动物病毒学负链RNA病毒学习教案

1、会计学1动物动物(dngw)病毒学负链病毒学负链RNA病毒病毒第一页，共77页。12.1 12.1 正粘病毒科正粘病毒科(Orthomyxoviridae)(Orthomyxoviridae)甲型流感病毒甲型流感病毒(bngd)(bngd)属属(Influenzavirus A)(Influenzavirus A)乙型流感病毒乙型流感病毒(bngd)(bngd)属属(Influenzavirus B)(Influenzavirus B)丙型流感病毒丙型流感病毒(bngd)(bngd)属属(Influenzavirus C)(Influenzavirus C)托高土病毒托高土病毒(bngd)(b

2、ngd)属（属（ThogotovirusThogotovirus）第1页/共76页第二页，共77页。1. 1. 病毒形态病毒形态(xngti)(xngti)：圆形或多形（：圆形或多形（丝状丝状),),有囊膜，病毒粒子有囊膜，病毒粒子8080120nm120nm。 （一）正粘病毒科的共同(gngtng)特性第2页/共76页第三页，共77页。RNARNA多聚酶多聚酶2. 2. 核酸核酸(h sun)(h sun)： -ssRNA, -ssRNA,单股单股, ,线状线状,6,68 8节段节段, ,全长全长甲型、乙型流感病毒甲型、乙型流感病毒(bngd)8(bngd)8节段节段丙型流感病毒丙型流感病毒

3、(bngd)7(bngd)7节段节段托高土病毒托高土病毒(bngd)6(bngd)6节段节段无无NANA第3页/共76页第四页，共77页。3. 3. 病毒的基本病毒的基本(jbn)(jbn)结构结构血凝素血凝素(HA(HA）神经神经(shnjng)(shnjng)氨酸氨酸(NA(NA） 基质蛋白基质蛋白(M1,M2(M1,M2型特异性；型特异性； M2 M2为离子通道蛋白为离子通道蛋白) )核蛋白核蛋白(NP(NP，型特异性），型特异性）RNARNA聚合酶聚合酶 ( PB1 ( PB1、PB2PB2、PAPA） 非结构蛋白非结构蛋白(NS1(NS1、NS2 or NEPNS2 or NEP）

4、编码编码(bin m)8(bin m)8种结构蛋白和种结构蛋白和2 2种非结构蛋白种非结构蛋白第4页/共76页第五页，共77页。囊膜：血凝素囊膜：血凝素(Hemagglutinin, HA) (Hemagglutinin, HA) 神经神经(shnjng)(shnjng)氨酸酶氨酸酶(Neuraminidase, (Neuraminidase, NA)NA)第5页/共76页第六页，共77页。Hemgglutinin - 16 types: H1-H16Neuraminidase 9 types: N1-N9第6页/共76页第七页，共77页。血凝素血凝素(Hemagglutinin,HA)(He

5、magglutinin,HA)Proteolytic activation Proteolytic activation cleavagecleavageHydrophobic Hydrophobic membrane domainmembrane domainHydrophobic Hydrophobic cytoplasmic domaincytoplasmic domainHA1HA2S-S使其具有血细胞凝集活性使其具有血细胞凝集活性是病毒的吸附蛋白是病毒的吸附蛋白病毒以膜融合方式进入细胞需要病毒以膜融合方式进入细胞需要HAHA的水解的水解诱生中和抗体和细胞免疫反应诱生中和抗体和细胞免疫

6、反应(fnyng)(fnyng)，决定病毒的，决定病毒的亚型亚型第7页/共76页第八页，共77页。Horimoto and Kawaoka 2005第8页/共76页第九页，共77页。HAHA基因基因(jyn)(jyn)中除裂解位点外，中除裂解位点外，9797，108108，126126，138138，217217位的氨基酸与毒力的关系也非常密切位的氨基酸与毒力的关系也非常密切第9页/共76页第十页，共77页。神经神经(shnjng)(shnjng)氨酸酶（氨酸酶（Neuraminidase,NANeuraminidase,NA） 识别细胞受体，水解其末端识别细胞受体，水解其末端N-N-乙酰基神

