微量凯氏定氮法测定蛋白质含量试验报告记录

1、微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告记录作者:日期:微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的1 1 . .学习微量凯氏定氮法的原理2 2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术（未知样品的消化、蒸储、滴定及其含氮量的计算等）二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸镂。此过程称为“消化”。此过程进行的相对较为缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化过程：2NH3H2SO4（

2、NH4）2SO4含氮有机物H2SO4，CO2SO2H2ONH3蒸储：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热3蒸储，即可释放出氨气反应方程式如下：(NH4)2SO42NaOH、Na2SO42NH40H吸收与滴定：蒸储所放出的氨，可用硼酸溶液进行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止(即滴定至蓝紫色)，最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。NH3H3BO3，NH4H2BO3NH4H2BO3HCLNH4CLH3BO3三、实验试剂、材料和器材实验材料：食用面粉。实验试剂：浓硫酸、3030 窗氧化钠溶液、克氏催化剂、2

3、%2%口酸、指示剂、0.01MHCL0.01MHCL实验器材：凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸储装置、锥形瓶、100ml100ml容量瓶、酸式滴定管。四、操作步骤1 1 .消化(1)(1)准确称取 1 1 克食用面粉，用称量纸卷好小心送入至 5050 毫升的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上；(2)(2)向另一烧瓶加入 1ml1ml 水作空白对照；在每个烧瓶内加入硫酸钾一硫酸铜混合物(克氏催化剂)少许， 浓硫酸 10ml,10ml,小瓷片两粒，摇匀；(3)(3)将烧瓶约 6060 度角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗，在通风厨内的电炉上消化；(4)(4)在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈；

4、(5)(5)待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出 SO2SO2 白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止；(6)(6)消化完毕，待烧瓶内容物冷却后，加蒸储水 10ml10ml(注意慢加，边加边摇)；(7)(7)冷却后将瓶中内容物转入 100ml100ml 的容量瓶中，并用蒸储水洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度摇匀，做上记号备用。2 2.蒸储(1)(1)蒸储器洗净后，开放水龙头 P3,P3,使水进入 A A 室，水放至 A A 室球部 2/32/3 处即可。(2)(2)取 3 3 个 50ml50ml 的锥形瓶，分别加入 10ml10ml 硼酸(内加有混合指本剂)。用

5、表面皿复盖备用。(3)(3)加样1用移液管吸取 2ml2ml 消化液，小心地由漏斗 D D 倾入 B B 室；2取一个盛有硼酸的锥形瓶，置于 M M 管下，使管口恰好接触硼酸溶液， 用量筒从漏斗 D D 加入 3030 窗氧化钠 5ml,5ml,随即将 P4P4 夹紧,并往漏斗加入少量蒸储水封闭。(4)(4)蒸储用酒精灯加热，维持火力恒定，沸腾不可高于 Y Y 管口以免 A A 室溶液从 Y Y 管倒吸，待第一滴蒸储液从冷凝柱 F F 顶端滴下时起，继续蒸储 5 5 分钟；然后将锥形瓶放低，使导管离开液面再蒸 2 2 分钟，最后用蒸储水洗导管外壁，蒸储完毕，取下锥形瓶准备滴定。(5)(5)空白

6、蒸储用移液管分别吸取 2ml2ml 蒸储水按上述操作步骤进行蒸储。仪器的洗涤：3 3 .滴定(1)(1)蒸储完毕，用微量酸式滴定管，以 0.01mol/L0.01mol/L 盐酸标准溶液进行滴定锥瓶内溶液，溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色，即为终点（2 2）记录所用盐酸的量。4 4 . .计算心口的人日。八（AB）M0.0100M14彳”样品的总氮含反（克氮）=父100C1000若测定的样品含氮量部分只是蛋白质则：样品的总蛋白含量（克蛋白）= =0 0. .01000100 1414 6 6叫100C1000式中：A A 为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B B 为滴定空白用去的盐酸平均毫升数；C

7、C 为称量样品的克数：0.01000.0100 为盐酸的当量浓度（实际上,此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写）；1414 为氮的原子量；6.256.25 为常数（1 1 毫升 0.1N0.1N 盐酸相当于 0.140.14 毫克氮）。五、实验结果序号称量样品（g g）滴定样品用去的盐酸（mlml）滴定空白用去的盐酸（mlml）1 11 115.215.20.120.122 21 115.415.4滴定样品用去盐酸平均值=15.215.42=15.3ml）心口的 MNMN 冬口/古 N。八（AB）M0.0200M14“八样品的总氮含反（克氮）=父100C1000=0.43%若测定的样品含氮量部

