实验二微生物培养基的配制和灭菌ppt课件

1、实实 验验 二二微生物培育基的配制和微生物培育基的配制和灭菌灭菌一、实一、实 验验 目目 的的n了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制过了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制过程。程。n掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其运用方法。掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其运用方法。一培育基的配制一培育基的配制二二. .实实 验验 原原 理理1. 培育基是供微生物生长、繁衍、代谢的混合养料。不同微生物对营养物质的要求各不一样，加之实验和研讨的目的不同，所以培育基的种类很多，运用的原料也各有差别，但从营养角度分析，培育基中普通含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培育基还应具有适宜的pH值、一

2、定的缓冲才干、一定的氧化复原电位及适宜的浸透压。 n培育基按成分可分为天然培育基、合成培育基和半合成培育基；按物理形状可分为固体培育基、半固体培育基0.2%0.5%的琼脂和液体培育基；按用途可分为根底培育基、营养培育基、鉴别培育基和选择培育基等。n培育基培育基n 是指由人工配制的、适宜微生物生长繁衍或产是指由人工配制的、适宜微生物生长繁衍或产生代谢产物用的混合营养料。生代谢产物用的混合营养料。培育基简介培育基简介碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水营养物质的浓度要适宜营养物质的浓度要适宜营养物质之间的配比要适宜营养物质之间的配比要适宜培育基的培育基的pH

3、值、浸透压、值、浸透压、水活度和氧化复原电势等水活度和氧化复原电势等物理化学条件要适宜。物理化学条件要适宜。细菌：细菌： pH 7.08.0放线菌：放线菌：pH 7.58.5酵母菌：酵母菌： pH 3.86.0霉菌：霉菌：pH 4.05.8藻类：藻类： pH 6.07.0原生动物：原生动物： pH 6.08.0初始初始pHpH通常培育条件：通常培育条件：培育基的种类培育基的种类按照培育基的物理形状可分为按照培育基的物理形状可分为 1.1.液体培育基：不加凝固剂的液体形状培育基。液体培育基：不加凝固剂的液体形状培育基。 2.2.固体培育基：在液体培育基中参与固体培育基：在液体培育基中参与2%2%

4、左右的凝固剂的固左右的凝固剂的固体形状的培育基。体形状的培育基。 3.3.半固体培育基：在液体培育基中参与半固体培育基：在液体培育基中参与0.20.5%0.20.5%凝固剂凝固剂而成的半固体状培育基。而成的半固体状培育基。 琼脂是最优良的凝固剂，自琼脂是最优良的凝固剂，自18801880年开场用于配制微年开场用于配制微生物培育基以来，至今经久不衰。生物培育基以来，至今经久不衰。实验室的常用培育基：实验室的常用培育基：细菌：细菌： 牛肉膏蛋白胨培育基；牛肉膏蛋白胨培育基；放线菌：高氏放线菌：高氏1 1号合成培育基培育；号合成培育基培育；酵母菌：麦芽汁培育基；酵母菌：麦芽汁培育基；霉菌：霉菌： 查

5、氏合成培育基；查氏合成培育基；称量称量-配置配置-调理调理pHpH值值-过滤过滤-分装分装-灭菌灭菌1.1.称量称量 按照培育基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不按照培育基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状如肉膏，运用烧杯称量。是粉状如肉膏，运用烧杯称量。培育基配制的根本步骤培育基配制的根本步骤2.2.配调配调 向烧杯中参与适量的水，搅拌，使其溶解可加热助溶。向烧杯中参与适量的水，搅拌，使其溶解可加热助溶。 如是配制固体培育基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并如是配制固体培育基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培育基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失控制火力不要使培育基

