动物细胞培养综合课件

1、动物细胞培养综合第一页，共三十页。动物细胞培养综合细细胞胞工工程程植物植物(zhw)组织培养组织培养植物体细胞植物体细胞(xbo)杂杂交交动物动物(dngw)细胞培细胞培养养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术胚胎移植胚胎移植核移植核移植植物植物细胞细胞工程工程技术技术动物动物细胞细胞工程工程技术技术第二页，共三十页。动物细胞培养综合所采用技术的理论(lln)基础 植物(zhw)细胞工程通常(tngchng)采用的技术手段 植物组织培养植物组织培养 植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物组织培养植物组织培养第三页，共三十页。动物细胞培养综合第四页，共三

2、十页。动物细胞培养综合 烧伤病人烧伤病人(bngrn)的治疗通常是取烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人(bngrn)的的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人(bngrn)来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人来治疗该病人(bngrn)？ 许多动物的细胞能够分泌蛋白质许多动物的细胞能够分泌蛋白质,如抗体等如抗体等.但是但是(dnsh),单个细胞产生的蛋白质量是很少的单个细胞产生的蛋白质量是很少的,怎样才能获怎样才能获得大量的分泌蛋白呢得大量的分泌蛋白呢?第五页，共三十页。动物细胞培养综合一、动物一、

3、动物(dngw)细胞培养条件细胞培养条件 P461、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养(yngyng)（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、微量元素、无机盐、促生长因子、动物、氨基酸、微量元素、无机盐、促生长因子、动物血清、血浆血清、血浆等。等。）3、温度和、温度和PH 4、气体环境：、气体环境： O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）保证细胞顺利保证细胞顺利(shnl)的生长增殖的生长增殖第六页，共三十页。动物细胞培养综合二、动物二、动物(dngw)细胞培养概念细胞培养概念 P441、概念：2、目的(m

4、d)：3、理论基础：细胞细胞(xbo)增值增值获得细胞和细胞产物获得细胞和细胞产物 就是从动物机体内取出相关的组织，就是从动物机体内取出相关的组织，将它将它分散分散成单个细胞，然后，放在成单个细胞，然后，放在适宜的适宜的培养基培养基中，让这些细胞生长和增殖。中，让这些细胞生长和增殖。三、动物细胞培养过程三、动物细胞培养过程 P44-46第七页，共三十页。动物细胞培养综合动物动物胚胎胚胎(piti)或或幼龄幼龄动物的组织、器官动物的组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎剪碎单个细胞单个细胞(xbo)加培养液加培养液制成制成细胞细胞悬浮悬浮液液 原代培养原代培养细胞增殖细胞增殖去掉

5、组织去掉组织间蛋白间蛋白 传代培养传代培养胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞50代细胞代细胞50代以后代以后核型不变核型不变核型改变核型改变遗传物质遗传物质改变改变三、动物细胞培养过程：三、动物细胞培养过程：第八页，共三十页。动物细胞培养综合四、动物四、动物(dngw)细胞培养技术的应用细胞培养技术的应用 P47v大规模生产有重要价值的生物制品，如病毒大规模生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等疫苗、干扰素、单克隆抗体等v为基因工程提供受体细胞为基因工程提供受体细胞v用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性v科学家培养正常或各种病变的细胞科学家

6、培养正常或各种病变的细胞(xbo)，用于，用于生理、病理、药理等方面的研究。生理、病理、药理等方面的研究。第九页，共三十页。动物细胞培养综合获得获得(hud)(hud)细细胞胞或细胞产物或细胞产物细胞细胞(xbo)(xbo)的全的全能性能性植物体植物体培养培养(piyng)(piyng)结果结果快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、葡萄糖、动物动物血清血清蔗糖、蔗糖、植物激植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目

7、植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体细胞群体第十页，共三十页。动物细胞培养综合1、动物细胞培养的正确(zhngqu)过程是 A原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系B原代培养传代培养传代培养细胞系细胞系细胞株细胞株C传代培养细胞系细胞系原代培养原代培养细胞株细胞株D原代培养细胞系细胞系传代培养传代培养细胞株细胞株2、动物(dngw)细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于A 培养基不同B 动物细胞培养不需要在与菌条件下进行C 动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D 动物细胞能大量培养，而植物细胞只能培养成植株第十一页，共三十页。动物细胞培养综合3、下列有关动物

8、细胞培养的叙述，正确的是A 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B 细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中C 在培养瓶中要定期(dngq)用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等 4、动物细胞培养技术的用途有 生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等 生产基因工程技术中所用的受体细胞可以用于检测有毒物质培养的各种细胞可直接(zhji)用于生理、病理、药理等方面的研究 A B C D 第十二页，共三十页。动物细胞培养综合 (1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是

9、，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是 (3)培养首先在B瓶中进行，这时的细胞培养称为。 (4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。 (5)有少数的细胞能存活下来，继续传下去，一般能传到4050 代，这种传代细胞叫做。这种细胞的遗传物质与前面的细胞（相同，不同）。（6）这种细胞传至50代后一般不能再传，但有少数细胞遗传物质发生改变，带有 细胞的特征，有可能(knng)在培养条件下无限制的传下去。 胚胚胎或幼龄胎或幼龄(yu ln)动物组织器官动物组织器官剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白(dnbi)使每个细胞都能与培养液接触使每个细胞都能与培养液接触原代培养原代培养胰

