现代仪器7电泳技术研究生

1、会计学1现代仪器现代仪器7电泳技术研究生电泳技术研究生电泳技术概论电泳技术概论3 13 2常用电泳技术常用电泳技术234Arne Wilhelm Kaurin Tiselius 蒂塞蒂塞利乌斯利乌斯(瑞典人瑞典人)因研究因研究电泳和吸附分析，特电泳和吸附分析，特别是发现关于血清蛋别是发现关于血清蛋白的复杂本质而获奖白的复杂本质而获奖194856 789101112131415161718 19 2021221iiZmI对于稀溶液：对于稀溶液：2223 NH2 CHRCOOHNH3+CHRCOOCHRCOO NH3+ + H+ OH- + H+ OH-(pK 1) (pK 2)242526 27

2、Magnification of Cellulose Acetate filter 28 2930313233343536 37 38394041424344 4546 NH3+ + OH NH3+ + OH NH2 P P P COOH H COO H COO蛋白质的阳离子 蛋白质的兼性离子 蛋白质的阴离子 4748+49505152DNA RNA 蛋白质蛋白质 5354555657实验模型实验模型的设计的设计实验组和对照组实验组和对照组样品的制备样品的制备蛋白样品的蛋白样品的IEF和和PAGE电泳分离电泳分离图像扫描和初步分析图像扫描和初步分析感兴趣感兴趣蛋白点蛋白点的切取的切取胰酶对脱色

3、后蛋白质的消化胰酶对脱色后蛋白质的消化质谱的多肽指纹图、微测序分析质谱的多肽指纹图、微测序分析质谱结果的生物信息学分析和比对质谱结果的生物信息学分析和比对新蛋白质的发现新蛋白质的发现其它实验其它实验的进一步的进一步验证验证蛋白信息的蛋白信息的初步获得初步获得5859IPGphor IEF UnitDALT Six Unit6061SDS626364 656667686970712-DE UnitCyDye DIGE荧光标记物荧光标记物 DeCyder差异分析软件差异分析软件 Typhoon Imager or EDI727374757677787980图图3-12 三个荧光通道图谱以及叠三个荧

4、光通道图谱以及叠加后图谱加后图谱 Figure 3-12 Images of three fluorescence channels and their overlay image. A: HEK293-TAG-PRAK cell line without stimulation, Cy3B: HEK293-TAG-PRAK cell line stimulated by NaAsO2 ,Cy5,C: internal standard, Cy2D: overlay of A and B.ABCpH3 118182毛细管内径毛细管内径毛细管外径毛细管外径83848586878889界面界面+-

5、 -90919293-+-NNNNNNNEOF949596阴离子表面活性剂：阴离子表面活性剂：十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（SDS) 形成的胶束形成的胶束S O3-S O3-S O3-S O3-S O3-S O3-S O3-S O3-S O3-9798EOF + -EOFEOFEOFEOFEOFEOF99100101102103104105111112113114115蛋白质蛋白质肽片段混合物肽片段混合物酶切酶切CZE分离分离特征性肽图特征性肽图微量制备微量制备CE分别测定各片段的氨基酸序列分别测定各片段的氨基酸序列整个蛋白质整个蛋白质的一级结构的一级结构CE应用举例应用举例-肽的分析肽的分析116