7、经氨酸，促进乙酰基神经氨酸，促进病毒进入靶细胞病毒进入靶细胞 病毒在细胞表面成熟病毒在细胞表面成熟(chngsh)(chngsh)时，时，NANA移去出芽点移去出芽点上的神经氨酸，利于病毒粒子成熟上的神经氨酸，利于病毒粒子成熟(chngsh)(chngsh)和释和释放。放。第10页/共76页第十一页，共77页。4. 4. 病毒病毒(bngd)(bngd)不断不断发生改变发生改变流感(li n)难以控制!第11页/共76页第十二页，共77页。流感疫苗（流感疫苗（2 2株株A A型流感病毒和型流感病毒和1 1株株B B型流感病毒）型流感病毒）免疫后，机体产生针对免疫后，机体产生针对3 3种毒株种毒

8、株的抗体的抗体在流感流行季节，若有流感病在流感流行季节，若有流感病毒感染机体，体内的抗体与毒感染机体，体内的抗体与HAHA抗原结合，阻止病毒吸附到细抗原结合，阻止病毒吸附到细胞胞(xbo)(xbo)上上相对相对DNADNA病毒而言，流感病毒的病毒而言，流感病毒的基因更易于发生突变基因更易于发生突变HAHA基因发生突变，导致编码的基因发生突变，导致编码的HAHA蛋白发生结构改变蛋白发生结构改变体内抗体不能与体内抗体不能与HAHA蛋白结合，蛋白结合，无法达到预防病毒感染目的无法达到预防病毒感染目的第12页/共76页第十三页，共77页。A-1:A-1:鸭鸭/ /其它水禽流感病其它水禽流感病毒感染鸡或

9、猪毒感染鸡或猪A-2:A-2:人人A A型流感病毒感染型流感病毒感染上述鸡或猪上述鸡或猪A-3:A-3:当上述两种病毒感染当上述两种病毒感染同一个细胞时，发生基同一个细胞时，发生基因重组因重组(zhn(zhn z) z)产生新的毒株产生新的毒株A-4:A-4:新的毒株可以通过中新的毒株可以通过中间宿主感染人间宿主感染人水禽的水禽的AIVAIV是其它物种流感病毒的来源是其它物种流感病毒的来源, ,是是AIVAIV的储存器的储存器猪是人流感病毒与猪是人流感病毒与AIVAIV发生重组发生重组(zhn(zhn z) z)的的“活试管活试管、混合器、混合器”lc第13页/共76页第十四页，共77页。5.

10、 5. 病毒的复制和抗病毒药物病毒的复制和抗病毒药物(yow)(yow)使用使用第14页/共76页第十五页，共77页。(扎那米韦和奥司他韦扎那米韦和奥司他韦/达菲达菲)第15页/共76页第十六页，共77页。（二）主要（二）主要(zhyo)(zhyo)流感病流感病毒毒 第16页/共76页第十七页，共77页。 属于属于(shy)(shy)正黏病毒科、正黏病毒科、A A型流感病型流感病毒属。毒属。 是禽类流感的病原体。是禽类流感的病原体。 第17页/共76页第十八页，共77页。，全球，全球493人感染人感染(gnrn)H5N1禽流感病毒禽流感病毒，292人死亡（人死亡（Cumulative Numb

11、er of Confirmed Human Cases of Avian Influenza A/(H5N1) Reported to WHO ）第18页/共76页第十九页，共77页。2.猪流感病毒(Swine influenza viruses，SIV) 能引起猪的高度能引起猪的高度(god)(god)传染性、急性呼吸道疾病传染性、急性呼吸道疾病 猪流感病毒大多是猪流感病毒大多是A AH1N1H1N1型，但其他亚型也会在猪中型，但其他亚型也会在猪中传播，如传播，如H1N2H1N2、H3N1H3N1、H3N2H3N2。 禽流感病毒和人流感病毒也会感染猪禽流感病毒和人流感病毒也会感染猪 猪会同时

