第5章-中药制剂中各类化学成分分析

1、第五章第五章 中药制剂中各类化学成分分析中药制剂中各类化学成分分析 本章重点：本章重点：1 1、掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。醌类成分的定性、定量原理与方法。2 2、熟悉、熟悉中药制剂中挥发性成分的定性、定量原中药制剂中挥发性成分的定性、定量原理与方法。理与方法。 第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析一、概述：一、概述：1 1、生物碱：是指来源于生物界（主要是植物界）的一类、生物碱：是指来源于生物界（主要是植物界）的一类含氮有机化合物。大多数有较复杂的环状结构，氮原子含氮有机化合物。大多数有较复杂的环状结构

2、，氮原子结合在环内；因结构中有未共用电子对而多数具有碱性，结合在环内；因结构中有未共用电子对而多数具有碱性，可以和酸成盐；大都具有特殊而显著的生理活性。可以和酸成盐；大都具有特殊而显著的生理活性。2 2、生物体内普遍存在的含氮有机化合物，氨基酸、蛋白、生物体内普遍存在的含氮有机化合物，氨基酸、蛋白质、核酸及某些含氮维生素除外。质、核酸及某些含氮维生素除外。3 3、植物里存在的生物碱的含量差别较大，但生物碱大多、植物里存在的生物碱的含量差别较大，但生物碱大多有明显的生理活性，故常用该成分作定性定量依据。有明显的生理活性，故常用该成分作定性定量依据。在在植物体中，生物碱往往和有机酸结合成盐的形式存

3、在。植物体中，生物碱往往和有机酸结合成盐的形式存在。4 4、含、含生物碱的中药多分布在防己科、罂粟科、毛茛科、生物碱的中药多分布在防己科、罂粟科、毛茛科、豆科、小檗科等双子叶植物中，具体药材和相应成分见豆科、小檗科等双子叶植物中，具体药材和相应成分见书书P P96969797. .二、结构特征及理化性质：二、结构特征及理化性质：（一）结构特征：生物碱大多由（一）结构特征：生物碱大多由C C、H H、N N、O O元素组成，元素组成，结构复杂，种类多。通常根据氮杂环的结构特点不同将结构复杂，种类多。通常根据氮杂环的结构特点不同将生物碱分为多种结构类型，常见的有吡咯类、蒎啶类、生物碱分为多种结构类

4、型，常见的有吡咯类、蒎啶类、吲哚里西啶吲哚里西啶类类、莨菪烷类、喹啉类、异喹啉类、莨菪烷类、喹啉类、异喹啉类 、吲哚、吲哚类等。类等。NH吡咯吡咯NH蒎啶蒎啶N吲哚里西吲哚里西啶啶NHHCH3莨菪烷莨菪烷N喹啉喹啉N异喹啉异喹啉NH吲哚吲哚（二）理化性质：（二）理化性质：1 1、物理性状：、物理性状：多数为无色或白色结晶性固体，小分子多数为无色或白色结晶性固体，小分子生物碱有挥发性。个别具有升华性。有的有荧光，多数生物碱有挥发性。个别具有升华性。有的有荧光，多数味苦。味苦。2 2、旋光性：大多数生物碱有旋光性，多呈左旋。旋光、旋光性：大多数生物碱有旋光性，多呈左旋。旋光性与生理活动密切相关。一

5、般左旋体性与生理活动密切相关。一般左旋体生理活性生理活性强。强。3 3、溶解性：、溶解性：大多数生物碱难溶于水，易溶于苯、乙醚、氯仿等亲大多数生物碱难溶于水，易溶于苯、乙醚、氯仿等亲脂性有机溶剂。脂性有机溶剂。与酸结合生成盐后水溶性增加，但在水中的溶解度有与酸结合生成盐后水溶性增加，但在水中的溶解度有差异。一般无机酸盐的水溶性大于有机酸盐；无机酸盐差异。一般无机酸盐的水溶性大于有机酸盐；无机酸盐中含氧酸盐的溶解度大于卤代酸盐。小分子有机酸盐大中含氧酸盐的溶解度大于卤代酸盐。小分子有机酸盐大于大分子有机酸盐。于大分子有机酸盐。季铵型生物碱、具有半极性的季铵型生物碱、具有半极性的N N、O O配位

6、键的生物碱、配位键的生物碱、酰胺碱易溶于水。酰胺碱易溶于水。某些小分子或液体生物碱既可溶于水也可溶于亲脂性某些小分子或液体生物碱既可溶于水也可溶于亲脂性有机溶剂。有机溶剂。含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。热苛性碱液。4 4、沉淀反应：、沉淀反应：大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。不溶于水的复盐或分子复合物。 沉淀试剂多为分子量沉淀试剂多为分子量较大的碘化物复盐，重金属盐，大分子酸类等。常用较大的碘化物复盐，重金属盐，大分子酸类等。常用的有：碘

7、化铋钾、碘的有：碘化铋钾、碘- -碘化钾等。碘化钾等。注意假阳性的干扰。它们是酸水浸出液中的蛋白质注意假阳性的干扰。它们是酸水浸出液中的蛋白质、多肽、鞣质。所以进行沉淀反应前，要净化。、多肽、鞣质。所以进行沉淀反应前，要净化。5 5、显色反应：、显色反应：生物碱在一定生物碱在一定pHpH条件下可与一些酸性染料生成有色条件下可与一些酸性染料生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出。络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出。结构中含有酯键的生物碱可与异羟肟酸铁试剂反应结构中含有酯键的生物碱可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色。产生紫红色。6 6、碱性：、碱性：氮原子的杂化方式（最主要因素）氮原子的杂化方式

8、（最主要因素）SPSP3 3SPSP2 2SPSP；碱性集团：胍基碱性集团：胍基 季铵碱季铵碱 N- N-烷杂环烷杂环 脂肪胺脂肪胺 芳胺类（芳杂环）芳胺类（芳杂环） 酰胺酰胺7 7、紫外光谱特征：、紫外光谱特征：结构中有共轭体系的生物碱均有紫外吸收。结构中有共轭体系的生物碱均有紫外吸收。结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pHpH值有关。值有关。三、定性鉴别：三、定性鉴别：（一）一般理化鉴别：（一）一般理化鉴别：主要应用生物碱沉淀反应主要应用生物碱沉淀反应(1)(1)生物碱

