐球固氮菌与之充分混合均匀。球固氮菌与之充分混合均匀。(2)放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸收多余的片上放一张滤纸，向下轻压，吸收多余的菌液。菌液。(3)干燥后用油镜观察。背景灰色，菌体较干燥后用油镜观察。背景灰色，菌体较暗在其周围呈现一明亮的透明圈即荚膜暗在其周围呈现一明亮的透明圈即荚膜。 （三）（三） 革兰氏染色法革兰氏染色法 1、制片、制片 （1 ） 涂菌涂菌 用无菌操作方法从试管中沾取菌液

25、一用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。菌。 （2）干燥）干燥 于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高温度不宜过高)。 （3）固定）固定 目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片面向便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片面向上，通过火焰上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧次

26、，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。焦、变形。此制片可用于染色。2、染色、染色（1）初染：于制片上滴加结晶紫染液，染）初染：于制片上滴加结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。后，用水洗去剩余染料。（2）滴加卢戈氏碘液，）滴加卢戈氏碘液，1min后水洗：后水洗：（3）滴加）滴加95乙醇脱色，摇动玻片至紫色不乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时根据涂片之厚薄需时30s至至1min)。（4）复染）复染 滴加石炭酸复红液复染滴加石炭酸复红液复染1min，水，水洗。洗。（5）用滤纸吸干，油镜镜检。）用滤纸吸干，油镜镜检。 3、结果、结果

27、革兰氏阳性菌染成篮紫色，革兰氏阴性革兰氏阳性菌染成篮紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。菌染成淡红色。4、检测未知菌、检测未知菌用以上方法对未知面进行革兰氏染色，用以上方法对未知面进行革兰氏染色，并绘图、记录染色结果。并绘图、记录染色结果。 （四）鞭毛染色法（四）鞭毛染色法 1方法一：方法一：（1）用接种环由培养）用接种环由培养1820h的的平板上平板上取取大大肠杆菌肠杆菌菌体少许，用菌滴制片法检查细菌菌体少许，用菌滴制片法检查细菌的运动性。如果菌体的运动性很强，则可的运动性。如果菌体的运动性很强，则可作鞭毛染色。作鞭毛染色。（2）用）用3 4mL无菌水，将培养体洗下，移入无菌水，将培养体洗下，移入

28、另一无菌试管中，适温培养另一无菌试管中，适温培养10min，再检查，再检查运动性。运动性。（3）用无菌吸管由悬液上部取一小滴，置于一清洁）用无菌吸管由悬液上部取一小滴，置于一清洁载玻片的一端，将玻片倾斜。使菌液由一端流向载玻片的一端，将玻片倾斜。使菌液由一端流向另外一端。于是在玻片上做成另外一端。于是在玻片上做成23条菌液带。待条菌液带。待水膜自然干燥（切勿用火焰烘）。水膜自然干燥（切勿用火焰烘）。（4）用刚刚过滤的鞭毛染色液）用刚刚过滤的鞭毛染色液A染色染色5min(不要加不要加热热)。（5）倾去）倾去A液，加鞭毛染色液液，加鞭毛染色液B染色染色10min。用蒸。用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。馏水

29、轻轻冲洗，晾干。（6）用齐氏石炭酸复红染色）用齐氏石炭酸复红染色23min。轻轻冲洗，。轻轻冲洗，晾干晾干(不能用吸水纸吸干不能用吸水纸吸干)。（7）先用低倍镜，再用高倍镜，最后用油镜检查。）先用低倍镜，再用高倍镜，最后用油镜检查。 2方法二：方法二：（1）制涂片：先加少量无菌蒸馏水于凹载玻片的凹）制涂片：先加少量无菌蒸馏水于凹载玻片的凹窝中再从培养窝中再从培养10h左右的斜面菌苔上取菌一环，左右的斜面菌苔上取菌一环，轻放在凹窝水面上轻放在凹窝水面上(不要搅动不要搅动)，放，放30度温箱静置度温箱静置510min取出，从凹窝水面上轻轻取菌液一环，取出，从凹窝水面上轻轻取菌液一环，轻放在干净的载

