螺旋体、支原体、衣原体、立克次体201310

1、螺旋体、支原体、螺旋体、支原体、衣原体、立克次体衣原体、立克次体 武汉大学中南医院 周俊英 第十第十六六章章 螺旋体螺旋体 螺旋体螺旋体（spirochete) )：是一种细长、柔：是一种细长、柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。在分类学上的地位介于细菌与原生物。在分类学上的地位介于细菌与原虫之间。虫之间。第一节第一节 分类分类 螺旋体目螺旋体目螺旋体科螺旋体科 9 9个属（螺旋体、个属（螺旋体、疏螺旋体疏螺旋体、密螺旋密螺旋体体、脊螺旋体等）、脊螺旋体等）蛇形螺旋体科蛇形螺旋体科 2 2个属（蛇形螺旋体、短螺旋体）个属（蛇形螺旋体、短螺旋体）钩端螺旋体

2、科钩端螺旋体科2 2个属（个属（钩端螺旋体钩端螺旋体、细丝体）、细丝体）致病性螺旋体致病性螺旋体 致病性螺旋体主要致病性螺旋体主要有有3 3个属个属钩端螺旋体属钩端螺旋体属疏螺旋体属疏螺旋体属密螺旋体属等密螺旋体属等第二节第二节 钩端螺旋体钩端螺旋体 一、临床意义一、临床意义钩端螺旋体是钩端螺旋体病的病原体。钩端螺旋体是钩端螺旋体病的病原体。 致病物质：致病物质： 内毒素样物质（内毒素样物质（ELSELS）/ /脂多糖样物质（脂多糖样物质（LLS)LLS) 溶血素溶血素 细胞毒性因子（细胞毒性因子（C CTFTF） 细胞致病作用物质细胞致病作用物质2、所致疾病、所致疾病：钩体病钩体病 传染源及

3、储存宿主传染源及储存宿主: 带菌动物（我国主要为猪和鼠） 传播途径传播途径: 皮肤粘膜接触传播皮肤粘膜接触传播; 易感人群易感人群 人和动物人和动物 临床表现临床表现 发热头痛一身乏，眼红腿痛淋巴大发热头痛一身乏，眼红腿痛淋巴大二、生物学特性二、生物学特性 螺旋细密、规则，一螺旋细密、规则，一端或两端呈钩状；端或两端呈钩状； 有两根周浆鞭毛，运有两根周浆鞭毛，运动活泼；动活泼； G-，但不易着色，但不易着色，Fontana镀银染色成镀银染色成棕褐色。棕褐色。 营养要求高，需氧或微需氧，常用营养要求高，需氧或微需氧，常用Korthof培培养基，生长缓慢；最适温度养基，生长缓慢；最适温度2830。

4、 在水及土壤中可存活数天至数月；对青霉素敏在水及土壤中可存活数天至数月；对青霉素敏感感 根据属特异性抗原、群特异性抗原、型特异性根据属特异性抗原、群特异性抗原、型特异性抗原分抗原分25个血清群、个血清群、273个血清型个血清型三、三、微生物检验微生物检验（一）检验程序（一）检验程序 （二）标本采集（二）标本采集 标本标本： 10天内取血液；天内取血液；1周后取尿液和脑脊液。周后取尿液和脑脊液。（三）标本直接检查（三）标本直接检查 直接镜检：暗视野观察；直接镜检：暗视野观察；Fontana镀银染色：镀银染色： 棕褐色棕褐色核酸检测：核酸检测：特异特异DNA探针法、探针法、PCR（四）分离培养四）

5、分离培养与鉴定：与鉴定：血液血液、尿液培养尿液培养 接种于接种于KorthofKorthof培养基培养基中中培养后作暗视培养后作暗视 野检查。野检查。（五）抗体检测（五）抗体检测1 1、显微镜凝集试验、显微镜凝集试验2、间接凝集试验：炭粒间接凝集试验：炭粒(1:8)；乳胶；乳胶(1:2)3、补体结合试验：血清效价补体结合试验：血清效价(1:20)4、或取双份血清，抗体效价呈或取双份血清，抗体效价呈4倍增高倍增高（六）六）动物试验动物试验第三节 疏螺旋体属 有有3 31010个稀疏而不规则的螺旋，运动活泼个稀疏而不规则的螺旋，运动活泼 对人致病的主要有伯氏疏螺旋体、回归热螺旋对人致病的主要有伯氏