9、的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加硅钨酸生成淡黄生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加硅钨酸生成淡黄色或灰白色色或灰白色沉淀沉淀。(2)(2)生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加碘生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加碘- -碘化钾试剂碘化钾试剂数滴，产生棕色或褐色沉淀。数滴，产生棕色或褐色沉淀。 BHBH+ + + I + I2 2-K-K+ +I I- - BI BI2 2HIHI（棕、褐色）（棕、褐色） + K+ K+ +(3)(3)生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加碘化铋钾、碘化生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加碘化铋钾、碘化汞钾试剂数滴，产生红棕色沉淀、类白色沉淀。汞钾试剂数滴，产生红棕

10、色沉淀、类白色沉淀。 BHBH+ + + BiI+ BiI3 3KI BBiIKI BBiI3 3HIHI（红棕色）（红棕色） + K+ K+ + BH BH+ + + HgI + HgI2 2KI BHgIKI BHgI2 22HI2HI（类白色）（类白色） + K+ K+ + （4 4）生物碱的水溶液在中性条件下加苦味酸生成黄色沉淀。生物碱的水溶液在中性条件下加苦味酸生成黄色沉淀。（5 5）雷氏铵盐与季铵碱生成红色沉淀。）雷氏铵盐与季铵碱生成红色沉淀。（6 6）酸水浸出液中的蛋白质、多肽、鞣质等也可以与酸水浸出液中的蛋白质、多肽、鞣质等也可以与沉淀试剂发生反应，沉淀试剂发生反应，造成假阳性

11、结果。所以进行沉淀造成假阳性结果。所以进行沉淀反应前，要净化除去干扰成分。反应前，要净化除去干扰成分。（7 7）中药制剂中有两种以上）中药制剂中有两种以上中药含有生物碱中药含有生物碱成分，沉成分，沉淀反应定性鉴别就难以说明问题。淀反应定性鉴别就难以说明问题。（二）色谱鉴别：（二）色谱鉴别：1 1、薄层色谱法：首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液、薄层色谱法：首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液经浓缩后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层经浓缩后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层析后喷洒生物碱显色剂，再根据生物碱的特性，选择特析后喷洒生物碱显色剂，再根据生物碱的特性，选择特异的颜色反应或荧

12、光波长进行观察，并应用纯品对照或异的颜色反应或荧光波长进行观察，并应用纯品对照或标准药材对照，有时须作阴性对照后才能确定成分。标准药材对照，有时须作阴性对照后才能确定成分。吸附剂：硅胶、氧化铝。吸附剂：硅胶、氧化铝。展开剂：多用氯仿、苯等低极性溶剂，可加入其他溶展开剂：多用氯仿、苯等低极性溶剂，可加入其他溶剂调整展开剂的极性。剂调整展开剂的极性。因硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶板上成盐，因硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶板上成盐，易形成复斑，故用硅胶为吸附剂时，一般易形成复斑，故用硅胶为吸附剂时，一般应用碱性系统应用碱性系统展开剂展开剂或使薄层分离在或使薄层分离在碱性环境碱性环境下进行。

13、下进行。显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾之显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾之后再喷硝酸钠试剂，可使样本斑点更加清晰。后再喷硝酸钠试剂，可使样本斑点更加清晰。也可用碘蒸气，硫酸铈等试剂显色。也可用碘蒸气，硫酸铈等试剂显色。 2 2、纸色谱法：、纸色谱法：可用于生物碱盐或游离碱的鉴别。可用于生物碱盐或游离碱的鉴别。主要是以水为固定相的正相纸色谱法，分离效果常主要是以水为固定相的正相纸色谱法，分离效果常取决于流动相的性质。取决于流动相的性质。利用纸色谱来快速鉴别乌头中双酯类生物碱和醇胺利用纸色谱来快速鉴别乌头中双酯类生物碱和醇胺类生物碱有其独到之处。类生物碱有其独到之处。所用

14、显色剂基本和薄层色谱法相同，但含硫酸的试所用显色剂基本和薄层色谱法相同，但含硫酸的试剂不适用。剂不适用。 3 3、高效液相色谱法：、高效液相色谱法：适合结构十分相似的生物碱的鉴别。适合结构十分相似的生物碱的鉴别。在恒定的高效液相色谱条件下，各种生物碱都具有一定在恒定的高效液相色谱条件下，各种生物碱都具有一定的保留时间，的保留时间，保留时间保留时间可作为定性鉴别的参数。用供试品可作为定性鉴别的参数。用供试品与对照品相应的与对照品相应的保留时间进行比较来鉴别。保留时间进行比较来鉴别。若色谱条件不能恒定，将已知对照品加入供试品中，利若色谱条件不能恒定，将已知对照品加入供试品中，利用峰面积或峰高加大法

15、进行检识。用峰面积或峰高加大法进行检识。为保护色谱柱，供试品要经滤膜过滤后再进样，色谱柱为保护色谱柱，供试品要经滤膜过滤后再进样，色谱柱前也要使用保护柱。前也要使用保护柱。4 4、气相色谱法：适用于具挥发性且加热不分解的生物碱、气相色谱法：适用于具挥发性且加热不分解的生物碱的分离和鉴定。的分离和鉴定。四、含量测定：四、含量测定：（一）总生物碱含量测定：（一）总生物碱含量测定：1 1、化学反应法：使用此法，要求样品供试液中总生物碱成、化学反应法：使用此法，要求样品供试液中总生物碱成分纯度高。常用于处方药味少，内含成分简单的制剂。包括分纯度高。常用于处方药味少，内含成分简单的制剂。包括重量分析法和

16、容量分析法（滴定分析法），其中酸碱滴定法重量分析法和容量分析法（滴定分析法），其中酸碱滴定法最常用。最常用。酸碱滴定法：酸碱滴定法：游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过量标准酸溶液中，再用标准碱溶液回滴。量标准酸溶液中，再用标准碱溶液回滴。生物碱盐在水或乙醇介质中用强碱溶液滴定。一般使其溶生物碱盐在水或乙醇介质中用强碱溶液滴定。一般使其溶于于9090乙醇溶液中（因在乙醇溶液中（因在70%70%90%90%乙醇介质中终点比在水中乙醇介质中终点比在水中明显），可用标准碱乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。明显），可用标准碱乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。若选择的溶剂及指

