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文档简介

1、主要内容PCR原理与特点1. PCR反应体系: DNA 聚合酶 DNA 靶序列 两端引物 脱氧核苷酸dNTPs 缓冲液2. DNA的合成方向 5 3 3. Taq DNA聚合酶的作用4. PCR循环： 变性 退火 延伸 Mg2+dCTPdGTPdTTPdATP Taq DNA聚合酶聚合酶 Primer复温PCR 循环 第一步 变性（）PCR循环PCR循环 第二步 退火 （）PCR循环PCR循环 第三步 延伸 （）PCR循环第一个第一个 PCR 循环循环 靶序列完成复制靶序列完成复制PCR循环 循环次数循环次数 DNA的链数的链数 1 21 2 2 22 4 3 23 8 10 210 1024

2、 20 220 1,048,576 30 230 1,073,741,824 10亿亿 PCR循环次数与循环次数与DNA产量关系产量关系PCR循环PCR特点：高效扩增、特点：高效扩增、忠实复制忠实复制 灵敏度高灵敏度高 快捷快捷 简便简便 对样品纯度要求低对样品纯度要求低 可以相对定量可以相对定量PCR反应的特点生物安全二级实验室目的保护操作人员保护环境保护样品 临床临床PCRPCR实验室工作流程实验室工作流程试剂储存和准备试剂储存和准备标本制备区标本制备区扩增区扩增区产物分析区产物分析区PCR实验室平面设计在入口处设缓冲间缓冲间比专用走廊更有意义。有问题！建筑结构阴角 均采用圆弧线条密封洗手

3、池三、实验室设施、仪器设备三、实验室设施、仪器设备 临床基因扩增检验实验室应有充分合理临床基因扩增检验实验室应有充分合理的分区、空间、良好的照明和空调设备的分区、空间、良好的照明和空调设备 实验室仪器设备应保养良好，实验用品实验室仪器设备应保养良好，实验用品要达到相应的要求。要达到相应的要求。加样器的校准？带加样器的校准？带滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循环仪？水浴箱和环仪？水浴箱和/ /或恒温干浴仪？或恒温干浴仪？PCRPCR实验室各区的设备配置表实验室各区的设备配置表 分区分区器材选配器材选配PCR试剂区PCR制备区PCR扩增区PCR分析区PCR仪器仪器生物安全柜生物安全柜加热模块、离心机加热模块、离心机产物分析仪产物分析仪冰箱、混匀器冰箱、混匀器移液器移液器可移动紫外车可移动紫外车办公用品、耗材办公用品、耗材仪器设备及管理仪器设备及管理 加样器加样器：维护、校准：维护、校准 扩增仪扩增仪：维护、校准：维护、校准 恒温干浴仪或水浴箱恒温干浴仪或水

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