6、疏螺旋体、回归热螺旋体、奋森螺旋体等体、奋森螺旋体等 伯氏疏螺旋体：莱姆病 回归热螺旋体：回归热 奋森螺旋体：口咽部炎症一、伯氏一、伯氏疏疏螺旋体螺旋体（一）（一）临床意义临床意义1. 致病物质致病物质：粘附素，外膜蛋白粘附素，外膜蛋白OspA，LPS2. 自然储存宿主：自然储存宿主：哺乳哺乳动物动物 传播媒介：传播媒介：硬蜱硬蜱3. Lyme病临床表现病临床表现：游走性红斑游走性红斑（二）生物学特性（二）生物学特性 长长1040m，两端稍尖；，两端稍尖； 周浆鞭毛有周浆鞭毛有2100根以上，与运动有关；根以上，与运动有关； Giemsa染色为淡紫色，镀银染色为棕褐色；染色为淡紫色，镀银染色为

7、棕褐色； 营养要求高，微需氧，营养要求高，微需氧，5% 10% CO2促进生长，促进生长，常用常用BSK培养基，生长缓慢；培养基，生长缓慢； 莱姆病的病原体：伯氏、伽氏、埃氏。莱姆病的病原体：伯氏、伽氏、埃氏。（三）微生物学检查（三）微生物学检查 标本中病原体数量少，标本中病原体数量少，早期和晚期均难早期和晚期均难分离出螺旋体。分离出螺旋体。 2. 分子生物学技术分子生物学技术3. 抗体检测抗体检测：免疫荧光法及：免疫荧光法及ELISA法法检测检测病人体内的抗体。病人体内的抗体。二、回归热疏螺旋体二、回归热疏螺旋体 流行性回归热（虱传回归热）流行性回归热（虱传回归热）病原体：病原体：回归热疏螺

8、旋体回归热疏螺旋体，我国多见，我国多见传播途径：传播途径：体虱体虱临床症状：临床症状：高热反复发作高热反复发作3 39 9次。次。地方性回归热（蜱传回归热）地方性回归热（蜱传回归热）病原体：病原体：杜通疏螺旋体杜通疏螺旋体等等1515种种传播途径：传播途径：软蜱软蜱储存宿主：储存宿主：啮齿动物啮齿动物临床症状：临床症状：高热反复发作高热反复发作3 39 9次。次。三、奋森螺旋体三、奋森螺旋体 1、体内正常菌群，寄生在口腔、齿龈及、体内正常菌群，寄生在口腔、齿龈及咽部咽部 2、协同引起奋森咽峡炎、牙龈炎、溃疡、协同引起奋森咽峡炎、牙龈炎、溃疡性口腔炎、口颊坏疽性口腔炎、口颊坏疽 3、对青霉素、四

9、环素等敏感、对青霉素、四环素等敏感第四节第四节 密螺旋体属密螺旋体属 分为致病与非致病两大类分为致病与非致病两大类 苍白螺旋体：苍白亚种苍白螺旋体：苍白亚种 梅毒梅毒 性病性病 地方亚种地方亚种 地方性梅毒地方性梅毒非性病非性病 极细亚种极细亚种 雅司病雅司病 非性病非性病 品他螺旋体：品他病品他螺旋体：品他病一、梅毒螺旋体一、梅毒螺旋体 梅毒梅毒：由梅毒螺旋体（由梅毒螺旋体（ Treponema palidum）感染而引起生殖器官感染而引起生殖器官 、所属淋巴结和全身病变的慢性传、所属淋巴结和全身病变的慢性传染染病。病。( (一一) ) 临床意义临床意义1 1、致病物质、致病物质 外膜蛋白：

10、粘附作用外膜蛋白：粘附作用 表面粘多糖和唾液酸：形成荚膜样物质。表面粘多糖和唾液酸：形成荚膜样物质。 透明质酸酶透明质酸酶 鞭毛鞭毛2. 所致疾病：梅毒所致疾病：梅毒 先天性：母体通过胎盘传给胎儿先天性：母体通过胎盘传给胎儿 获得性：性传播获得性：性传播或医源性传播或医源性传播获得性梅毒临床分期：分为三期 （1）期（初期）梅毒：期（初期）梅毒：感染后感染后3周左周左右局部出现无痛性右局部出现无痛性硬下疳硬下疳。感染性极强感染性极强（2）期梅毒：期梅毒： 发生于硬下疳出现后发生于硬下疳出现后28周。周。 全身皮肤、粘膜常有全身皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋梅毒疹，全身淋巴结肿大。巴结肿大。 （3）