17、示终点方法合适，还可用非水滴定法。若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法。 2 2、分光光度法：多采用单波长光度法测定中药制剂中总、分光光度法：多采用单波长光度法测定中药制剂中总生物碱成分的含量。测定波长可以是被测生物碱本身的生物碱成分的含量。测定波长可以是被测生物碱本身的吸收波长，也可是加入试剂显色后的波长。供试品要经吸收波长，也可是加入试剂显色后的波长。供试品要经过分离净化才可测定。过分离净化才可测定。(1)(1)直接测定：直接测定：原理：不经过化学反应，利用生物碱自身的光吸收直原理：不经过化学反应，利用生物碱自身的光吸收直接进行分光光度法测定的方法。接进行分光光度法测定的方法。

18、特点：不加试剂。特点：不加试剂。适用范围：一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂适用范围：一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。注意溶液中有其他有色物质或中总生物碱的含量测定。注意溶液中有其他有色物质或有紫外吸收、荧光吸收的物质时要先排除。有紫外吸收、荧光吸收的物质时要先排除。（2 2）离子对萃取比色法：用于中药制剂中微量生物碱）离子对萃取比色法：用于中药制剂中微量生物碱类成分的含量测定。类成分的含量测定。原理：原理：生物碱生物碱在一定在一定pHpH介质中，与一些试剂定量地结合介质中，与一些试剂定量地结合为有色离子对，此离子对可定量转溶于某些有机溶剂，为有色离子对，此离子对可

19、定量转溶于某些有机溶剂，然后在一定波长下测定有机溶剂的吸收度，即可按分光然后在一定波长下测定有机溶剂的吸收度，即可按分光光度法计算生物碱的含量。光度法计算生物碱的含量。常用做离子对配位体的酸性染料有甲基橙、溴麝香草酚常用做离子对配位体的酸性染料有甲基橙、溴麝香草酚蓝（蓝（BTBBTB）等）等. .酚类和羧酸类有苦味酸、苯甲酸等。酚类和羧酸类有苦味酸、苯甲酸等。无机离子有无机离子有ClCl- -BrBr- -等。等。酸性染料比色法：酸性染料比色法：特点：在一定特点：在一定pHpH介质中，生物碱盐阳离子与一些酸性染料介质中，生物碱盐阳离子与一些酸性染料阴离子定量地结合为有色离子对，此离子对可定量溶

20、于某阴离子定量地结合为有色离子对，此离子对可定量溶于某些有机溶剂，然后在一定波长下测定此有机溶剂的吸收度些有机溶剂，然后在一定波长下测定此有机溶剂的吸收度，即可按分光光度法计算生物碱的含量。，即可按分光光度法计算生物碱的含量。 BH BH+ +In+In- - (BH (BH+ +InIn- -) BH) BH+ +InIn- -注意事项：注意事项：a a选择适宜的选择适宜的pHpH值是本法关键之一：值是本法关键之一：pHpH值低生物碱呈阳离值低生物碱呈阳离子而酸性染料为游离状态。子而酸性染料为游离状态。 pHpH值高则酸性染料呈阴离子值高则酸性染料呈阴离子但生物碱为游离状态。两情况阴阳离子均

21、不能定量结合。但生物碱为游离状态。两情况阴阳离子均不能定量结合。pHpH值的选择根据值的选择根据染料性质和生物碱碱性确定。染料性质和生物碱碱性确定。b b选择适宜的有机溶剂是本法关键之二：要求对离子对溶选择适宜的有机溶剂是本法关键之二：要求对离子对溶解度好且无水，常用氯仿、二氯甲烷等。解度好且无水，常用氯仿、二氯甲烷等。c c选择适宜的酸性染料是本法关键之三：最好用选择适宜的酸性染料是本法关键之三：最好用溴麝香草溴麝香草酚蓝（酚蓝（BTBBTB）。）。d d应防止操作时混入水分。有机溶剂提取液可加入脱水剂应防止操作时混入水分。有机溶剂提取液可加入脱水剂（如无水硫酸钠）或经滤纸滤过除去微量水分。

22、（如无水硫酸钠）或经滤纸滤过除去微量水分。雷氏盐比色法：雷氏盐比色法：特点：特点：雷氏盐雷氏盐(NH(NH4 4Cr(NHCr(NH3 3) )2 2(SCN)(SCN)4 4HH2 2O)O)在在酸性介质中可与生物碱类成分定量地生成难溶于酸性介质中可与生物碱类成分定量地生成难溶于水的水的生物碱雷氏盐沉淀生物碱雷氏盐沉淀，此沉淀易溶于，此沉淀易溶于丙酮，丙酮，其其丙酮溶液所呈现的吸收特征，是由于分子结构中丙酮溶液所呈现的吸收特征，是由于分子结构中的硫氰酸铬铵部分，而不是结合的生物碱部分，的硫氰酸铬铵部分，而不是结合的生物碱部分，其吸收值与生物碱样品本身或溶剂无关。其吸收值与生物碱样品本身或溶剂

23、无关。因此，因此，有两种方法计算样品中生物碱的含量：有两种方法计算样品中生物碱的含量：a a将沉淀分离洗净，溶于丙酮（或甲醇），于将沉淀分离洗净，溶于丙酮（或甲醇），于520520526nm526nm（溶于甲醇，（溶于甲醇，maxmax为为427nm427nm）波长处用分光光度）波长处用分光光度仪测定吸收度，换算生物碱的含量。仪测定吸收度，换算生物碱的含量。雷氏盐雷氏盐在丙酮中的在丙酮中的摩尔吸收系数为摩尔吸收系数为106.5(106.5(单盐，即雷氏盐与单盐，即雷氏盐与1 1分子生物碱分子生物碱结合生成的盐结合生成的盐) )或或213.0(213.0(双盐双盐) )。故可根据其吸收值。故可根

24、据其吸收值A A按按下式直接计算样品下式直接计算样品量量而不需绘制标准曲线。而不需绘制标准曲线。 W =（ A/）MV式中，式中， W：生物碱雷氏盐沉淀的重量（：生物碱雷氏盐沉淀的重量（mg）；）； M：生：生物碱雷氏盐沉淀的分子量物碱雷氏盐沉淀的分子量; ; A：吸收度；：吸收度；：硫氰酸铬硫氰酸铬铵摩尔吸收系数铵摩尔吸收系数；V：丙酮液毫升数。：丙酮液毫升数。 本方法不需要标准品，但需注意生物碱本方法不需要标准品，但需注意生物碱雷氏盐沉淀雷氏盐沉淀是生成单盐还是双盐，并要注意样品的净化。是生成单盐还是双盐，并要注意样品的净化。b b也可以精密加入过量雷氏盐试剂，滤除生成的也可以精密加入过量