12、感染不止一种类型的流感病毒，使得来自不同猪会同时感染不止一种类型的流感病毒，使得来自不同类型病毒的基因融合，产生类型病毒的基因融合，产生 “ “重组重组”流感病毒流感病毒 第19页/共76页第二十页，共77页。l 猪流感病毒又可以感染猪流感病毒又可以感染(gnrn)(gnrn)人人l 人感染人感染(gnrn)(gnrn)猪流感病毒的可能途径和猪流感病毒的可能途径和症状症状第20页/共76页第二十一页，共77页。3. 人流感病毒(human influenza viruses)2009 Novel H1N12009 Novel H1N1第21页/共76页第二十二页，共77页。H1N1H2N218

13、891889RussianRussianinfluenzainfluenzaH2N2H2N2H2N219571957AsianAsianinfluenzainfluenzaH2N2H2N2H3N219681968Hong KongHong KonginfluenzainfluenzaH3N2H3N2H3N819001900Old Hong Kong Old Hong Kong influenzainfluenzaH3N8H3N819181918SpanishSpanishinfluenzainfluenzaH1N1H1N1191519151925192519551955196519651975

14、19751985198519951995200520051895189519051905201020102015201520092009PandemicPandemicinfluenzainfluenzaH1N1H1N1Reproduced and adapted (2009) with permission of Dr Masato Tashiro, Director, Center for Influenza Virus Research, National Institute of Infectious Diseases (NIID), Japan. Animated slide: Pr

15、ess space barH1N1PandemicH1N1第22页/共76页第二十三页，共77页。以前(yqin)的几次大流感导致的死亡人数第23页/共76页第二十四页，共77页。l 20092009年年4 4月首例人感染新型月首例人感染新型H1N1H1N1流感病毒的报道流感病毒的报道l - -是一种之前从未在人和猪身上出现过是一种之前从未在人和猪身上出现过的的l 新型流感病毒新型流感病毒 l - -发病人群多为青壮年，而不是发病人群多为青壮年，而不是(b (b shi)shi)季节性流感的易感人群季节性流感的易感人群-老人和儿童老人和儿童 l 病毒传播非常快病毒传播非常快, ,造成全球大流行

16、造成全球大流行第24页/共76页第二十五页，共77页。PB2PB1PAHANPNAMPNSPB2PB1PAHANPNAMPNSPB2PB1PAHANPNAMPNSClassical swine, N. American lineageAvian, N. American lineageHuman seasonal H3N2Eurasian swine lineageEurasian swine H1N1N. American H1N1(swine/avian/human)Pandemic (H1N1) 2009, combining swine, avian and human viral c

17、omponents第25页/共76页第二十六页，共77页。，甲型，甲型H1N1H1N1波及全球波及全球214214个国家或地区，至少个国家或地区，至少导致导致(dozh)17798(dozh)17798人死亡，感染人数几乎无人死亡，感染人数几乎无法统计。中国内地感染人数至少万，死亡法统计。中国内地感染人数至少万，死亡714714人人。The pandemic virus is currently susceptible to The pandemic virus is currently susceptible to both of these drugs (known as neuramin

18、idase both of these drugs (known as neuraminidase inhibitors), but resistant to a second class of inhibitors), but resistant to a second class of antivirals (the M2 inhibitors). antivirals (the M2 inhibitors). 第26页/共76页第二十七页，共77页。( (三三) ) 流感病毒的防治流感病毒的防治(fngzh)(fngzh) 疫苗疫苗(ymio)(Vaccines)(ymio)(Vacci