8、分只是蛋白质，则：样品的总蛋白含量（克蛋白）=5X100、C1000=2.66%式中：A A 为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数；C C 为称量样品的克数：0.01000.0100 为盐酸的当量浓度（实际上，此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写）；1414 为氮的原子量；6.256.25 为常数（1 1 毫升 0.1N0.1N 盐酸相当于 0.140.14 毫克氮）。六、注意事项1 1.本法适用于 0.05-3.0mg0.05-3.0mg 氮，样品中含氮量过高时，则应减少取样量或将样液稀释。2 2 .勿使样品粘于烧瓶颈部。放置液体样品时，需将吸管插至烧瓶底部再放样

9、：如固体样品，可将样品卷在纸内，平插入烧瓶底部，然后再将烧瓶直起，纸卷内的样品即完全放在烧瓶底部。3 3.蒸储完毕，先将蒸储出口离开液面，继续蒸储 1min,1min,将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内，再将吸收瓶移开，最后移开酒精灯，绝不能先灭灯，否则吸收液将发生倒吸。4 4 .硼酸吸收液的温度不应超过 4040C,C,否则氨吸收减弱， 造成损失， 可置于冷水浴中。混合指示剂在碱性溶液中呈兰绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。七、思考题1 1 .写出一下各步的化学反应方程式：蛋白质的消化、氨的蒸储、氨的滴定。答：蛋白质的消化：含氮有机物.H2s04CO2SO2H2ONH3氨的蒸储

10、：NH42SO42NaOHNa2s042NH40HNH40H，H2ONH3NH3H3BO3NH4H2BO3氨的滴定：NH4H2BO3HCLNH4CLH3BO34234332 2 . .指出本测定方法产生误差的原因答：在消化过程中，消化时间，催化剂，浓硫酸都要一样，一定要消化完全。在消化过程中蛋白质附着在凯氏烧瓶壁上没有被消化9也会影响最终的浓度蒸储过程中，蒸储出来的液体量一定要相同，因为不一样的蒸储水，最后结果不一样，在蒸储的过程中一开始要加入买的蒸储水，蒸储过程中加入的是自己用自来水蒸储的。蒸储中出气孔的管子一定要插入硼酸液面以下，蒸储过程中保证冷凝水一直在流动。蒸储过程中定氮仪各连接处应使

11、玻璃对玻璃外套橡皮管绝对不能漏气。加入消化液后加氢氧化钠应小心缓慢加入，开关甲不能常开，加完后加水液封。滴定过程中应一滴一滴加入，滴定速度过快容易滴定过量。滴定过程中仰视刻度结果偏小，俯视刻度线结果偏大。蒸储装置的洗涤过程中洗涤不干净也会导致误差的出现。本实验方法适合测量 0.05-3.0mg0.05-3.0mg 氮，含量过大应该减少取样量或者样液稀释。否则会产生误差。3 3 . .消化过程中产生何种有毒气体？如何判断消化终点？答：可能会产生一氧化氮、二氧化氮、二氧化硫。消化终点判定：在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出S SQ Q 白烟后，适当加强

12、火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止。八、讨论经过本次利用微量凯氏定氮法进行面粉中蛋白质的粗测定实验，10使我较为熟练的掌握了凯氏定氮蒸储装置的使用，并且了解了其工作原理，这对于以后的学习是有很大帮助的。经查阅资料得，面粉中蛋白质的含量大概在 9%9%左右，本次实验的结果为 2.66%,2.66%,总体来讲，本次试验较为失败，没能够粗略地测量出了面粉中蛋白质的含量。经过分析后，得出几点影响实验结果的因素，如下：1 1 .在消化过程中，消化时间，催化剂，浓硫酸都要一样，一定要消化完全。在消化过程中蛋白质附着在凯氏烧瓶壁上没有被消化也会影响最终的浓度；2 2 . .蒸储过程中，蒸储出来的液体量

13、一定要相同，因为不一样的蒸储水，最后结果不一样，在蒸储的过程中一开始要加入买的蒸储水，蒸储过程中加入的是自己用自来水蒸储的。蒸储中出气孔的管子一定要插入硼酸液面以下，蒸储过程中保证冷凝水一直在流动。蒸储过程中定氮仪各连接处应使玻璃对玻璃外套橡皮管绝对不能漏气。加入消化液后加氢氧化钠应小心缓慢加入，开关甲不能常开，加完后加水液封；3 3 . .滴定过程中应一滴一滴加入，滴定速度过快容易滴定过量。滴定过程中仰视刻度结果偏小，俯视刻度线结果偏大；4 4. .蒸储装置的洗涤过程中洗涤不干净也会导致误差的出现；5 5 . .本实验方法适合测量 0.05-3.0mg0.05-3.0mg 氮， 含量过大应该减少取样