25、雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱生物碱雷氏盐沉淀，之后用分光光度法测定滤液中过量雷氏雷氏盐沉淀，之后用分光光度法测定滤液中过量雷氏盐的含量，间接计算生物碱的含量。盐的含量，间接计算生物碱的含量。注意事项：注意事项：A A雷氏盐使用前新鲜配制，沉淀反应需在低温下进行。雷氏盐使用前新鲜配制，沉淀反应需在低温下进行。B B供试品为稀的水溶液，沉淀前应浓缩。供试品为稀的水溶液，沉淀前应浓缩。溶液中有干扰溶液中有干扰物质时，应事先经过纯化处理。物质时，应事先经过纯化处理。C C雷氏盐的丙酮或丙酮雷氏盐的丙酮或丙酮- -水溶液的吸收值随时间而变化水溶液的吸收值随时间而变化，故应尽快测定。，故应尽快测定。异羟肟

26、酸铁反应：异羟肟酸铁反应：特点：含酯键的生物碱在碱性介质中加热，酯键水解后特点：含酯键的生物碱在碱性介质中加热，酯键水解后产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，异羟肟酸再与产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，异羟肟酸再与FeFe3+3+生成紫红色的生成紫红色的异羟肟酸铁，在一定浓度符合郎伯比异羟肟酸铁，在一定浓度符合郎伯比尔定律，可用分光光度法进行含量测定。尔定律，可用分光光度法进行含量测定。注意事项：适用于含酯键的生物碱的含量测定，但供试注意事项：适用于含酯键的生物碱的含量测定，但供试品溶液中不能含有其他酯类或羧酸类成分。品溶液中不能含有其他酯类或羧酸类成分。（二）单体生物碱含量测定：多用色谱法。

27、（二）单体生物碱含量测定：多用色谱法。1 1、薄层色谱（扫描）法：薄层色谱技术对生物碱类成分分、薄层色谱（扫描）法：薄层色谱技术对生物碱类成分分离和测定需要结合生物碱的特性提取和纯化，离和测定需要结合生物碱的特性提取和纯化，后使用碱性展后使用碱性展开剂或在碱性环境中展开开剂或在碱性环境中展开。在薄层扫描定量时，须首先作一。在薄层扫描定量时，须首先作一工作曲线，目的是考察工作曲线是否通过原点，其次需要找工作曲线，目的是考察工作曲线是否通过原点，其次需要找出线性范围，以便摸索样品点样量。此外薄层扫描定量还需出线性范围，以便摸索样品点样量。此外薄层扫描定量还需要采用随行点样法，以便尽量减小误差要采用

28、随行点样法，以便尽量减小误差. .注意：注意：选用吸附剂、展开剂及显色方法与薄层鉴别相似，选用吸附剂、展开剂及显色方法与薄层鉴别相似，但更严格。但更严格。显色剂常用改良碘化铋钾，挥干展开剂后喷洒，显色要均显色剂常用改良碘化铋钾，挥干展开剂后喷洒，显色要均匀匀. .2 2、高效液相色谱、高效液相色谱法法：生物碱类成分进行高效液相：生物碱类成分进行高效液相色谱分析时，可采用正相、反相和离子对色谱，色谱分析时，可采用正相、反相和离子对色谱，其中以反相高效液相色谱应用较多。在反相高效其中以反相高效液相色谱应用较多。在反相高效液相色谱中为了克服游离硅醇基的影响，采取了液相色谱中为了克服游离硅醇基的影响，

29、采取了以下的措施：以下的措施：(1)(1)流动相方面的改进：流动相方面的改进： A A、加入硅醇基抑制剂，最常用的硅醇基抑制剂是加入硅醇基抑制剂，最常用的硅醇基抑制剂是三乙胺三乙胺; ;B B、在流动相中加入离子对试剂在流动相中加入离子对试剂, ,掩蔽掩蔽生物碱类成生物碱类成分的碱性基团分的碱性基团; ;C C、在流动相中加入季铵盐试剂，例如在水在流动相中加入季铵盐试剂，例如在水- -甲醇甲醇流动相中加入流动相中加入0.01mol0.01molL L的溴化四甲基胺。的溴化四甲基胺。 (2)(2)固定相方面的改进：选择碳链较短的键合相硅固定相方面的改进：选择碳链较短的键合相硅胶填料，例如用胶填料

30、，例如用C C8 8比比C C1818好。好。含量测定操作基本流程：含量测定操作基本流程：样品供试液制备：样品供试液制备：样品根据生物碱通性提取、净样品根据生物碱通性提取、净化、定容制备供试液。化、定容制备供试液。标准液配制：标准液配制：先配成标准储备液，再配制成系列先配成标准储备液，再配制成系列标准液。标准液。测试条件选择：测试条件选择： 色谱柱（多用色谱柱（多用C C1818）、流动相）、流动相( (多多用甲醇用甲醇- -水或乙腈水或乙腈- -水水) )、流速（多用、流速（多用1ml/min1ml/min）、）、检测器检测器( (多用紫外检测器多用紫外检测器) )、测试波长（多为被测、测试

31、波长（多为被测物最大吸收波长）。物最大吸收波长）。选择定量方式，之后进样、检测、计算含量。选择定量方式，之后进样、检测、计算含量。3 3、气相色谱法：气相色谱法适用于有挥发性的，、气相色谱法：气相色谱法适用于有挥发性的，遇热不分解的单体生物碱的含量测定。遇热不分解的单体生物碱的含量测定。 第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析一、概述：一、概述：1 1、黄酮：以前黄酮类化合物主要是指基本母核为、黄酮：以前黄酮类化合物主要是指基本母核为2-2-苯苯基色原酮类的化合物，现在则是泛指两个苯环（基色原酮类的化合物，现在则是泛指两个苯环（A A与与B B环）通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。