19、nes)(2) (2) 药物药物 (Drugs) (Drugs)(3) (3) 干扰素（干扰素（Interferon /Interferon /）第27页/共76页第二十八页，共77页。12.2 副粘病毒科（Paramyxoviridae）一、科的特点一、科的特点 病毒粒子病毒粒子(lz)(lz)具有多具有多形性（球形和丝状两种形式）形性（球形和丝状两种形式），直径，直径150-300nm150-300nm。有囊膜与。有囊膜与纤突，衣壳呈螺旋对称。基因纤突，衣壳呈螺旋对称。基因组为单股正链的线状组为单股正链的线状RNARNA，不，不分节段，长约分节段，长约15-16kb15-16kb。病毒。病

20、毒宿主范围窄。宿主范围窄。ParamyxoviridaeParamyxoviridae副粘病毒副粘病毒72000X72000X第28页/共76页第二十九页，共77页。二、分类二、分类(fn (fn li)li)l副黏病毒(bngd)亚科l肺病毒(bngd)亚科呼吸道病毒属呼吸道病毒属：牛副流感病毒：牛副流感病毒3型、仙台病毒型、仙台病毒腮腺炎病毒属腮腺炎病毒属：犬副流感病毒：犬副流感病毒2型、猪腮腺炎病毒型、猪腮腺炎病毒禽腮腺炎病毒属禽腮腺炎病毒属：新城疫病毒：新城疫病毒麻疹病毒属麻疹病毒属：牛瘟病毒、犬瘟热病毒、麻疹病毒：牛瘟病毒、犬瘟热病毒、麻疹病毒亨尼病毒属亨尼病毒属：亨德拉病毒、尼帕病

21、毒：亨德拉病毒、尼帕病毒肺病毒属肺病毒属：牛呼吸道合胞病毒、人呼吸道合胞病毒：牛呼吸道合胞病毒、人呼吸道合胞病毒伴肺病毒属伴肺病毒属：火鸡鼻气管炎病毒：火鸡鼻气管炎病毒第29页/共76页第三十页，共77页。三、新城疫病毒三、新城疫病毒(bngd)(bngd)（Newcastle disease Newcastle disease virus, NDV)virus, NDV)新城疫：亚洲新城疫：亚洲(y zhu)鸡瘟、伪鸡瘟鸡瘟、伪鸡瘟禽流感：欧洲鸡瘟、真性鸡瘟禽流感：欧洲鸡瘟、真性鸡瘟19261926年首次年首次(shu c)(shu c)爆发于印度尼西亚的爪哇爆发于印度尼西亚的爪哇和英国的新

22、城，和英国的新城，19271927证实了该病由病毒引起，命证实了该病由病毒引起，命名为新城疫名为新城疫目前，广泛存在亚洲、非洲和美洲的国家目前，广泛存在亚洲、非洲和美洲的国家19281928年我国已有本病的记载，年我国已有本病的记载，19351935年在我国部分年在我国部分地区流行，地区流行，19461946年首次年首次(shu c)(shu c)分离到病毒分离到病毒第30页/共76页第三十一页，共77页。新城疫病毒新城疫病毒(bngd)(bngd)粒子粒子 新城疫病毒新城疫病毒(bngd)(bngd)（NDVNDV）属于属于RNARNA病毒病毒(bngd)(bngd)中的中的副粘病毒副粘病毒

23、(bngd)(bngd)科、腮腺科、腮腺炎病毒炎病毒(bngd)(bngd)属的禽副粘属的禽副粘病毒病毒(bngd)(bngd)，为单股负链，为单股负链病毒病毒(bngd)(bngd)。 有囊膜，呈多形型，一般呈近有囊膜，呈多形型，一般呈近似球形。似球形。直径直径(zhjng)100-500nm纤突纤突8-12nm1、病毒粒子第31页/共76页第三十二页，共77页。NPNP：核衣壳蛋白：核衣壳蛋白(dnbi)(dnbi)P P：磷蛋白：磷蛋白(dnbi)(dnbi)M M：基质蛋白：基质蛋白(dnbi)(dnbi)F F：融合蛋白，小的表面：融合蛋白，小的表面(biomin)(biomin)纤

