茶叶中茶多酚、氨基酸的测定

1、茶叶中茶多酚的测定茶叶中茶多酚的测定 茶多酚茶多酚 茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20203535，由约由约3030种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。茶多酚的性质：茶多酚的性质： 能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，对热、酸较稳定，2%2%的溶液加热至的溶液加热至120 120 并保持并保持3030minmin，无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。1 1）茶多酚能清除活性氧自由基，且能有效消除脂）茶多酚能清除活性

2、氧自由基，且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。2 2）茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色）茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用。葡萄球菌等有害菌的作用。3 3）具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑）具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应。好的效应。是一种有开发前景的天然是一种有开发前景的天然抗氧化剂抗氧化剂。 v v测定方法：测定方法： 高锰酸钾直接滴定法高锰酸钾直接滴定法 酒石酸铁比色法酒石酸铁比色法酒

3、石酸铁比色法酒石酸铁比色法原理：原理： 酒石酸亚铁能与茶多酚生成蓝紫色络合物，络合物溶酒石酸亚铁能与茶多酚生成蓝紫色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。色方法测定。v 仪器：分光光度计仪器：分光光度计 水浴锅，锥形瓶，容量瓶（水浴锅，锥形瓶，容量瓶（100mL,25ml)100mL,25ml)v 试剂：试剂：（1 1）酒石酸亚铁溶液：称取）酒石酸亚铁溶液：称取 FeSOFeSO4 47H2 2O 1.000gO 1.000g，含含 4 4个结晶水的个结晶水的酒石酸钾钠酒石酸钾钠5.0005.000g g，加蒸馏

4、水溶解后，用蒸馏水稀释至加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至10001000mLmL（2 2）PH7.5PH7.5的磷酸缓冲液的磷酸缓冲液q 茶多酚检验茶多酚检验 步骤：步骤： （l l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品3g3g于于500mL500mL烧烧杯中，加入沸水杯中，加入沸水350mL350mL，在沸水浴中浸提在沸水浴中浸提45min45min，每隔每隔10min10min摇动摇动1 1次，次，趁热抽滤趁热抽滤，残渣用少量热蒸馏水洗涤，残渣用少量热蒸馏水洗涤2-32-3次，滤液倒入次，滤液倒入500mL500mL容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水定

5、容至刻度，摇匀，备容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。用。 （2 2）测定：吸取样品溶液）测定：吸取样品溶液1mL1mL于于2525mLmL容量瓶中，加蒸馏水容量瓶中，加蒸馏水4 4mLmL，加酒石酸亚铁溶液加酒石酸亚铁溶液5 5mLmL，摇匀，再加入摇匀，再加入PH7.5PH7.5磷酸缓冲液磷酸缓冲液稀释至稀释至刻度。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。刻度。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。 (3)(3)选择选择540540nmnm波长和波长和1 1cmcm的比色杯测定吸光度的比色杯测定吸光度v计算：计算： 式中：式中： 茶多酚的含量，茶多酚的含量，% A

6、A样品溶液的吸光度值样品溶液的吸光度值 T T样品溶液的总体积，样品溶液的总体积，mLmL V V测定用样品溶液的量，测定用样品溶液的量，mLmL m m样品质量，样品质量，g g 7.826 7.826用用0.5cm0.5cm比色杯，当吸光度为比色杯，当吸光度为1.01.0时，试液中茶多酚的浓度为时，试液中茶多酚的浓度为7.826mg/mL7.826mg/mL 3.913用用1cm比色杯，当吸光度为比色杯，当吸光度为1.0时，试液中茶多酚的浓度为时，试液中茶多酚的浓度为3.913mg/mL3.913100%1000ATVmv 说明及注意事项：说明及注意事项： 1 1、磷酸盐缓冲液在常温下容易

7、生长霉菌，放冰箱中保存或临用、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。时现配。 2 2、样品溶液制备中的注意事项：、样品溶液制备中的注意事项： （1 1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定。取样测定。 （2 2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液匀的样液2525mLmL于于5050mLmL容量瓶中，加容量瓶中，加95%95%的乙醇的乙醇1515mLmL充分混匀，充分混匀，放置放置1515minmin，用水定容至刻度，过滤。用

8、水定容至刻度，过滤。 （3 3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100100mLmL于于250250mLmL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热微沸状态下加热1010minmin，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇匀，备用。来的质量，摇匀，备用。紫外紫外-可见分光光度计的基本结构可见分光光度计的基本结构 v 紫外紫外-可见分光光度计的基本结构是由五个部分组成：即可见分光光度计的基本结构是由五个部分组成：即光源、单色器、吸收

9、池（样品室）、检测器和信号指示系光源、单色器、吸收池（样品室）、检测器和信号指示系统。统。茶叶中游离氨基酸总量的测定茶叶中游离氨基酸总量的测定v 茶叶水浸出物中具有-氨基的有机酸且呈游离状态存在者，均称为茶叶游离氨基酸。v 原理：v 氨基酸在PH 8.0时与茚三酮共热，产生紫色络合物，在570nm处测定其含量。实验步骤实验步骤v （l l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品3g3g于于500mL500mL烧杯中，加入沸水烧杯中，加入沸水350mL350mL，在沸水浴中浸提在沸水浴中浸提45min45min，每隔每隔10min10min摇动摇动1 1

10、次，次，趁热抽滤趁热抽滤，残渣用少量热蒸馏水洗涤，残渣用少量热蒸馏水洗涤2-32-3次，滤液倒入次，滤液倒入500mL500mL容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。定容至刻度，摇匀，备用。v（2）氨基酸标准曲线的绘制v分别准确吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL 100mg/L氨基酸标准溶液于25mL容量瓶中，各加蒸馏水4mL，茚三酮溶液0.5ml和PH8.0缓冲溶液2ml，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至25ml。放置10min，于570nm处，以空白试剂做参比溶液，测吸光度。 以氨基酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。v 样品测定v 准确吸取试液1ml于25ml容量瓶中，加入0.5ml PH8.0缓冲溶液和0.5ml茚三酮溶液，在沸水浴中加热15min，冷却后定容至25ml。放置10min后，于570nm处，