30、玻片上轻放在干净的载玻片上(不要涂抹不要涂抹)，放回温箱，放回温箱，让其自然干燥让其自然干燥(不要加热固定不要加热固定)。（2）染色：在自然干燥的涂片上，滴加含石炭酸的）染色：在自然干燥的涂片上，滴加含石炭酸的鞭毛染色液一滴，染色鞭毛染色液一滴，染色5min，用水轻轻冲洗，让，用水轻轻冲洗，让其自然干燥。其自然干燥。（3）镜检：用油镜观察。）镜检：用油镜观察。 五）芽孢染色法五）芽孢染色法1方法一：方法一：(1)取取37培养培养18 24h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定。固定。(2)于载片上滴人于载片上滴人3 5滴滴5孔雀绿水溶液。孔雀绿水溶液。(3)用试管夹

31、夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约片上出现蒸汽时，开始计算时间约45min。加热。加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。(4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。不再褪色为止。(5)用用0.5沙黄水溶液沙黄水溶液(或或0.05碱性复红碱性复红)复染复染1min，水洗。水洗。(6)制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色。制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色。2方法二：方法二：(1)加加12滴自

32、来水于小试管中，用接种环从斜面上滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取挑取23环培养环培养1824h的枯草芽孢杆菌菌苔于试的枯草芽孢杆菌菌苔于试管中，并充分均匀打散，制成浓稠的菌液。管中，并充分均匀打散，制成浓稠的菌液。 (2)加加5孔雀绿水溶液孔雀绿水溶液23滴于小试管中用接种滴于小试管中用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。环搅拌使染料与菌液充分混合。 (3)将此试管浸干沸水浴将此试管浸干沸水浴(烧杯烧杯)中，加热中，加热1520min。(4)用接种环从试管底部挑数环菌于洁净的载玻片上，用接种环从试管底部挑数环菌于洁净的载玻片上，并涂成薄膜，将涂片经过微火并涂成薄膜，将涂片经过微火3次固定。

33、次固定。(5)水洗，至流出的水中无孔雀绿颜色为止。水洗，至流出的水中无孔雀绿颜色为止。(6)加番红水溶液，染加番红水溶液，染23min后，倾去染液，不用后，倾去染液，不用水洗。水洗。(7)干燥后用油镜观察。芽孢绿色，菌体红色。干燥后用油镜观察。芽孢绿色，菌体红色。 四、注意事项四、注意事项1载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄，切忌过厚。要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄，切忌过厚。2在染色过程中，不可使染液干涸。在染色过程中，不可使染液干涸。3在革兰氏染色过程中脱色时间十分重要，过长，则脱色在革兰氏染色过程中脱

34、色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌，另外，老龄菌因体内核过度，会使阳性菌被染成阴性菌，另外，老龄菌因体内核酸减少，会使阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。酸减少，会使阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。3 荚膜染色涂片不要用加热固定，以免荚膜皱缩变形。荚膜染色涂片不要用加热固定，以免荚膜皱缩变形。4 鞭毛染色液最好当日配置，次日使用则鞭毛染色浅，观鞭毛染色液最好当日配置，次日使用则鞭毛染色浅，观察效果差。染色时一定要充分洗净察效果差。染色时一定要充分洗净A液后再加液后再加B液，否则液，否则背景不清晰。背景不清晰。5供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留供芽孢染色用的菌种

35、应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜。在菌体上为宜。 五、实验报告五、实验报告(一一)绘图绘图1单染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的单染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图。形态图。2大肠杆菌革兰氏染色视野图。大肠杆菌革兰氏染色视野图。3金黄色葡萄球菌革兰氏染色视野图。金黄色葡萄球菌革兰氏染色视野图。4褐球固氮菌菌体及荚膜的形态。褐球固氮菌菌体及荚膜的形态。4绘出你所观察到的细菌的形态及鞭毛着生情况。绘出你所观察到的细菌的形态及鞭毛着生情况。6枯草芽孢杆菌及巨大芽孢杆菌的菌体及芽孢形态，枯草芽孢杆菌及巨大芽孢杆菌的菌体及芽孢形态，芽孢的着生位置。芽孢的着生位置。(二二)单染