11、期（晚期）梅毒期（晚期）梅毒 发生感染发生感染2年后，病变可波及年后，病变可波及全身组全身组织和器官织和器官 基本损害为基本损害为慢性肉芽肿慢性肉芽肿 病损内病损内螺旋体少但破坏性大螺旋体少但破坏性大先天性梅毒：先天性梅毒： 母体经胎盘、产道通过传给胎儿母体经胎盘、产道通过传给胎儿 胎儿期：胎儿期： 流产死胎流产死胎生后：生后： 锯齿形牙锯齿形牙 马鞍形鼻马鞍形鼻一、生物学性状一、生物学性状 1形态与染色:细长螺旋状，两端尖直（与钩体相细长螺旋状，两端尖直（与钩体相区别）。在暗视野显微镜下可见区别）。在暗视野显微镜下可见:运动运动很活泼，很活泼，为闪光白色。为闪光白色。 用用Fontana镀银

12、染色法镀银染色法:染成棕褐色。染成棕褐色。用用Giemsa染色法，染色法， 染成浅红色染成浅红色 生物学性状生物学性状2.电镜下观察，有细胞壁和细胞膜。细胞壁外有包电镜下观察，有细胞壁和细胞膜。细胞壁外有包膜，细胞膜内为含细胞质和核质的螺旋形原生膜，细胞膜内为含细胞质和核质的螺旋形原生质圆柱体。绕着质圆柱体。绕着34根周浆鞭毛或内鞭毛根周浆鞭毛或内鞭毛 ，与，与运动有关运动有关3.不能人工培养基中生长繁殖不能人工培养基中生长繁殖（棉尾兔棉尾兔）4.抵抗力极弱。对温度和干燥特别敏感，抵抗力极弱。对温度和干燥特别敏感，4 3天天死亡死亡.4 保存保存3天血液就无传染梅毒的危险天血液就无传染梅毒的危

13、险5.对青霉素、四环素敏感对青霉素、四环素敏感微生物检查微生物检查 检验程序 标本采集（分泌物、穿刺液、组织块） 标本直接检查：暗视野显微镜检查免疫荧光染色检查镀银染色检查核酸检测 体外培养迄今仍未解决 抗体检测实验室辅助诊断的重要手段暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查初期梅毒，取下疳分泌物；二期梅毒取初期梅毒，取下疳分泌物；二期梅毒取梅梅毒毒疹、病灶渗出物或局部淋巴结穿刺液，将上述检疹、病灶渗出物或局部淋巴结穿刺液，将上述检材置于玻片上用暗视野显微镜检查，如见有呈现材置于玻片上用暗视野显微镜检查，如见有呈现运动活泼，沿其长轴滚动、屈伸、旋转、前后移运动活泼，沿其长轴滚动、屈伸、旋转、前后移行等

14、的螺旋体即有诊断意义行等的螺旋体即有诊断意义核酸检测核酸检测用用PCR技术直接检测临床标本中梅毒螺旋技术直接检测临床标本中梅毒螺旋体的特异性体的特异性DNA片段，用于检测的引物和片段，用于检测的引物和探针是编码外膜蛋白探针是编码外膜蛋白4.7kD的基因，其扩增的基因，其扩增产物经斑点印迹，或电泳以产物经斑点印迹，或电泳以Southern 印迹印迹法鉴定法鉴定抗体检测抗体检测 第一类第一类 非非密螺旋体密螺旋体抗原抗原血清血清试验（非试验（非特异性）特异性） 用牛心肌的心脂质作为抗原，测定病人用牛心肌的心脂质作为抗原，测定病人血清中的反应素（抗脂质抗体）血清中的反应素（抗脂质抗体） 初期梅毒病灶

15、，阳性率为初期梅毒病灶，阳性率为53538383 二期梅毒的阳性率可达二期梅毒的阳性率可达100100 晚期梅毒的阳性率晚期梅毒的阳性率5858-85-85，胎传梅毒，胎传梅毒的阳性率为的阳性率为8080- 100- 100非密螺旋体抗原试验方法非密螺旋体抗原试验方法 性病研究所实验室性病研究所实验室 (VDRL) (VDRL)玻片试验玻片试验 所用抗原所用抗原：主要：主要心卵磷脂心卵磷脂和和胆固醇胆固醇 待检血清经待检血清经56 30min灭活，滴加于玻片灭活，滴加于玻片，加加等量抗原液，等量抗原液，5min充分混匀反应后观察结果充分混匀反应后观察结果 有大片絮状凝聚物为有大片絮状凝聚物为

