无菌方法验证试验模板

1、药品无菌检查方法验证试验记录 共 页 第 页检品名称 褥疮膏规格 8g/瓶批号20130402收检日期 2013年5月12日检品数量 50瓶包装 塑料瓶生产单位 供样单位 检验依据 中国药典2010年版一部报告日期 年 月 日实验仪器： 仪器 编号仪器 编号高压蒸汽灭菌器YXQ-LS-50SII S14LAH-250A型生化培养箱 S24HZY-III型智能集菌仪 S20HH-B11-600电热恒温培养箱 S23全封闭集菌培养器（杭州高得医疗器械有限公司，批号：20090309）菌液制备：10倍稀释法菌种代数接种至菌悬液制备大肠埃希菌CMCC(B)441023营养肉汤培养基用0.9%无菌氯化钠

2、溶液制成每1ml含菌小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液金黄色葡萄球菌CMCC(B)260033营养肉汤培养基枯草芽孢杆菌CMCC(B)653013营养肉汤培养基铜绿假单胞菌CMCC(B)101043营养肉汤培养基生孢梭菌CMCC(B)649413硫乙醇酸盐培养基白色念珠菌CMCC(F)980013改良马丁液体培养基黑曲霉菌CMCC(F)980033改良马丁琼脂斜面培养基加入0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，再同上制成每1ml含菌小于100cfu的菌悬液活菌预实验-活菌计数菌 名大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉代 数第三代第三代第三代第三代第三代第

3、三代第三代稀释级12平均值4培养基灵敏度检查取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基9 支，分别接种小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接种作为空白对照，培养3 天； 取每管装量为9ml 的改良马丁培养基5 支,分别接种小于100 cfu 的白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。逐日观察结果。结果见表表：培养基灵敏度检查结果培养基菌种管数观察结果1d2d3d4d5d硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球菌12铜绿假单胞菌12枯草芽孢杆菌12生孢梭菌12空白组改良马丁培养基白色念珠菌12黑曲霉12空白组“”表示无

4、菌生长。“+”表示生长良好结果判定：检验方法验证薄膜过滤法：取供试品0.5g，加0.9%无菌氯化钠溶液稀释至20ml，无菌滤纸滤过，然后再用0.9%无菌氯化钠溶液20ml，冲洗残渣，合并滤液，按照薄膜过滤法过滤， 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗3次，每次100ml，最后一次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，分别加入相应硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基100ml，作为样品验证管。另取样品验证管用试验菌加入至40ml0.9%无菌氯化钠溶液中，无菌滤纸滤过，滤液按照薄膜过滤法过滤， 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗3次，每次100ml，最后加入同体积培养基，作为阳性对照管。空白组：取供试品按照样品验证

5、管制备方法，不加试验菌，分别加入相应硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基100ml，作为样品管，同时以同体积的培养基的培养器作为空白对照组。按规定温度培养35天。各试验菌同法操作。结果见表无菌检查法验证（薄膜过滤法）培养基名称菌种样品验证管阳性对照管1d2d3d4d5d1d2d3d4d5d硫乙醇酸盐流体培养基大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌空白组改良马丁培养基白色念珠菌黑曲霉空白组“+”表示有菌生长；“+”表示生长良好，“”表示无菌生长无菌检查验证结论：根据以上检验结果，经方法学验证试验： 验证结论 按照中国药典（2005年版）无菌检查法的方法验证，供试品褥疮康的无菌检查法为：取本品规定量，每瓶取0.5g，分别加0.9%无菌氯化钠溶液稀释至20ml，无菌滤纸滤过