对鹿茸多肽对β等的保护作用论文：谈对鹿茸多肽对β等的保护作用分析

1、论丈发表专家一中国学术论文用www.59168,net对鹿茸多肽对B等的保护作用论文：谈对鹿茸多肽对B等的保护作用分析【摘要】文章探讨了鹿茸多肽对B淀粉样蛋门诱导誉髓神经元细胞凋亡的保护作用。【主题词】鹿茸多肽作用分析脊髓损伤（spinalcordinjury，sci）是外科常见的创伤，其年发病率逐年升高。在脊髓损伤中，除了原发的物理打击因素造成神经细胞损伤外，已发现损伤区及临近部位的神经细胞存在迟发性的死亡现象，这种死亡与常见的坏死不同，表现为一种程序性死亡（细胞凋亡），细胞凋亡可能参与了脊髓损伤的病理生理过程。caspase3是凋亡过程中最重要的蛋白酶，降低其的表达有助于脊髓损伤的修复和再

2、生。鹿茸系鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。关于鹿茸多肽混合物，近两年，有学者通过实验证明鹿茸多肽对脊髓损伤后的神经细胞有保护作用，本实验应用鹿茸多肽作用于B淀粉样爼H诱导的存髄神经兀细胞凋亡的保护作用，以进一步阐述其对脊髓神经细胞保护作用的机理。一实验材料15d孕鼠购自吉林大学实验动物中心；dmem培养基、胎牛血清、胰蛋白酶购自invitrogen公司；细胞培养瓶和培养板购自castar公司；神经生长因子（ngf）购自sigma公论文发表专素一中国学术论文丽www.59168,netB淀粉样蛋白二甲基亚砜（dmso）购3抗体购自北京中杉司；鹿茸多肽由长春中医药大学惠赠；（aB2

3、5-35）、四甲基偶氮唑盐（mtt）、自（sigma公司）;兔多克隆caspase金桥生物技术有限公司二实验方法1凝聚态aB25-35的制备用超纯水将冻干的a325-35溶解配成100卩mol/1的储存液，于-20C保存，使用前配成所需浓度，于37C孵育24h备用。2胎鼠脊髓细胞悬液制备及培养取孕15d大鼠，10%水合氯醛腹腔麻醉后，无菌状态下取出胎鼠。用hank's液冲洗数遍后，放于培养皿中。在解剖显微镜下从背侧完全暴露脑干以下整条脊髓，从正中沟处用钨丝针切除双侧脊髓的后外侧部。将取下的脊髓腹侧组织，经hank's液冲洗后，剥去表面的血管等，用显微剪子细剪切成糜状，越细越好；

4、然后用0.25%胰酶37C消化20min后，用吸管轻轻吹打数次，经200目滤网过滤，离心弃上清，用含15%胎牛血清培养基以1X106/ml接种于塑料培养瓶中。将细胞培养在含15%胎牛血清、100u/ml氨苄青霉素及100u/ml链霉素的dmem培养基中，于37C、饱和湿度、5%co2浓度下培养，23d换液一次。实验均取对数生长期细胞，实验前12h细胞换用无血清培养液，观察不同浓度a325-35的作用。论文发表专家一中国学木论文网H53mtt比色法检测细胞活力观察不同终浓度(0、5、10、20、25、30卩mol/1)的ap25-35作用24h后，细胞活力的变化，细胞接种于96孔板24h后加入不

5、同浓度的ap25-35作用24h，每个浓度设4个复孔I，同时设与实验孔平行的空白对照，最后比色时以对照孔调零。共同孵育24h后更换培养基，每孔加入180卩I的培养基和20卩I的mtt(5mg/ml)，置37C、5%co2培养箱培养4h，弃培养液，每孔加入200卩Idmso,37C孵育30min，至结晶物充分溶解。在多功能酶标仪上测定570nm的吸光度(d570),其与对照吸光度的比值作为相对细胞活力。4流式细胞仪检测将细胞接种于24孔板，待达到80%融合时，按下列分组进行实验：a.对照组，b.ap25-35(25卩mol/l),c.ap25-35(25卩mol/l)+鹿茸多肽(400mg/ml):3,d.照射ap25-35(25卩mol/l)+ngf(20ng/ml)组。各组均6复孔。将24h以后各组细胞用0.25%胰蛋白酶消化，1000r/min离心5min，弃上清；用500卩l5mmol/ledta/0.01mol/lpbs洗涤细胞；再加入50卩l10g/lrnasea，室温下孵育30min;最后加入500卩l100m