沙门氏菌的检测

1、会计学1沙门氏菌的检测沙门氏菌的检测器、电子天平、无菌锥形瓶、无菌吸管、无菌培养皿、无菌试管、无菌毛细管后再加入另后再加入另n一种成分。一种成分。沸溶解，再加入碳酸钙，调节沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭，高压灭菌菌121 ，20 min基础液基础液寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）有较高的选择性。有较高的选择性。液液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸，加1mol/L 氢氢氧化钠溶液氧化钠溶液15mL，n使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH

2、。蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求，提供碳源满足细菌生长的需求，乳糖乳糖是可发酵的糖类；是可发酵的糖类；亚硒酸氢钠亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性菌的生长，革兰氏阴性菌的生长，磷酸盐磷酸盐是缓冲剂，是缓冲剂，L-L-胱氨酸胱氨酸为还原剂。为还原剂。磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 55 。加入煌绿溶液，充分混匀后立

3、即。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿倾注平皿。制法制法金属光泽的棕色或黑色菌落金属光泽的棕色或黑色菌落n6.琼脂琼脂是凝固剂是凝固剂n甲液甲液 20.0mL 乙液乙液 20.0mL pH 7.50.2,氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液再加氢氧化钠溶液1mL2mL。蛋白胨、牛肉膏粉蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质提供碳源、氮源、维生素和矿物质乳糖、蔗糖和水杨素乳糖、蔗糖和水杨素为可发酵的糖类为可发酵的糖类胆盐、去氧胆酸钠胆盐、去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌抑制革兰氏阳性菌氯化钠氯化钠维持均衡的渗透压维持均衡的渗透压硫代硫酸

4、钠和柠檬酸铁铵硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色黑色琼脂琼脂是培养基的凝固剂是培养基的凝固剂溴麝香酚蓝和酸性复红溴麝香酚蓝和酸性复红为为PH指示剂指示剂发酵糖产酸发酵糖产酸的菌落呈红色，的菌落呈红色，不发酵糖的菌落不发酵糖的菌落为蓝绿色为蓝绿色n5.0 5.00 10.0 8.5 8.5 8.5 1.0 0.025 0.00033 17.0 n中性红中性红为为pH指示剂，可把分解乳糖和不分解乳糖指示剂，可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落落n发酵糖产酸的菌落发酵

5、糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无呈红色，不发酵糖的菌落为无色；色；n琼脂琼脂是培养基的凝固剂。是培养基的凝固剂。SSSS琼脂的原理琼脂的原理1.基本步骤（程序）基本步骤（程序）：（1） 前增菌前增菌 SC更适合伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌增菌，最适增菌温度为36 1 ，时间为1824h。 TTB更适合其他沙门氏菌增菌，最适增菌温度为42 1 ，时间为1824h。u 增菌时，必须同时使用SCSC和TTBTTB，提高检出率，以防漏检。 （2） 增菌增菌 分别用接种环取增菌液一环，划线接种于选择性培养基上，分离培养 一个亚硫酸铋（BS）琼脂平板， 361培养4048h 一个木糖赖氨酸脱氧胆

6、盐（XLD）琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基）， 361培养1824h 。 观察各平板上生长的菌落，各平板上的菌落的特征见附表。选择选择性琼性琼脂脂亚属亚属、亚属亚属（亚利桑那菌）（亚利桑那菌）BS菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变菌落，周围培养基不变黑黑色有金属光泽色有金属光泽HE蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。为黄色，中

7、心黑色或几乎全黑色。乳糖阳性的菌株为黄色、中心黑乳糖阳性的菌株为黄色、中心黑色或几乎全黑色，乳糖迟缓阳性色或几乎全黑色，乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，中心黑色或几乎全黑色中心黑色或几乎全黑色SS无色半透明，产硫化氢菌株有的菌无色半透明，产硫化氢菌株有的菌落中落中心带黑色心带黑色，但不明显。，但不明显。乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与亚属亚属、相同；相同；乳糖乳糖阳性的菌株为粉红色，中心黑色，阳性的菌株为粉红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大肠埃希但中心无黑色形成时与大肠埃希氏不能区别氏不能区别 BS上的菌落上的菌落DHL上的菌落上

8、的菌落SS上的菌落上的菌落 XLDHE科玛嘉显色培养基平板科玛嘉显色培养基平板 一种培养基不可能适合所有沙门氏菌的分离，一种培养基不可能适合所有沙门氏菌的分离，BSBS选择性强选择性强，更适合分离伤寒沙门氏菌。，更适合分离伤寒沙门氏菌。 分离沙门氏菌要同时用两种以上的培养基，互分离沙门氏菌要同时用两种以上的培养基，互补，可提高检出率，以防漏检。其中必须有补，可提高检出率，以防漏检。其中必须有BSBS。（4）生化试验 选择性琼脂平板上符合沙门氏菌特征的菌落，只能称其疑为沙门氏菌，也可能是其他杂菌。 五项生化试验： 三糖铁(TSI)试验 赖氨酸脱羧酶试验 靛基质试验 尿素琼脂培养 氰化钾培养基33

9、 测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的分解和产硫化氢情况: :不分解乳糖、蔗糖，分解葡萄糖 不产酸，碱性不产酸，碱性粉红色（粉红色（-） ；产酸产酸黄色（黄色（+） ；产生产生H2S黑色黑色（+）；）；不产生不产生H2S （-） 。373 进一步生化试验：进一步生化试验： 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基及对照培养基各1管。 于361培养1824h，必要时可延长至48h 39后再加入另后再加入另n一种成分。一种成分。寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺

10、酶。）四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）,氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液再加氢氧化钠溶液1mL2mL。蛋白胨、牛肉膏粉蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质提供碳源、氮源、维生素和矿物质乳糖、蔗糖和水杨素乳糖、蔗糖和水杨素为可发酵的糖类为可发酵的糖类胆盐、去氧胆酸钠胆盐、去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌抑制革兰氏阳性菌氯化钠氯化钠维持均衡的渗透压维持均衡的渗透压硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色黑色琼脂琼脂是培养基的凝固剂是培养基的凝固剂溴麝香酚蓝和酸性复红溴麝香酚蓝和酸性复红为为PH指示剂指示剂