36、色法操作要点。单染色法操作要点。(三三)记录革兰氏染色法法步骤，并进行结果分析。记录革兰氏染色法法步骤，并进行结果分析。 六、问题和思考六、问题和思考1涂片在染色前为什么要先进行固定涂片在染色前为什么要先进行固定?固定时应注意什么固定时应注意什么问题问题?2制备染色装片时应注意哪些事项，为什么制备染色装片时应注意哪些事项，为什么?制片为什么制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？要完全干燥后才能用油镜观察？3什么是革兰氏染色法什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么染色过程应注意什么?4试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。5组成荚膜的成分是什么组成荚膜的成分

37、是什么?涂片一般用什么固定方法，为涂片一般用什么固定方法，为什么什么?6鞭毛染色的菌种为什么要先连续传几代，并且要采用鞭毛染色的菌种为什么要先连续传几代，并且要采用幼龄菌种幼龄菌种?7根据你的实验体会，哪些因素影响鞭毛染色的效果根据你的实验体会，哪些因素影响鞭毛染色的效果?如如何控制何控制?一、实验目标与基本要求一、实验目标与基本要求 学习并掌握酵母菌观察方法。学习并掌握酵母菌观察方法。 二、实验内容二、实验内容 制作酵母菌常规涂片，染色并用油镜观察菌制作酵母菌常规涂片，染色并用油镜观察菌体。体。实验三实验三 酵母菌的形态观察酵母菌的形态观察 个体形态与出芽生殖个体形态与出芽生殖 用水浸片法观

38、察，根据酵母菌是否染上兰用水浸片法观察，根据酵母菌是否染上兰色可以区别细胞的死活（这里的利用美蓝是色可以区别细胞的死活（这里的利用美蓝是一种弱的氧化剂，还原后变为无色的特性，一种弱的氧化剂，还原后变为无色的特性，活细胞具有还原力，故将其还原活细胞具有还原力，故将其还原 变为无色）。变为无色）。酵母菌的芽殖过程酵母菌的芽殖过程 1泡；泡；2小管；小管；3核；核；4液泡液泡 三、实验步骤：三、实验步骤：四、实验报告四、实验报告绘图绘图数个酵母菌细胞，示观察到的结构。数个酵母菌细胞，示观察到的结构。一、实验教学目标基本与要求一、实验教学目标基本与要求 1 1、明确培养基的配制原理。、明确培养基的配制

39、原理。 2 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。、掌握配制培养基的一般方法和步骤。 二、实验内容二、实验内容 1 1、介绍培养基的配制原理和方法步骤、介绍培养基的配制原理和方法步骤 2 2、动手称量试剂、配制牛肉蛋白胨培养、动手称量试剂、配制牛肉蛋白胨培养基等基等。 实验四 微生物培养基的制备三、实验材料每组准备：每组准备： 试管：试管：1414个个 (8(8个制备斜面培养基个制备斜面培养基) ) (6 (6个各装个各装9mL9mL纯净水高压纯净水高压) ) 三角烧瓶：三角烧瓶：4 4个个 (1(1个装个装90mL90mL纯净水高压纯净水高压, ,其它三个分别装三种培养基高压其它三个分别装三种

40、培养基高压) ) 平板：平板：9 9个个 ( (营养琼脂，高氏一号，马丁营养琼脂，高氏一号，马丁氏培养基平板氏培养基平板 各三个各三个) ) 吸管：吸管：5 5支支( (顶部塞好棉花，用牛皮纸包好顶部塞好棉花，用牛皮纸包好高压高压) ) 三角涂棒：三角涂棒：3 3支支( (牛皮纸包好高压牛皮纸包好高压) ) 培养基配方：四、实验内容牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂）：培养细菌用取样品3.8g 加蒸馏水至100mL 加热溶解，分装斜面，剩下的高压倒平板。（共配液体100mL）倒3个平板（每个平板倒20mL，共60mL）剩下的制备斜面培养基（每管5mL）。 高氏一号平板：培养放线菌 取样品3.53g

41、加蒸馏水至100mL 加热溶解，分装斜面，剩下的高压倒平板。 （共配液体100mL）倒3个平板（每个平板倒20mL，共60mL）剩下的制备斜面培养基（每管5mL）。 马丁氏培养基：培养霉菌用 取样品4.17g 加蒸馏水至100mL 加热溶解，分装斜面，剩下的高压倒平板。（共配液体100ml）倒3个平板（每个平板倒20mL，共60mL）剩下的制备斜面培养基（每管5mL）。四、实验内容（一）、培养基的配制：同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。 操作图示