32、环）通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。是一类重要的天然色素，也是中药中一类重要的有效是一类重要的天然色素，也是中药中一类重要的有效成分。成分。OO12345678OO12345678123456OO12345678123456色原酮2苯基色原酮C6C3C62 2、黄酮类化合物分布广泛，多分布于高等植物中，集中、黄酮类化合物分布广泛，多分布于高等植物中，集中在被子植物。以唇形科、玄参科、爵麻科、菊科等存在较在被子植物。以唇形科、玄参科、爵麻科、菊科等存在较多。常以游离态或与糖结合成苷的形式存在。在花、叶、多。常以游离态或与糖结合成苷的形式存在。在花、叶、果中多为苷；在木质部多为苷元。含黄

33、酮类成分的常用中果中多为苷；在木质部多为苷元。含黄酮类成分的常用中药见书药见书P P106106。3 3、生理活性：多种多样，作用不强，毒性不大。、生理活性：多种多样，作用不强，毒性不大。心血管方面作用心血管方面作用 镇咳、祛痰镇咳、祛痰保肝保肝 抗菌、抗病毒抗菌、抗病毒其它：泻下、解痉、抗癌、抑制爱滋病毒等其它：泻下、解痉、抗癌、抑制爱滋病毒等二、结构特征及理化性质：二、结构特征及理化性质：（一）结构特征：（一）结构特征：依据依据C C环的成环、氧化和取代方式的环的成环、氧化和取代方式的差异，将重要的天然黄酮类化合物苷元结构分类如下：差异，将重要的天然黄酮类化合物苷元结构分类如下：1 1、黄

34、酮和黄酮醇黄酮和黄酮醇2 2、二氢黄酮和二氢黄酮醇二氢黄酮和二氢黄酮醇：黄酮的：黄酮的2 2、3 3位双键被饱和位双键被饱和3 3、异黄酮和二氢异黄酮异黄酮和二氢异黄酮：由由2-2-苯基变为苯基变为3-3-苯基取代苯基取代4 4、查尔酮和二氢查尔酮查尔酮和二氢查尔酮：可以转化：可以转化5 5、橙酮橙酮：橙酮：橙酮C C环为五元环结构环为五元环结构。6 6、花色素类和黄烷醇类花色素类和黄烷醇类：无羰基。：无羰基。另外大多数另外大多数黄酮类化合物黄酮类化合物可结合成可结合成苷，苷苷，苷中的糖分类有中的糖分类有一糖：一糖：葡萄糖、鼠李糖等；葡萄糖、鼠李糖等；二糖：二糖：槐糖、龙胆二糖、芸香糖、新橙皮

35、糖槐糖、龙胆二糖、芸香糖、新橙皮糖等等三糖：三糖：龙胆三糖龙胆三糖等等（二）理化性质：（二）理化性质：1 1、性状：苷元为结晶性固体，苷为无定形粉末。、性状：苷元为结晶性固体，苷为无定形粉末。2 2、溶解性：、溶解性：游离苷元易溶于甲、乙醇，乙酸乙酯，乙醚及稀碱液中游离苷元易溶于甲、乙醇，乙酸乙酯，乙醚及稀碱液中，不溶或难溶于水。游离苷元的母核上引入羟基，水溶性，不溶或难溶于水。游离苷元的母核上引入羟基，水溶性增加，且增加，且水溶性水溶性与羟基数目成正比，羟基甲基化，脂溶性与羟基数目成正比，羟基甲基化，脂溶性增加，水溶性降低。增加，水溶性降低。黄酮苷类易溶于热水，甲醇，乙醇。难溶或不溶于亲脂黄

36、酮苷类易溶于热水，甲醇，乙醇。难溶或不溶于亲脂性有机溶剂，一般多糖苷在水中的溶解度大于单糖苷。性有机溶剂，一般多糖苷在水中的溶解度大于单糖苷。3 3、酸碱性：、酸碱性：黄酮类化合物分子中具有酚羟基，故显酸性。黄酮类化合物分子中具有酚羟基，故显酸性。黄酮类化合物因为分子中的黄酮类化合物因为分子中的-吡喃酮环上的吡喃酮环上的1-1-氧原子有氧原子有未共用电子对，可接受质子而显弱碱性，与强酸结合生成未共用电子对，可接受质子而显弱碱性，与强酸结合生成钅钅羊（羊（yangyang）盐，其极不稳定，可加水分解。不同类型的）盐，其极不稳定，可加水分解。不同类型的黄酮溶于浓硫酸时，常表现出不同的颜色，可用于鉴

37、别。黄酮溶于浓硫酸时，常表现出不同的颜色，可用于鉴别。4 4、显色反应：与分子中的酚羟基及、显色反应：与分子中的酚羟基及-吡喃酮环有吡喃酮环有关。关。还原反应：还原反应：a a盐酸盐酸- -镁粉反应：镁粉反应：将样品的甲醇或乙醇液，加入少将样品的甲醇或乙醇液，加入少许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸，即可。许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸，即可。现象：泡沫处呈红色。现象：泡沫处呈红色。应用：黄酮，黄酮醇，二氢黄酮（醇）应用：黄酮，黄酮醇，二氢黄酮（醇）b b四氢硼钠反应四氢硼钠反应: :样品的甲醇液，加等量样品的甲醇液，加等量2%NaBH2%NaBH4 4的甲的甲醇液，加浓盐酸或硫酸，醇液，加浓盐酸或硫

38、酸，即可。即可。现象：溶液生成紫色或紫红色现象：溶液生成紫色或紫红色应用：二氢黄酮类专属反应应用：二氢黄酮类专属反应 与金属盐类试剂的络合反应与金属盐类试剂的络合反应: :分子中具有分子中具有3-3-羟基，羟基，4-4-羰羰基或基或5-5-羟基，羟基，4-4-羰基或邻二酚羟基的黄酮有此反应羰基或邻二酚羟基的黄酮有此反应. .a a三氯化铝显色三氯化铝显色: :样品的乙醇溶液加三氯化铝乙醇溶液显鲜样品的乙醇溶液加三氯化铝乙醇溶液显鲜黄色荧光。（含黄色荧光。（含4 4-OH-OH或或7 7，4-OH4-OH显天蓝色荧光显天蓝色荧光）b b锆盐锆盐- -枸橼酸反应枸橼酸反应: :样品的甲醇液样品的甲

