纯化水需氧菌检查标准操作规程

1、GM文件纯化水需氧菌检查标准操作规程颁发部门质量部操作标准编号版本00起草人审核人批准人起草时间审核时间批准时间生效日期发送部门质量部、实验室页码第1页共3页目的：建立需氧菌检查法的标准操作规程，保证正确操作。范围：本标准适用于纯化水的需氧菌检查。依据：中国药典2015年版二部。职责：QC检验员对本标准的实施负责。正文：1. 简述微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检査。2. 环境要求微生物计数试验环境应符合微生

2、物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。3. 仪器生物安全柜、洁净工作台、微生物限度检查仪、恒温培养箱、电热恒温水浴锅。4. 设备：滤杯、高压灭菌锅、剪刀、镊子、75%酒精棉球。5. 供试品：取纯化水10mL。备用。6. 实验前准备6.1. 培养基、冲洗液制备方法6.1.1. R2A琼脂培养基：取本品18.2g,加1L纯化水，加热溶解，分装，121C湿热灭菌20min。6.1.2. pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液：pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液干粉16.09g加水1000ml,微温溶解，

3、滤清，121C湿热灭菌20min,6.2. 用具的洗刷6.2.1. 玻璃器皿：如试管、三角瓶等用清洁液浸泡，用流水洗涤，再用纯化水洗涤45次，倒置，晾干。试管、三角瓶等使用过后，应先消毒倒出内容物后，再清洗晾干。精品文档6.22剪刀、镊子用水及去污粉洗涤，用水冲洗干净，再用纯化水洗涤3次。623.洁净服、裤、帽子、口罩等用水洗涤洁净后，晾干。6.3. 用具的包扎及灭菌6.3.1. 洗涤洁净的注射器及适配针头各部件与剪刀、镊子一并入垫有纱布的铝盒内，一层层放好，盖上纱布，将铝盒盖好，用牛皮纸包扎。6.3.2. 试管口塞上胶塞、三角瓶等用8层纱布将瓶口扎紧。6.3.3. 一次性使用枪头用报纸包起来

4、。6.3.4. 将洁净服、等用布口袋配套装入，扎紧口袋，用牛皮纸包扎好。6.3.5. 将0.45卩m滤膜放到滤杯中，过滤部分与杯体连接好后，用纱布包扎好。6.3.6将以上包扎好的用具在121C蒸汽灭菌20分钟。物品灭菌完毕，勿立即置冷处，以免急速冷却导致染菌，应置恒温培养箱中干燥。6.4.洁净室的清洁与灭菌6.4.1. 洁净室及生物安全柜，每周用高锰酸钾加甲醛薰蒸灭菌。6.4.2. 在每次操作前，应作好清洁工作，并用0.2%新洁尔灭溶液或2%来苏尔或75%乙醇擦洗生物安全柜工作台面及可能污染的死角，然后开启紫外线灯杀菌半小时，生物安全柜空气过滤器自净半小时。操作完毕后，用上述消毒液，再次处理工

5、作台面，开紫外光灯杀菌30分钟以上。7. 实验步骤开启传递窗外侧门，将物品表面消毒后置传递窗内，关闭窗门。操作人员按进入洁净室更衣程序洗手、更衣换工作鞋，换无菌衣、裤、口罩。进入洁净室内，开启内侧门，取出物品，关闭内侧门，经缓冲间带入洁净室内，物品放置于实验台上，关闭洁净室门，人员离开洁净室，继续用紫外灯照射半小时，关灯，再将用具放入生物安全柜内。7.1. 供试液的制备取纯化水10ml，加入到90mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液溶液中，振摇，制成1:10的供试液。7.2. 样品检测（薄膜过滤法）取7.1项下制备的供试液10ml，加入90mLpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液溶液，混匀，全量通过薄膜（孔径0.45卩m混合纤维素膜）后，以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液溶液冲洗滤膜3次（100ml/次），平行制备2张滤膜。转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上。32C倒置培养5天，点计菌落数。7.3. 阴性对照组取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液溶液100ml，全量通过薄膜（孔径0.45卩m混合纤维素膜）后，以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液溶液冲洗滤膜3次（100ml/次）,