42、：1.1.称量称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。杯中。 2.2.配调配调 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。（可加热助溶）。称量称量-配置配置-调节调节pH值值-过滤过滤-分装分装-灭灭菌菌TipsTips： 如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷如果配方中含有淀粉，先将淀粉

43、用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。3.3.调节调节pHpH值值 培养基溶解均匀并冷却至室温时用培养基溶解均匀并冷却至室温时用pHpH试纸试纸测测pHpH，然后根据要求加酸或碱（一般用，然后根据要求加酸或碱（一般用1MHcl1MHcl和和1MNaOH1MNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然配方为自然pHpH时，不用调节。（时，不用调节。（我们使用的是我们使用的是合成的干粉培养基，无需调合成的干粉培养基，无需调phph） 4

44、.4.过滤过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。（可省去。（合成干粉培养基无需过滤合成干粉培养基无需过滤）5.5.分装分装 将制好的培养基分装入试管内、平板或三角将制好的培养基分装入试管内、平板或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：污染。分装量可分为下面几方面：（1 1）斜面：装量为管长的）斜面：装量为管长的1/4-1/5 1/4-1/5 （8mL8mL）。）。（2 2）液体培养基

45、、高层培养基、半固体培养基：）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的装载量不超过管长的1/31/3。（3 3）三角瓶：装量不超过容积）三角瓶：装量不超过容积1/21/2。6.6.灭菌灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。塞棉塞，包扎，灭菌。高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于于100100度的蒸汽温度（一般采用度的蒸汽温度（一般采用121 20min 121 20min 灭灭菌）。菌）

46、。3注意事项：u 本实验使用调配好的“干燥培养基”，这种培养基是将新鲜配制的液体培养基用喷雾干燥法，真空干燥法，低温干燥法或蒸发干燥法等将培养基内所含的水分去掉；或将培养基内的各种固形成分，经适当处理，充分混匀，便成干燥粉末而成。使用时只要按比例加入一定量的水，经溶解，无需调pH，分装，高压蒸汽灭菌，即可使用。u “干燥培养基”成品很容易吸潮，在称量时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再取另一种药品。瓶盖也不要盖错。u 在烧杯融化琼脂的过程中，人要在电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。注意带上棉纱

47、手套防止烫伤。u 分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。四、实验内容（二）培养基灭菌 培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121，15-20分钟，干热灭菌为160-170，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热

48、情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。四、实验内容（三）包扎1培养皿：以牛皮纸包紧，一般以6套做一包，待灭菌。2吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60角，并将右端多余的报纸打一小结。3三角涂棒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端，与报纸约呈45角，并将右端多余的报纸打一小结。四、实验内容四、实验报告四、实验报告记录本实验配制

49、培养基的名称、数量，并图解记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。说明其配制过程，指明要点。五、问题和思考五、问题和思考 l l配制培养基有哪几个步骤配制培养基有哪几个步骤? ?在操作过程中在操作过程中应注意些什么问题应注意些什么问题? ?为什么为什么? ? 2 2培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌? ?若不能及时灭菌应如何处理若不能及时灭菌应如何处理? ?已灭菌的培养基如已灭菌的培养基如何进行无菌检查何进行无菌检查? ?实验六实验六 消毒与灭菌消毒与灭菌一、实验教学目标与基本要求一、实验教学目标与基本要求 了解消毒和灭菌的原理，

50、掌握各种灭菌了解消毒和灭菌的原理，掌握各种灭菌方法的操作步骤。方法的操作步骤。 二、实验内容：二、实验内容： 1干热灭菌法干热灭菌法 2高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 3紫外线灭菌法紫外线灭菌法三、实验步骤三、实验步骤（一）干热（一）干热灭菌法灭菌法1、原理、原理 利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌而达到灭菌的的目的。目的。 所需温度所需温度(160-170)，时间长时间长(1-2h)。注：注：干热灭菌温度不能超过干热灭菌温度不能超过180，否则否则，包包器皿的纸或棉塞就会烧焦器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。甚至引起燃烧。 2、步骤、步骤恒温