39、醇液加加2%ZrOCl2%ZrOCl2 2/MeOH,/MeOH,生成生成黄色锆络合物，说明有黄色锆络合物，说明有3-OH3-OH或或5-OH5-OH。加。加2%2%枸橼酸，仍呈鲜枸橼酸，仍呈鲜黄色说明有黄色说明有3-OH3-OH，黄色溶液显著褪去，无，黄色溶液显著褪去，无3-OH3-OH有有5-OH5-OH。c c醋酸镁显色醋酸镁显色: :纸片上滴加样品液，喷醋酸镁甲醇液，加热纸片上滴加样品液，喷醋酸镁甲醇液，加热干燥，干燥，UVUV观察。观察。现象：二氢黄酮（醇），天蓝色荧光。现象：二氢黄酮（醇），天蓝色荧光。 黄酮、黄酮醇、异黄酮，显黄黄酮、黄酮醇、异黄酮，显黄- -橙黄橙黄- -褐色褐

40、色荧光荧光.5 5、紫外光谱特征：、紫外光谱特征：黄酮类化合物具有黄酮类化合物具有2-2-苯基色原酮苯基色原酮基本母核基本母核而具有特定吸而具有特定吸收峰，常有两个较强的吸收带。收峰，常有两个较强的吸收带。I I带带(300-400nm) B(300-400nm) B环桂皮酰基环桂皮酰基IIII带带(240-285nm) A(240-285nm) A环苯甲酰基环苯甲酰基黄酮类化合物中加入一些位移试剂如甲醇钠、醋酸钠、黄酮类化合物中加入一些位移试剂如甲醇钠、醋酸钠、三氯化铝等，可使最大吸收波长发生位移，选择性提高，三氯化铝等，可使最大吸收波长发生位移，选择性提高，还可消除杂质干扰，有利于含量测定

41、。还可消除杂质干扰，有利于含量测定。三、定性鉴别：三、定性鉴别：（一）显色反应：（一）显色反应：1 1、盐酸、盐酸- -镁粉反应：镁粉反应：操作：操作：将中药制剂用适当方法提取分离，制成供试将中药制剂用适当方法提取分离，制成供试品溶液。常用的品溶液。常用的提取提取溶剂有甲醇、乙醇或乙酸乙酯溶剂有甲醇、乙醇或乙酸乙酯等；取样品液等；取样品液5 510mL10mL，先，先加入少许镁粉加入少许镁粉，然后，然后加入加入数滴盐酸数滴盐酸，如果有黄酮、黄酮醇或其二氢化合物存，如果有黄酮、黄酮醇或其二氢化合物存在，数分钟后则可产生在，数分钟后则可产生红色红色或紫红色。或紫红色。注意：注意：为避免为避免供试品

42、溶液本身颜色的干扰，可观供试品溶液本身颜色的干扰，可观察泡沫颜色，泡沫为红色，示阳性察泡沫颜色，泡沫为红色，示阳性。查耳酮、橙酮等单纯在浓盐酸作用下也会发生颜查耳酮、橙酮等单纯在浓盐酸作用下也会发生颜色变化，须做空白对照。即不加镁粉只加浓盐酸观色变化，须做空白对照。即不加镁粉只加浓盐酸观察，产生红色即表明溶液中有上述成分。察，产生红色即表明溶液中有上述成分。2 2、与金属盐类试剂的络合反应：、与金属盐类试剂的络合反应： 黄酮类成分能与金属离子如黄酮类成分能与金属离子如AlAl3+3+，ZrZr4+4+等产等产生络合作用，产生荧光或颜色加深等。生络合作用，产生荧光或颜色加深等。 络合作用的条件是

43、黄酮类成分必须具备下络合作用的条件是黄酮类成分必须具备下述条件之一，即述条件之一，即5-5-羟基羟基(a)(a)、3-3-羟基羟基(b)(b)或邻二或邻二酚羟基酚羟基(c)(c)，(a)(a)、(b)(b)都是羟基与都是羟基与4 4位羰基共同位羰基共同与金属离子形成络合物。与金属离子形成络合物。 （二）薄层色谱法：黄酮类成分最常用的定性分析方（二）薄层色谱法：黄酮类成分最常用的定性分析方法。一般采用吸附薄层，常用的吸附剂有硅胶与聚酰法。一般采用吸附薄层，常用的吸附剂有硅胶与聚酰胺，也可用纤维素、硅酸镁等。胺，也可用纤维素、硅酸镁等。 硅胶色谱分离弱极性化合物较好硅胶色谱分离弱极性化合物较好 聚

44、酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷较理想聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷较理想 纤维素薄层则适用于分离多糖纤维素薄层则适用于分离多糖苷苷混合物混合物 展开后的显色反应可采用在紫外光下观察荧光和展开后的显色反应可采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。喷显色剂相配合的方法。操作步骤：操作步骤：供试液制备、对照液制备、准备薄层板、供试液制备、对照液制备、准备薄层板、点样点样 、准备展开剂、展开、显色、色谱识别。、准备展开剂、展开、显色、色谱识别。1 1、硅胶薄层色谱：、硅胶薄层色谱： 用硅胶分离黄酮成分，遵循正相色谱层析规律，化用硅胶分离黄酮成分，遵循正相色谱层析规律，化合物极性越强

45、，所需溶剂的极性越大。合物极性越强，所需溶剂的极性越大。 其其R Rf f值顺序如下：值顺序如下：RCHRCH3 3RHROCHRHROCH3 3R-O-R-O-糖糖ROHROH常用的展开溶剂系统有：常用的展开溶剂系统有： 甲苯甲苯- -甲酸乙酯甲酸乙酯- -甲酸甲酸(541)(541)，分离黄酮甙元；，分离黄酮甙元； 苯苯- -甲醇甲醇(955)(955)，分离黄酮甙元；，分离黄酮甙元； 苯苯- -甲醇甲醇- -乙酸乙酸(3555)(3555)，分离黄酮甙；，分离黄酮甙； 氯仿氯仿- -甲醇甲醇(82)(82)，分离黄酮甙元及甙；，分离黄酮甙元及甙； 苯苯- -乙酸乙酯乙酸乙酯(7.52.5