10、蛋白酶胰蛋白酶悬浮液悬浮液细胞株细胞株相同相同癌癌第十三页，共三十页。动物细胞培养综合第十四页，共三十页。动物细胞培养综合动物动物(dngw)(dngw)体细胞核移植概念体细胞核移植概念: :将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经(y jing)去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。体。用核移植的方法得到的动物称为用核移植的方法得到的动物称为克隆动物克隆动物核移植核移植胚胎胚胎(piti)细胞核移植细胞核移植体细胞核移植（体细胞核移

11、植（难度难度高高）受体细胞：受体细胞：M期期的卵母细胞的卵母细胞第十五页，共三十页。动物细胞培养综合不不第十六页，共三十页。动物细胞培养综合第十七页，共三十页。动物细胞培养综合思考题思考题、核在进行、核在进行(jnxng)体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用(lyng)价值的动物价值的动物提供的细胞。提供的细胞。、用于核移植的供体细胞一般都选用、用于核移植的供体细胞一般都选用(xunyng)传代传代10代以内的细代以内的细胞，为什么？胞，为什么？10代以内的细胞保

12、持一般保持正常二倍体的核型，未突变代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有来自供体细胞核，但核外还有少部分少部分DNA（如线粒体（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞第十八页，共三十页。动物细胞培养综合克隆动物克隆动物(dngw)的研究意义的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种改良动物品种

13、3.治疗人类治疗人类(rnli)疾病，作为供体疾病，作为供体4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在体细胞核移植技术存在(cnzi)的问题：的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等器缺陷，免疫失调等。第十九页，共三十页。动物细胞培养综合第二十页，共三十页。动物细胞培养综合如果将牛的细胞与植物如果将牛的细胞与植物(zhw)细胞杂交，得到绿色细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！牛奶啦！动物细胞也能融合

14、动物细胞也能融合(rngh)吗？吗？第二十一页，共三十页。动物细胞培养综合动物细胞融合1.定义(dngy)：2.原理：3.融合方法：4.意义：5.应用：细胞膜具有细胞膜具有(jyu)流动性流动性生产生产(shngchn)单克隆抗体单克隆抗体第二十二页，共三十页。动物细胞培养综合1、动物(dngw)细胞融合过程不同不同DNA的两个的两个(lin )细胞细胞灭活病毒灭活病毒(bngd)诱导细诱导细胞融合胞融合融合后的细胞进行融合后的细胞进行有丝分裂有丝分裂第二十三页，共三十页。动物细胞培养综合主要主要(zhyo)(zhyo)用于制备用于制备单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)获得获得(hu

15、d)(hud)杂种植株杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振动、物理（离心、振动、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较第二十四页，共三十页。动物细胞培养综合设计方案：设计方

16、案：一个一个B B淋巴细胞只分泌淋巴细胞只分泌(fnm)(fnm)一种特异性抗体一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖如何获得化学性质单一如何获得化学性质单一(dny)(dny)、特异性强的抗体？、特异性强的抗体？杂种杂种(zzhng)细胞细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体1.传统获取抗体方法：传统获取抗体方法： 缺点：缺点：反复注射，血清中获取反复注射，血清中获取第二十五页，共三十页。动物细胞培养综合动物动物(dngw)细胞融合技细胞融合技术术B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有只有(zhyu)杂杂交细胞才能活交细胞才能活动物动物(dngw)细胞细胞培养培养

17、单克隆抗体制备单克隆抗体制备过程过程获得产生相应抗体获得产生相应抗体的的B淋巴细胞淋巴细胞第二十六页，共三十页。动物细胞培养综合2.制备过程：制备过程：获取效应获取效应B细胞，骨髓瘤细胞细胞，骨髓瘤细胞 通过什么方法获得效应通过什么方法获得效应B细胞？怎样能得到足细胞？怎样能得到足够多的骨髓瘤细胞？够多的骨髓瘤细胞？人工诱导融合：关键：人工诱导融合：关键： 方法：方法： 结果：结果：用特定的用特定的选择选择(xunz)培养基培养基筛选筛选出杂交瘤细胞出杂交瘤细胞此细胞特点：此细胞特点：体外进行体外进行(jnxng)细胞培养细胞培养膜的融合膜的融合(rngh)BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤迅速

18、大量增值迅速大量增值产生专一抗体产生专一抗体第二十七页，共三十页。动物细胞培养综合 克隆杂交细胞克隆杂交细胞(xbo)，再筛选，再筛选， 目的：目的： 体外或体内克隆体外或体内克隆 提取单克隆抗体提取单克隆抗体3.单克隆抗体优点：单克隆抗体优点：筛选筛选(shixun)出能产生所需抗体的杂出能产生所需抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高可以可以(ky)大量制备大量制备第二十八页，共三十页。动物细胞培养综合4.单克隆抗体(kngt)的应用： 在基础理论研究中具有在基础理论研究中具有(jyu)(jyu)重要意义重要意义 在疾病诊断、治疗在疾病诊断、治疗(zhlio)(zhlio)和预防方面