16、(3+)，中等凝聚物为，中等凝聚物为(2+)，细小凝聚物为细小凝聚物为(+)，液体混浊为，液体混浊为()非密螺旋体抗原试验方法非密螺旋体抗原试验方法 快速血浆反应素环状卡片试验快速血浆反应素环状卡片试验(RPR(RPR）用活性炭吸附用活性炭吸附VDRLVDRL抗原。抗原。取待检血清加于环状卡内，加取待检血清加于环状卡内，加VDRLVDRL抗抗原致敏活性炭原致敏活性炭1 1滴，旋转摇匀滴，旋转摇匀8min8min，观，观察结果察结果结果判断结果判断 1. 1.阳性反应（阳性反应（+ + +）：可见中等或较大的）：可见中等或较大的黑黑色凝聚色凝聚物。物。 2. 2.弱阳性反应（弱阳性反应（+ +

17、+ +）：可）：可见较小的见较小的黑黑色凝聚物。色凝聚物。 3. 3.阴性反应（阴性反应（- -）：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物）：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物RPR反应原理 当机体感染梅毒螺旋体后,经过一段时间潜伏期,在血清中产生一定数量的抗类脂质抗体，快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）在抗原中加入炭颗粒，敏感性和特异性与VDRL试验相似。其优点为可不用显微镜，观察结果。非非梅毒梅毒螺旋体抗原试验方法螺旋体抗原试验方法 甲苯胺红不加热血清实验（甲苯胺红不加热血清实验（TRUST）用用甲苯胺红染料甲苯胺红染料颗粒替代活性炭颗粒颗粒替代活性炭颗粒吸附吸附VDRLVDRL抗原抗原试验方法和结果判

18、定相同试验方法和结果判定相同阳性结果出现红色絮状凝集阳性结果出现红色絮状凝集也可将标本倍比稀释进行半定量试验也可将标本倍比稀释进行半定量试验密螺旋体抗原试验密螺旋体抗原试验 密螺旋体抗原试验（特异性）密螺旋体抗原试验（特异性） 用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性抗体抗体 由于梅毒螺旋体、雅司螺旋体等抗原性由于梅毒螺旋体、雅司螺旋体等抗原性相似，所以用血清学试验不可能区别这相似，所以用血清学试验不可能区别这些密螺旋体及其所致疾病些密螺旋体及其所致疾病密螺旋体抗原试验方法密螺旋体抗原试验方法 荧光密螺旋体抗体吸收试验荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)(FT

19、A-ABS) 1、反应原理： 用用Nichols株梅毒螺旋体抗原悬液涂成菌膜，吸附待株梅毒螺旋体抗原悬液涂成菌膜，吸附待检血清检血清(经吸附剂除去非特异性抗体)的的lgG抗体，再抗体，再用荧光素标记的羊抗人用荧光素标记的羊抗人lgG抗体，显示待检血清中抗体，显示待检血清中含有的抗螺旋体抗体。含有的抗螺旋体抗体。 2、操作步骤 （1）抗原片制备：Nichols株梅毒螺旋体抗原悬液，在玻片上涂直径为5mm的菌膜，干后甲醇固定。 （2）待检血清预处理：取50ul血清（经5630分钟灭活）与200ul吸附剂混匀，37作用30分钟，充分吸除非特异性抗体。 （3）夹心法荧光显色：吸附后的血清用磷酸盐缓冲液

20、（PBS）作1：201:320的倍比稀释，将稀释后的血清分别滴加于抗原菌膜上，置湿盒内37孵育30分钟，然后用PBS洗片，并将玻片在PBS中浸洗，洗3次，每次5分钟，吹干。各抗原反应片上滴加荧光素标记的羊抗人lgG抗体，置湿盒37孵育30分钟，再用PBS按前法洗片，干后用甘油缓冲液封片。 3、结果判定 阳性：高倍视野（10条左右）出现荧光，则为（+ +），15条左右则为（+ + +），约20条出现强荧光则为（+ + + +）。 阴性结果参照阴性对照血清判定为（-）或（+）。 密螺旋体抗原试验密螺旋体抗原试验 梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验(FTA-(FTA-ABS-D

21、S)ABS-DS) 抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝检测抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝检测(MHA-TP) 免疫印迹试验免疫印迹试验(immuno-blotting test)密螺旋体抗原试验密螺旋体抗原试验 ELISA 用用Nichols株为抗原，以超声波击碎。此法可株为抗原，以超声波击碎。此法可用于各期梅毒诊断，灵敏度为用于各期梅毒诊断，灵敏度为96，对感染，对感染血清灵敏度为血清灵敏度为95。与荧光抗体双吸收法。与荧光抗体双吸收法(FTA-ABS-DS)比较，两法符合率为比较，两法符合率为96。 ELISA试剂具有价廉、保存时间久且稳定试剂具有价廉、保存时间久且稳定(4个月个月)等优点，是目前梅毒