46、)(7.52.5)或苯或苯- -丙酮丙酮(91)(91)，分离黄酮，分离黄酮甙元衍生物如甲醚或乙酸酯中性成分；甙元衍生物如甲醚或乙酸酯中性成分； 甲苯甲苯- -甲酸乙酯甲酸乙酯- -甲酸甲酸(541)(541)，分离双黄酮成分。，分离双黄酮成分。 展开剂系统中各组分的配比可根据薄层色谱的需要加展开剂系统中各组分的配比可根据薄层色谱的需要加以调整。以调整。2 2聚酰胺薄层色谱：聚酰胺薄层色谱用于分离含游离聚酰胺薄层色谱：聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的黄酮甙与甙元较好。由于各种黄酮类成分取代酚羟基的黄酮甙与甙元较好。由于各种黄酮类成分取代基团的性质、多少和位置的不同，与聚酰胺形成氢键的基团的

47、性质、多少和位置的不同，与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得到分离（能力有所差异而得到分离（酚羟基越多酚羟基越多R Rf f 越小越小）。）。 一般说来，一般说来，聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱展开剂中大多含醇、酸展开剂中大多含醇、酸、水。常用的溶剂系统有：、水。常用的溶剂系统有：甲醇甲醇- -水水(82)(82)，分离黄酮，分离黄酮甙元及甙甙元及甙，苯，苯- -丁酮丁酮- -甲醇甲醇(622)(622)，分离黄酮甙元；，分离黄酮甙元；乙酸乙酸- -水水(12)(12)，分离黄酮甙。，分离黄酮甙。3 3、纤维素薄层色谱：纤维素薄层色谱可用于分离黄、纤维素薄层色谱：纤维素薄层色谱可用于分离黄酮甙类酮

48、甙类( (尤其是尤其是多糖苷多糖苷) )，原理与纸色谱相同，常用的，原理与纸色谱相同，常用的展开剂为展开剂为正丁醇正丁醇- -乙酸乙酸- -水水(415)(415)的上层溶液的上层溶液 。注意：黄酮类成分的纤维素色谱行为是分子中酚羟基注意：黄酮类成分的纤维素色谱行为是分子中酚羟基增多时，增多时，R Rf f值减少；当分子中羟基为甲基或甲氧基所值减少；当分子中羟基为甲基或甲氧基所取代时，取代时，R Rf f值增加。值增加。四、含量测定：四、含量测定：（一）总黄酮含量测定：用分光光度法（一）总黄酮含量测定：用分光光度法1 1、直接测定法：利用黄酮类自身的光吸收，直接以最、直接测定法：利用黄酮类自身

49、的光吸收，直接以最大吸收波长测定其吸收度，以芦丁等为对照品计算含量大吸收波长测定其吸收度，以芦丁等为对照品计算含量。多用标准曲线法。多用标准曲线法。注意事项：注意事项：一般用于药味较少，干扰不大的中药制剂一般用于药味较少，干扰不大的中药制剂中总黄酮类化合物的含量测定。中总黄酮类化合物的含量测定。 max max 黄酮醇黄酮醇:285:285358nm;358nm;黄酮黄酮:304:304350nm;350nm;二氢黄酮（醇）：二氢黄酮（醇）：270270295nm295nm；异黄酮：异黄酮：245245270nm270nm；查耳酮：查耳酮：340340390nm390nm。2 2、加试剂显色测

50、定法：利用黄酮类化合物与金、加试剂显色测定法：利用黄酮类化合物与金属盐类试剂的络合反应来显色测定。属盐类试剂的络合反应来显色测定。 最常用的是与铝盐反应显色，试剂为三氯化最常用的是与铝盐反应显色，试剂为三氯化铝或硝酸铝。测定总黄酮时常用芦丁作对照品，铝或硝酸铝。测定总黄酮时常用芦丁作对照品，对照品与供试品中均加入显色试剂，对照品与供试品中均加入显色试剂，多用标准曲多用标准曲线法测定含量。线法测定含量。（二）单体黄酮成分的含量测定：（二）单体黄酮成分的含量测定：1 1、薄层色谱（扫描）法：测定中药制剂中单体黄酮、薄层色谱（扫描）法：测定中药制剂中单体黄酮类成分的类成分的关键是分离关键是分离。样品

51、经有机溶剂或水提取后，。样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素或聚酰胺进行层析，以达到分离的可用硅胶、纤维素或聚酰胺进行层析，以达到分离的目的。目的。 层析后将含有待测成分的色斑用薄层扫描仪直接层析后将含有待测成分的色斑用薄层扫描仪直接测定，多用双波长薄层扫描法。测定，多用双波长薄层扫描法。2 2、高效液相色谱法：、高效液相色谱法：由于黄酮类化合物在紫外光区有较强的吸收，故使用由于黄酮类化合物在紫外光区有较强的吸收，故使用HPLCHPLC法检测灵敏度较高，法检测灵敏度较高，因此该法在黄酮类单体成分的定因此该法在黄酮类单体成分的定量分析中最常用。量分析中最常用。 HPLCHPLC色谱条件分正

52、相和反相色谱两类色谱条件分正相和反相色谱两类，其中反相色谱应用较多。，其中反相色谱应用较多。黄酮类成分的黄酮类成分的RP-HPLCRP-HPLC：固定相大多用固定相大多用C C1818键合相，流动键合相，流动相常用甲醇相常用甲醇- -水水- -乙酸或乙腈乙酸或乙腈- -水。水。黄酮类成分的黄酮类成分的NP-HPLCNP-HPLC：固定相多用氰基或氨基键合相硅固定相多用氰基或氨基键合相硅胶，流动相可套用薄层色谱条件，但极性要相对小一点。胶，流动相可套用薄层色谱条件，但极性要相对小一点。多用于多用于羟基或乙酰化黄酮类的含量测定。羟基或乙酰化黄酮类的含量测定。检测器：多用紫外检测器。检测器：多用紫外

53、检测器。 第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析一、概述：一、概述：1 1、三萜皂苷：三萜是由、三萜皂苷：三萜是由3030个碳原子组成的萜类化合物，根个碳原子组成的萜类化合物，根据据“异戊二烯定则异戊二烯定则”，多数三萜被认为是由，多数三萜被认为是由6 6个异戊二烯（个异戊二烯（三十个碳）缩合而成，三十个碳）缩合而成，该类化合物在自然界分布广泛，有该类化合物在自然界分布广泛，有的以游离形式存在，更多则以与糖结合成苷的形式存在，的以游离形式存在，更多则以与糖结合成苷的形式存在，该苷类化合物该苷类化合物多数可溶于水，水溶液振摇后产生似肥皂溶多数可溶于水，水溶液振摇后产生似肥皂溶液样泡沫