51、恒温降温降温开箱取物开箱取物升温升温装入待灭菌物品装入待灭菌物品（二）（二）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 1、原理、原理 利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。质凝固变性而达到灭菌的目的。 一般培养基用一般培养基用0.1Mpa，121.5,1530min 2、步骤、步骤加水加水装待灭装待灭菌物品菌物品加盖加

52、盖加热加热灭菌时间到后灭菌时间到后断电源断电源压力降为零压力降为零开箱取物开箱取物（三）紫外线灭菌法（三）紫外线灭菌法1 1、原理、原理 紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和腺嘧啶二聚体的形成和DNA DNA 链的交联，从而链的交联，从而抑制了抑制了DNA DNA 的复制。另一方面，由于辐射能的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成使空气中的氧电离成OO，再使，再使O O2 2 氧化生成氧化生成臭氧或使水氧化生成臭氧或使水氧化生成H H2 2O O2 2。O O3 3 和和H H2 2O O2 2 均有均有杀菌作用。杀菌作用。 适用于无

53、菌室，接种箱，手术室内的空适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。气及物体表面的灭菌。2 2、步骤、步骤 1 1）单用紫外灯）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射灯开关，照射30min30min，将开关关闭。，将开关关闭。 2 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液，在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液，再用紫外线灯照射再用紫外线灯照射15imn15imn四、实验报告四、实验报告 记录无菌检查结果记录无菌检查结果五、问题和思考五、问题和思考 1.1.高压蒸气灭菌开始之前，

54、为什么要将锅内高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽冷空气排尽? ?灭菌完毕后，为什么待压力灭菌完毕后，为什么待压力降低降低“0 0”时才能打开排气阀，开盖取物？时才能打开排气阀，开盖取物？ 2.2.过滤除菌应注意哪些问题过滤除菌应注意哪些问题? ?实验七实验七 微生物接种技术微生物接种技术一、教学目标与基本要求：一、教学目标与基本要求： 掌握各种微生物接种的基本操作技术。掌握各种微生物接种的基本操作技术。 二、实验内容二、实验内容 1斜面接种斜面接种 2液体接种液体接种 3穿刺接种穿刺接种 4平板接种平板接种三、实验步骤三、实验步骤 将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一将有菌的材料或纯

55、粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。无菌的培养基上，这个过程就称为接种。 常用的几种方法如下：常用的几种方法如下：斜面接种斜面接种液体接种液体接种穿刺接种穿刺接种平板接种平板接种1.1.斜面接种：斜面接种： 从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物的接种。管的方法。此法用于好气性微生物的接种。 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，用右手的小指、无名

56、指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。，沿斜面划曲线或直线。斜面接种示意图斜面接种示意图2.2.液体接种：液体接种： 由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。瓶等）中的方法。 操作与上法基本一致，只是在将接种环送入操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻

57、轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。轻摇动均匀，即可培养。 如果菌种是培养在液如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。3.3.穿刺接种：穿刺接种： 用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。4.4.平板接种：平板接种： 将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的是观察菌落形态、分离纯化菌种，

58、活菌计数以是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方法，可分为下面几种：法，可分为下面几种： 1)1)斜面接平板斜面接平板a.a.划线法：见平板划线分离法。划线法：见平板划线分离法。b.b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点可点3-43-4点）即可。点）即可。 2)2)平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培养的单菌落接

59、种到斜面，以便作鉴定或扩大培养、保存之用。、保存之用。 实验五微生物生长，数量及大小的检测微生物生长，数量及大小的检测 一、目的要求 学会用血球计数器测定酵母菌细胞数 学习和掌握用测微尺测量微生物细胞大小的方法二、基本原理 微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 微生物细胞的大小

60、是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具即测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。三、实验材料1.酵母菌液2.显微镜、血球计数器、目镜测微尺、镜台测微尺3.载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等 图5-1 Thoma血球计数板 A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室 图5-2 计数室的刻度形式16小格 25大格计数室四、实验内容一.酵母菌数量的检测1. 显微镜直接计数法（每人1片）注意事项:A. 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气 泡产生。B. 调节显微镜光线的强弱适当。1mL 菌液中的总菌数=A/5 *25