22、血清学诊断试验等优点，是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。的首选方法。 WHO推荐用推荐用VDRL、RPR法对血清进行法对血清进行过筛试验，出现阳性者用过筛试验，出现阳性者用FTA-ABS、FTA-ABS-DS、MHA-TP、ELISA和免和免疫印迹试验等方法做确认试验疫印迹试验等方法做确认试验二、其他密螺旋体二、其他密螺旋体 有苍白密螺旋体地方亚种、极细亚种以及有苍白密螺旋体地方亚种、极细亚种以及品他密螺旋体，分别引起地方性梅毒、雅品他密螺旋体，分别引起地方性梅毒、雅司和品他病。大多发生于经济较落后地区司和品他病。大多发生于经济较落后地区的儿童的儿童 小小 结结梅毒螺旋体的特点梅毒螺旋体的特

23、点大大细长、弯曲、柔软、运动活泼螺菌细长、弯曲、柔软、运动活泼螺菌镀银染色镀银染色获得性梅毒：获得性梅毒：3期；先天性梅毒期；先天性梅毒不能培养不能培养检测检测:根据病史和现病史查梅毒螺旋体、根据病史和现病史查梅毒螺旋体、 查特异性抗体和非特异性抗体反应素查特异性抗体和非特异性抗体反应素治疗彻底治疗彻底 青霉素青霉素 第十七章第十七章支原体支原体mycopalsma 无细胞壁无细胞壁, , 多形态、能透过滤菌器的、多形态、能透过滤菌器的、能在无生命培养基生长繁殖的最小原核能在无生命培养基生长繁殖的最小原核细胞型微生物。细胞型微生物。因其生长后能形成分枝因其生长后能形成分枝长丝，故命名为支原体长

24、丝，故命名为支原体。 呼吸道粘膜呼吸道粘膜泌尿生殖道粘膜泌尿生殖道粘膜 支原体支原体 自然界广泛存在自然界广泛存在 在遗传上与细菌无关在遗传上与细菌无关 （独立的微生物）（独立的微生物） 生长时需胆固醇生长时需胆固醇 等渗培养等渗培养 生长慢，菌落小生长慢，菌落小 DNA中G+C41mol%柔膜体纲柔膜体纲支原体目支原体目无胆甾原体科无胆甾原体科 支原体科支原体科 螺旋原体科螺旋原体科支原体属支原体属 脲原体属脲原体属 血虫体属血虫体属 血巴尔通体属血巴尔通体属对人致病的支原体 肺炎支原体：口咽部（人类原发性非典型性肺炎） 人型支原体：泌尿生殖道、口咽部（轻度咽炎） 生殖器支原体：泌尿生殖道

25、解脲脲原体：泌尿生殖道(炎症和不育症） 穿通支原体：AIDS的辅助致病因子临床意义临床意义 肺炎支原体感染呈全球性，以温带为主肺炎支原体感染呈全球性，以温带为主 该病经飞沫传染，间歇性、长期缓慢播散该病经飞沫传染，间歇性、长期缓慢播散 主要侵犯呼吸系统主要侵犯呼吸系统 首先引起上呼吸道感染，然后下行引起气管首先引起上呼吸道感染，然后下行引起气管炎、支气管炎、毛细支气管炎和肺炎炎、支气管炎、毛细支气管炎和肺炎 可引起双侧肺炎和肺外并发症可引起双侧肺炎和肺外并发症肺炎支原体肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP） 形态结构形态结构 大小：大小：2-5 m2-5 m，通过滤菌器

26、。，通过滤菌器。 呈短丝状，尖端有一球状特殊结构，类似酒瓶呈短丝状，尖端有一球状特殊结构，类似酒瓶状状无细胞壁，仅有细胞膜无细胞壁，仅有细胞膜。 革兰染色阴性，革兰染色阴性，GiemsaGiemsa染色呈淡紫色染色呈淡紫色细胞膜由三层结构组成，内外两层为蛋白质，中细胞膜由三层结构组成，内外两层为蛋白质，中间为脂质，其中胆固醇含量多（占间为脂质，其中胆固醇含量多（占3636） 形态结构形态结构支原体支原体培养特征：营养要求高营养要求高 添加10%-20%10%-20%血清，血清，PH7.6-8.0PH7.6-8.0，低于，低于7.07.0死亡死亡 二分裂二分裂繁殖为主，也有出芽、分枝等方法。繁殖