6、溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。水分。 假设配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在假设配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。所失水分。3.3.调理调理pHpH值值 培育基溶解均匀并冷却至室温时用培育基溶解均匀并冷却至室温时用pHpH试纸测试纸测pHpH，然后根，然后根据要求加酸或碱普通用据要求加酸或碱普通用1molHcl1molHcl和和1molNaOH1molNaOH，要缓慢少量，要缓慢少量且多加搅拌。培育基配方为自然且多加搅拌。培育基配方为自然pHp

7、H时，不用调理。时，不用调理。 4.4.过滤过滤 用滤纸或多层纱布过滤，普通无特殊要求可省去。用滤纸或多层纱布过滤，普通无特殊要求可省去。5.5.分装分装 将制好的培育基分装入试管内或三角瓶内，管瓶将制好的培育基分装入试管内或三角瓶内，管瓶口塞上棉塞。固体培育基要趁热装。口塞上棉塞。固体培育基要趁热装。 分装时要防止培育基粘染管瓶口，引起污染。分分装时要防止培育基粘染管瓶口，引起污染。分装量可分为下面几方面：装量可分为下面几方面：1 1斜面：装量为管长的斜面：装量为管长的1/4-1/51/4-1/5。2 2液体培育基、高层培育基、半固体培育基：装载量不液体培育基、高层培育基、半固体培育基：装载

8、量不超越管长的超越管长的1/31/3。3 3三角瓶：装量不超越容积三角瓶：装量不超越容积1/21/2。6.6.灭菌灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。塞棉塞，包扎，灭菌。 高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进展，加热高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进展，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，添加了器内的压力，使使器内的水产生蒸汽，由于密闭，添加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于水的沸点升高，从而获得高于100100度的蒸汽温度。度的蒸汽温度。牛肉膏蛋白胨固体培育基配方：牛肉膏蛋白胨固体培育基配方：牛肉膏牛肉膏 0.3g 0.3g 蛋白胨蛋白胨 1g 1g 氯化钠氯化钠 0.5g 0.5g 琼脂

9、琼脂 2g 2g 水水 100mL 100mL pH pH 7.27.4 7.27.4 灭菌灭菌 121121，20min20min牛肉膏蛋白胨半固体培育基配方：牛肉膏蛋白胨半固体培育基配方： 琼脂琼脂 0.3g牛肉膏蛋白胨液体培育基配方：牛肉膏蛋白胨液体培育基配方： 琼脂琼脂 0g牛肉膏蛋白胨培育基的配制牛肉膏蛋白胨培育基的配制1 1、固体培育基平板制造、固体培育基平板制造2 2、固体培育基斜面制造、固体培育基斜面制造2 2、半固体培育基、半固体培育基3 3、液体培育基、液体培育基三三. .操作步骤及本次实验详细安排操作步骤及本次实验详细安排一平板固体培育基制造一平板固体培育基制造 1. 1

10、. 按配方称取各组分按配方称取各组分( (按按100ml100ml计算计算) )到的三角瓶中到的三角瓶中. . 2. 2. 参与参与100mL100mL水水. . 3. 3. 在酒精灯上完全融化，取部分制造斜面培育基在酒精灯上完全融化，取部分制造斜面培育基 3. 3.其他部分塞上硅胶塞其他部分塞上硅胶塞, ,用牛皮纸包扎好用牛皮纸包扎好; ; 4. 4.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 5. 5.灭菌后灭菌后, ,当培育基冷却至当培育基冷却至5050左右时左右时, ,倾注平皿倾注平皿( (每每100ml100ml可制备可制备5-65-6个平皿个平皿) ) 6. 6.凝固后放冰箱备用凝固后放冰箱备用 二

11、斜面培育基制造二斜面培育基制造1. 1. 在空试管内倒入在空试管内倒入2 23mL3mL上述曾经溶解好的培育基，上述曾经溶解好的培育基，【留意尽量不要让培育基沾到试管口】塞好硅胶塞【留意尽量不要让培育基沾到试管口】塞好硅胶塞. .2.2.放入烧杯中放入烧杯中, ,高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌. .3.3.摆斜面摆斜面, ,凝固后放冰箱备用凝固后放冰箱备用. .用于活化菌种，或培育菌种的斜面用于保管菌种的斜面搁置斜面搁置斜面 当培育基冷却至当培育基冷却至5050左右时，将试管带棉塞的一左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要适宜，使培育基构成的端搁在一根木棒上。搁置的长度要适宜，使培育