54、，故被称为三萜皂苷。该类皂苷多具有羧基，所液样泡沫，故被称为三萜皂苷。该类皂苷多具有羧基，所以有时又称之为酸性皂苷。以有时又称之为酸性皂苷。 R2OHOHR1O3206ROHHHCOOHO32 2、生理活性：三萜类化合物具有溶血、抗炎、生理活性：三萜类化合物具有溶血、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗生育等作用。抗生育等作用。3 3、分布：三萜皂苷广泛存在于自然界中，菌、分布：三萜皂苷广泛存在于自然界中，菌类、蕨类、单子叶、双子叶植物、动物及海类、蕨类、单子叶、双子叶植物、动物及海洋生物中均有分布，尤以双子叶植物中分布洋生物中均有分布，尤以双子叶植物中分布最多。含三萜皂苷的具

55、体药材和其相应成分最多。含三萜皂苷的具体药材和其相应成分见书见书P P114114. .二、结构特征及理化性质：二、结构特征及理化性质：（一）结构特征：四环三萜和五环三萜是两种在中药中（一）结构特征：四环三萜和五环三萜是两种在中药中分布最广的三萜类化合物。分布最广的三萜类化合物。1 1、四环三萜：基本母核为环戊烷骈多氢菲，、四环三萜：基本母核为环戊烷骈多氢菲，1717位为位为个碳原子组成的侧链，母核上有个角甲基。它包括达个碳原子组成的侧链，母核上有个角甲基。它包括达玛烷型、羊毛脂甾烷型、大玛烷型、羊毛脂甾烷型、大戟戟烷型、原萜烷型、葫芦素烷型、原萜烷型、葫芦素烷型烷型 、楝烷型等。、楝烷型等。

56、2 2、五环三萜：基本骨架为多氢蒎的五环结构，包括齐五环三萜：基本骨架为多氢蒎的五环结构，包括齐墩果烷型、乌苏烷型、羽扇豆烷型、木栓烷型等。墩果烷型、乌苏烷型、羽扇豆烷型、木栓烷型等。甾体皂苷：皂苷元由甾体皂苷：皂苷元由2727个碳组成个碳组成, ,共有共有A A、B B、C C、D D、E E和和F F六个环，也有泡沫反应和溶血性，要注意它与三六个环，也有泡沫反应和溶血性，要注意它与三萜皂萜皂苷的区别。苷的区别。（二）理化性质：（二）理化性质：1 1、性状：游离三萜多有完好的结晶，但三萜皂苷多为、性状：游离三萜多有完好的结晶，但三萜皂苷多为无定型粉末无定型粉末, ,具有苦味和辛辣味具有苦味和

57、辛辣味, ,对人体粘膜有刺激性对人体粘膜有刺激性, ,还具有吸湿性。还具有吸湿性。 2 2、熔点与旋光性：熔点或分解点在、熔点与旋光性：熔点或分解点在200200350350之间，之间，且均有旋光性。且均有旋光性。3 3、溶解性：、溶解性：游离三萜游离三萜溶于苯、氯仿等有机溶剂，不溶于水。溶于苯、氯仿等有机溶剂，不溶于水。 三萜皂苷三萜皂苷可溶于水，易溶于热水、热甲醇、可溶于水，易溶于热水、热甲醇、热乙醇热乙醇和稀醇，难溶于低极性有机溶剂。和稀醇，难溶于低极性有机溶剂。正丁醇与水分层且可正丁醇与水分层且可很好的溶解皂苷，常作为皂苷的提取溶剂。很好的溶解皂苷，常作为皂苷的提取溶剂。4 4、显色反

58、应：三萜化合物（苷元和苷）在无水条件、显色反应：三萜化合物（苷元和苷）在无水条件下，与强酸、三氯乙酸或下，与强酸、三氯乙酸或LewisLewis酸（氯化锌、三氯化酸（氯化锌、三氯化铝、三氯化锑）作用，会产生颜色变化或荧光，放久铝、三氯化锑）作用，会产生颜色变化或荧光，放久褪色。但全饱和且褪色。但全饱和且3 3位又无羟基或羰基的位又无羟基或羰基的三萜三萜化合物化合物呈阴性反应。呈阴性反应。（1 1）醋酐）醋酐- -浓硫酸反应（浓硫酸反应（L-BL-B反应）：将样品溶于醋反应）：将样品溶于醋酐中，加浓硫酸酐中，加浓硫酸- -醋酐（醋酐（1 1：2020），可产生黄），可产生黄红红紫紫蓝等颜色变化，

59、最后褪色（蓝等颜色变化，最后褪色（三萜化合物以显黄色和三萜化合物以显黄色和红色为主，甾体化合物以显蓝色和绿色为主红色为主，甾体化合物以显蓝色和绿色为主）。）。（2 2）氯化锑反应：将样品氯仿或醇溶液点于滤纸上，）氯化锑反应：将样品氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷以喷以20%20%五氯化锑的氯仿溶液（或五氯化锑的氯仿溶液（或三氯化锑饱和的氯三氯化锑饱和的氯仿溶液仿溶液），干燥后），干燥后60607070加热，出现蓝色、灰蓝色，加热，出现蓝色、灰蓝色，灰紫色等多种颜色斑点。灰紫色等多种颜色斑点。5 5、表面活性：绝大多数三萜皂苷水溶液强烈振摇后、表面活性：绝大多数三萜皂苷水溶液强烈振摇后可产生持久的泡沫

60、。可产生持久的泡沫。6 6、溶血作用：大多数皂苷的水溶液有溶血作用，但、溶血作用：大多数皂苷的水溶液有溶血作用，但少数皂苷有抗溶血作用。少数皂苷有抗溶血作用。三、定性鉴别：包括理化鉴别和薄层色谱鉴别。薄层色三、定性鉴别：包括理化鉴别和薄层色谱鉴别。薄层色谱鉴别准确度高，是最常用的鉴别方法。理化鉴别包括谱鉴别准确度高，是最常用的鉴别方法。理化鉴别包括泡沫反应和化学显色反应鉴别，多用于含皂苷的原料药泡沫反应和化学显色反应鉴别，多用于含皂苷的原料药和组成药物少，皂苷含量高的中药制剂。和组成药物少，皂苷含量高的中药制剂。( (一一) )泡沫反应：泡沫反应： 取药品粉末约取药品粉末约1g1g，加水，加水