27、为主，也有出芽、分枝等方法。 生长慢生长慢（2-72-7天或天或2 2周），周），荷包蛋样菌落荷包蛋样菌落抗原结构抗原结构 糖脂抗原糖脂抗原，特异性差 细胞膜外层蛋白质抗原蛋白质抗原（P1蛋白等）是支原体的主要型特异性抗原 抗原性可用GIT和MIT来鉴定 GIT：生长抑制试验(growth inhibition test) MIT：代谢抑制试验（metabolism inhibition test）抗血清纸片抑菌圈支原体含葡萄糖液体培养基(含有抗血清及酚红)酚红不变色(抗体与该支原体相应，支原体代谢受抑制)酚红变色(抗体与该支原体不对应，支原体代谢不被抑制)培养接种 培养特性培养特性 可在人工

28、培养基上生长繁殖，但对营养要求较高，需要胆固醇和葡萄糖 12周后出现菌落，固体培养基上呈草莓状，反复传代后呈“荷包蛋”状 菌落能吸附豚鼠红细胞，产生溶血素 半固体培养基上可见细小粒状菌落 液体培养基中呈极浅淡的混浊生长 生化反应生化反应 能利用葡萄糖，不水解精氨酸，不利用尿素 可还原美蓝，可还原无色的TTC（氯化三苯基四氮唑）为红色 这些生化性状可用来与其它支原体相鉴别 检验程序：图17-3 标本采集：痰、咽拭、鼻咽洗液、支气管分泌物，以拭子为好 标本直接检查：电镜观察、PCR检测 分离培养与鉴定： 牛心消化液+20小牛血清+新鲜酵母浸液 加醋酸鉈、青霉素等抑制细菌生长 5%CO2，培养102

29、0天（不利于临床快速诊断） 鉴定： 典型菌落、发酵葡萄糖、不利用精氨酸和尿素 还原美兰和TTC、吸附红细胞等 抗体检测 ELISA：检测P1蛋白，敏感性和特异性好 补体结合试验双份抗体效价升高4倍以上诊断主要检测IgM 间接血凝试验（IHAIHA）测抗体测抗体, 2, 23 3周高峰周高峰检测检测IgMIgM抗体，特异性不高抗体，特异性不高 冷凝集试验非特异冷凝集素非特异冷凝集素 人感染支原体后，血清中出现的一种人感染支原体后，血清中出现的一种IgM型非特异性抗体型非特异性抗体（冷凝集素）。在。在4C条条件下可凝集人件下可凝集人O型红细胞。型红细胞。 冷凝集素效价升高可在传染性单核细胞增多症和

30、支原体所致的非典型性肺炎 抵抗力 对热抵抗力与一般细菌相似 耐冷，-70可长期保存 4存活不超过3天 对干燥敏感 无细胞壁，对-内酰胺类药物耐药；对作用于菌体蛋白合成的抗生素敏感分离培养血清学诊断-冷凝集实验、补体结合、间接血凝试验快速诊断（ELISA-检测抗原、抗体） （基因PCR检测DNA）解脲脲原体解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu) 解脲脲原体又称溶脲脲原体，支原体T株 1954年Shepard 首先从非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分离获得 是人类泌尿生殖道中最常见的寄生菌T株临床意义 Uu寄居于人泌尿生殖道 所致疾病非淋菌性尿道炎(NGU) 主要传播途径

31、是性传播和母婴垂直传播 Uu的致病机制 侵袭性酶 磷脂酶分解细胞膜中的磷脂 尿素酶分解尿素产氨，产生细胞毒性作用 IgA蛋白酶降解粘膜表面的IgA 毒性代谢产物微生物特性 形态结构 以球形为主 革兰染色阴性，Giemsa 染色呈紫蓝色 无细胞壁，细胞膜为三层膜结构解脲脲原体微生物特性 培养特性营养要求较高，生长需要胆固醇、酵母和尿素。不分解葡萄糖和精氨酸,利用尿素产碱最适温度37，最适pH5.56.5， 5 CO2在固体培养基上，2天可形成极小的菌落（Tiny Tiny colony straincolony strain）所以称）所以称T T株株抗原构造：脂多糖抗原和蛋白质抗原脲酶抗原是Uu

32、的种特异性抗原 分离培养 采用pH5.56.5的液体培养基，内含尿素和酚红指示剂。37培养，培养基颜色由黄变红，判为阳性 鉴定 培养和形态特征 分解尿素、不分解葡萄糖和精氨酸 MIT和GIT人型支原体（M.hominis） Mh主要寄居于生殖道，女性携带率高 通过性接触传播 引起妇科疾病或新生儿感染 形态结构与解脲脲原体相似 分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖 固体培养基上可形成典型“油煎蛋”样菌落SFP - T039 A - 2022-4-30 - p 12 - 68MYCOPLASMA IST 2R1R2运送溶解R1+R2接种试剂条(55 l)+ 2滴矿物油OUuMhUuMh 104 1044