12、基构成的斜面的长度不超越试管总长的一半。斜面的长度不超越试管总长的一半。三液体培育基制造三液体培育基制造1.1.按牛肉膏蛋白胨液体培育基配方称取相应成分到按牛肉膏蛋白胨液体培育基配方称取相应成分到250ml250ml的三的三角瓶中角瓶中. .2. 2. 参与参与100mL100mL水水. .3. 3. 充分溶解充分溶解. .取出取出50ml50ml用于半固体培育基制造用于半固体培育基制造4. 4. 在空试管内倒入在空试管内倒入2 23mL3mL曾经溶解好的培育基，【留意尽量曾经溶解好的培育基，【留意尽量不要让培育基沾到试管口】塞好硅胶塞不要让培育基沾到试管口】塞好硅胶塞. .5.5.放入烧杯中

13、放入烧杯中, ,高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌. .6. 6. 冷却后放冰箱备用冷却后放冰箱备用. .三半固体培育基制造三半固体培育基制造1. 1. 在在25ml25ml液体培育基中参与液体培育基中参与0.3%0.3%的琼脂粉的琼脂粉3. 3. 完全溶解完全溶解. .4. 4. 在空试管内倒入在空试管内倒入2 23mL3mL曾经溶解好的培育基，曾经溶解好的培育基，【留意尽量不要让培育基沾到试管口】塞好硅胶【留意尽量不要让培育基沾到试管口】塞好硅胶塞塞. .5.5.放入烧杯中放入烧杯中, ,高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌. .6.6.凝固后放冰箱备用凝固后放冰箱备用. .注：试管加棉塞注：试管加棉塞( (最

14、好最好) ) 培育基分装终了以后，在管口培育基分装终了以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的加棉塞时，应使棉塞长度的2/32/3在试管口内，如以下图所在试管口内，如以下图所示。示。n配制好后，写好培育基称号、班级、组配制好后，写好培育基称号、班级、组别，再灭菌别，再灭菌n每组留部分同窗等灭菌终了之后，倒固每组留部分同窗等灭菌终了之后，倒固体平板和摆斜面体平板和摆斜面n任何一种培育基一经制成就应及时彻底灭菌，以备任何一种培育基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培育用。普通培育基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。纯培

15、育用。普通培育基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。n常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。n本实验培育基的灭菌常运用的是高压蒸汽灭菌，它本实验培育基的灭菌常运用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而到达是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的。灭菌的。二培育基的灭菌二培育基的灭菌高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌 普通培育基普通培育基: : 1.05 Kg/cm2, 121.

16、3, 15-30 min 1.05 Kg/cm2, 121.3, 15-30 min 含糖培育基含糖培育基: : 0.56 Kg/cm2, 112.6 , 15-30 min 0.56 Kg/cm2, 112.6 , 15-30 min 培育基的灭菌培育基的灭菌器皿的灭菌：器皿的灭菌： 干热空气：干热空气： 160 160， 2 2 小时小时无菌室的消毒：无菌室的消毒： 紫外光紫外光 化学药物熏蒸苯酚；高锰酸钾化学药物熏蒸苯酚；高锰酸钾+ +甲醛甲醛灭菌锅湿热灭菌运用的设备湿热灭菌运用的设备 操作过程操作过程 加水加水装锅装锅盖盖盖盖加热加热当压力升为当压力升为0.5kg/cm20.5kg/cm2时排放冷空气时排放冷空气正式升压正式升压保压保压1.1kg/cm21.1kg/cm2，121121，坚持，坚持20-30min20-30m