33、211410.1212Mycoplasma IST237C培养2448 hSFP - T039 A - 2022-4-30 - p 12 - 69MYCOPLASMA IST 2 如果(+) 观察其他孔 如果(-) 不再判断高浓度林可霉素抑制Mh生长高浓度红霉素抑制Uu生长 阳性 (+) 阴性 (-) SFP - T039 A - 2022-4-30 - p 12 - 70MYCOPLASMA IST 2 计数计数 原理原理 : 含标准抑制剂浓度含标准抑制剂浓度104 CCU (颜色变化单颜色变化单位位)致病临界值致病临界值, 常用常用 结果结果: 如果标本中菌数等于或大于如果标本中菌数等于或

34、大于104 颜色发生颜色发生变化变化红色红色 (+) 计数计数 104 CCU 黄色黄色 (-) 计数计数 104 CCUMUu : 结果判断必须在结果判断必须在20和和24 hMh : 结果判断在结果判断在 24和和48 h后后SFP - T039 A - 2022-4-30 - p 12 - 71MYCOPLASMA IST 2 四环素和多西环素 交沙霉素, 红霉素, 阿奇霉素,克拉霉素 氧氟沙星, 环丙沙星 原始霉素检测 2个浓度: 结果以S, I, 或 R表示SFP - T039 A - 2022-4-30 - p 12 - 72MYCOPLASMA IST 2 结果判断结果判断 首先

35、检查尿素首先检查尿素- 精氨酸肉汤精氨酸肉汤: 确认肉汤不混浊确认肉汤不混浊(污染污染) 观察颜色观察颜色 试剂条试剂条: 即使颜色由黄色至橙黄色轻微变化也应判断为阳性即使颜色由黄色至橙黄色轻微变化也应判断为阳性M除计数孔除计数孔:阳性结果必须是红色阳性结果必须是红色 特殊情况特殊情况 :肉汤试剂条-+试剂条污染 /或操作不正确+-支原体量少用A7琼脂确认穿通支原体（M.Penetrans,Mpe） 1990年从AIDS患者尿中分离出Mpe 能吸附宿主细胞并能穿入细胞内 Mpe、发酵支原体、梨支原体是加速AIDS 进程的协同因子 第十八章第十八章 衣原体衣原体chlamydia一、概述一、概述

36、 能通过细菌滤器、严格细胞内寄生的、独特能通过细菌滤器、严格细胞内寄生的、独特发育周期的原核细胞型微生物。发育周期的原核细胞型微生物。 生物学分类处于立克次体和病毒之间。生物学分类处于立克次体和病毒之间。 现归属细菌。现归属细菌。 共共 同同 特特 征征 0.2-0.40.2-0.4 m m，圆形或椭圆形；，圆形或椭圆形； 有细胞壁，有细胞壁，G-G-； 二分裂繁殖，有独特的发育周期。二分裂繁殖，有独特的发育周期。 原体原体 始体（网状体）始体（网状体） 寄生在活的易感细胞内：柱状上皮和杯状上皮寄生在活的易感细胞内：柱状上皮和杯状上皮。 对多种抗生素敏感。对多种抗生素敏感。包涵体包涵体(inc

37、lusion body):含繁殖的始体和子代原体的空泡。含繁殖的始体和子代原体的空泡。宿主宿主细胞细胞破裂破裂，释，释放出放出的原的原体则体则感染感染新的新的细胞细胞。具有感染性的原体通过具有感染性的原体通过胞饮作用进入宿主细胞胞饮作用进入宿主细胞原体逐渐原体逐渐增大成为增大成为始体。始始体。始体无感染体无感染性，但能性，但能在空泡中在空泡中以二分裂以二分裂方式反复方式反复繁殖，形繁殖，形成大量新成大量新的原体，的原体，积聚于细积聚于细胞质内成胞质内成为各种形为各种形状的包涵状的包涵体。体。 原体原体(elementary body EB)(elementary body EB)在细胞外，是发

38、育成在细胞外，是发育成 熟的衣原体，具有高度的感染性，无繁殖能力。个体小，熟的衣原体，具有高度的感染性，无繁殖能力。个体小，有细胞壁。有细胞壁。 始体始体(initial body )(initial body )在细胞内，不具感染性，在细胞内，不具感染性， 有繁殖能力，可发育成许多子代原体。个体大，无细胞壁。有繁殖能力，可发育成许多子代原体。个体大，无细胞壁。 形成包含涵体。形成包含涵体。原体（原体（elementary body, EB）始体（始体（initial body）网状体（网状体（reticulate body, RB）小而致密小而致密 大而疏松有胞壁，有胞壁，发育成熟发育成熟

39、无胞壁无胞壁高度感染性高度感染性 无感染性无感染性无繁殖能力无繁殖能力 繁殖能力繁殖能力胞外稳定性强胞外稳定性强胞外稳定性弱胞外稳定性弱,胞内稳定性胞内稳定性培养鸡胚卵黄囊接种鸡胚卵黄囊接种致病物质致病物质内毒素：内毒素：外膜蛋白：阻止吞噬体和溶酶体的融合外膜蛋白：阻止吞噬体和溶酶体的融合 种类：沙眼衣原体沙眼衣原体肺炎衣原体肺炎衣原体鹦鹉热衣原体 二、主要致病性衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体chlamydia trachomatis: 三个亚种三个亚种 （汤非凡（汤非凡1955年世界上首次分离培养出沙眼衣原体）年世界上首次分离培养出沙眼衣原体） 1、沙眼亚种沙眼亚种 沙眼沙眼 结膜充血及滤泡增生

40、结膜充血及滤泡增生 结膜瘢痕结膜瘢痕眼睑内翻、倒睫眼睑内翻、倒睫 角膜血管翳角膜血管翳 影响视力或影响视力或致盲致盲w 直接或间接接触传播直接或间接接触传播 2、包涵体结膜炎、包涵体结膜炎 成人结膜炎成人结膜炎 引起滤泡性结膜炎。引起滤泡性结膜炎。 成人结膜炎症状类似于沙眼前期症状。成人结膜炎症状类似于沙眼前期症状。 婴儿结膜炎婴儿结膜炎 （产道感染）（产道感染） 不损伤角膜，不会致失明。不损伤角膜，不会致失明。3、泌尿生殖道感染、泌尿生殖道感染 男性男性尿道炎最常见的病因尿道炎最常见的病因 可转慢性，可转慢性， 合并附睾炎前列腺炎。合并附睾炎前列腺炎。女性女性尿道炎、宫颈炎、尿道炎、宫颈炎、

41、宫颈糜烂、宫颈糜烂、子宫内膜炎、子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎等。输卵管炎、盆腔炎等。 仅次于淋球菌感染仅次于淋球菌感染后果：不孕不育，流产，宫外孕等后果：不孕不育，流产，宫外孕等 4. 性病淋巴肉芽肿性病淋巴肉芽肿：由性病淋巴肉芽肿生物变种引起，主要由性接触传播。 咽炎、鼻窦炎和气管炎、肺炎等。咽炎、鼻窦炎和气管炎、肺炎等。 起病慢，先有上呼吸道症状，起病慢，先有上呼吸道症状， 1-2W上呼吸道症状消失，上呼吸道症状消失， 咳嗽（干咳）加重，持续咳嗽（干咳）加重，持续1-2个月。个月。 还可引起心肌炎、心包炎和心内膜炎，还可引起心肌炎、心包炎和心内膜炎，还发现与冠心病的发生有关还发现与冠心病的

42、发生有关 肺肺 炎炎 衣衣 原原 体体微生物学检查微生物学检查 1查包涵体查包涵体 吉姆萨染色，原体紫色，吉姆萨染色，原体紫色， 始体蓝色；始体蓝色；碘液染色碘液染色 3 查菌体：免疫荧光查菌体：免疫荧光 荧光显微镜下如见亮绿色、荧光显微镜下如见亮绿色、边界清晰的圆形颗粒，边界清晰的圆形颗粒，或柱状细胞内查见亮绿色包涵体或柱状细胞内查见亮绿色包涵体4查抗体：查抗体：ELISA 第第19章章 立克次体立克次体rickettsiarickettsia一、概述一、概述 立克次体是一类节肢动物为传播媒介、立克次体是一类节肢动物为传播媒介、 严格细胞内寄生的、严格细胞内寄生的、 原核细胞型微生物。原核细

43、胞型微生物。 立克次体的共同特点（一）：立克次体的共同特点（一）： 1 1大小（大小（0.3-0.60.3-0.60.8-2.00.8-2.0m m） 介于细菌和病毒之间。介于细菌和病毒之间。 2. 2. 有多种形态（球形和杆状多）。有多种形态（球形和杆状多）。 3. 3. 有细胞壁，结构与有细胞壁，结构与G-G-菌相似，菌相似， G- G-但不易染色；但不易染色； 吉姆萨染色紫蓝色。吉姆萨染色紫蓝色。 4 4专性细胞内寄生。专性细胞内寄生。 立克次体的共同特点（二）：立克次体的共同特点（二）： 5. 5. 自然疫源性疾病。自然疫源性疾病。 6 6节肢动物为传播媒介。节肢动物为传播媒介。 7. 7. 人畜共患病的病原体。人畜共患病的病原体。 8 8对