24、突纤突HNHN：血凝素：血凝素- -神经氨酸酶神经氨酸酶L L：大分子蛋白：大分子蛋白基因基因(jyn)(jyn)组约组约15kb15kb长，共包括个基因长，共包括个基因(jyn)(jyn)，依次为：，依次为：3-NP-P-M-F-HN-L-53-NP-P-M-F-HN-L-52、NDV基因组结构组成第32页/共76页第三十三页，共77页。3 3、NDVNDV的理化的理化(lhu)(lhu)特性特性对多种理化因素的抵抗力相当强，能在环境中存活较长对多种理化因素的抵抗力相当强，能在环境中存活较长时间：时间：NDND爆发后爆发后2-82-8周，仍能从鸡舍、蛋壳、羽毛中分周，仍能从鸡舍、蛋壳、羽毛中

25、分离到病毒，但不同毒株间存在差异离到病毒，但不同毒株间存在差异(chy)(chy)。物理或化学因素的处理，如热、射线、各种化学药物均物理或化学因素的处理，如热、射线、各种化学药物均能破坏病毒的感染性能破坏病毒的感染性第33页/共76页第三十四页，共77页。 血凝活性：血凝活性： NDVNDV能凝素两栖类、爬行类和禽类的红细胞能凝素两栖类、爬行类和禽类的红细胞（所有毒株都能凝集（所有毒株都能凝集(nngj)(nngj)人、小鼠和人、小鼠和豚鼠的红细胞，但凝集豚鼠的红细胞，但凝集(nngj)(nngj)牛、山羊、牛、山羊、绵羊、猪和马红细胞的能力随毒株而异）。绵羊、猪和马红细胞的能力随毒株而异）。

26、 NDVNDV依靠其血凝素依靠其血凝素- -神经氨酸酶神经氨酸酶(HN) (HN) 结合于结合于红细胞表面的含唾液酸的受体，凝集红细胞表面的含唾液酸的受体，凝集(nngj)(nngj)成较大颗粒，这一特性能被特异成较大颗粒，这一特性能被特异性抗血清抑制，是鉴定病毒的有效方法性抗血清抑制，是鉴定病毒的有效方法4 4、NDVNDV的生物学活性的生物学活性第34页/共76页第三十五页，共77页。 神经氨酸酶活性：神经氨酸酶活性： NDVNDV的的HNHN蛋白具有神经氨酸酶功能，能水解蛋白具有神经氨酸酶功能，能水解唾液酸的糖苷键，使受体从红细胞表面脱唾液酸的糖苷键，使受体从红细胞表面脱离，从而使已经被

27、病毒凝集的红细胞发生离，从而使已经被病毒凝集的红细胞发生解凝集。解凝集。 细胞融合：细胞融合： NDVNDV复制复制(fzh)(fzh)时，病毒首先吸附于细时，病毒首先吸附于细胞受体，随后病毒囊膜与细胞膜发生融合。胞受体，随后病毒囊膜与细胞膜发生融合。NDVNDV感染还可导致感染还可导致2 2个或多个细胞之间的细个或多个细胞之间的细胞膜融合，形成合胞体胞膜融合，形成合胞体第35页/共76页第三十六页，共77页。5 5、NDVNDV的血清的血清(xuqng)(xuqng)分型分型所有的所有的NDVNDV属于同一种血清型，但不同毒株的毒力属于同一种血清型，但不同毒株的毒力差异很大。差异很大。单抗可

28、以检测单抗可以检测(jin c)(jin c)出病毒亚群间的差异出病毒亚群间的差异. .第36页/共76页第三十七页，共77页。 强毒型（强毒型（velogenicvelogenic）（嗜内脏）（嗜内脏(nizng)(nizng)型）型） 中毒型（中毒型（mesogenicmesogenic） 弱毒型（弱毒型（lentogeniclentogenic）6 6、NDVNDV的毒力的毒力第37页/共76页第三十八页，共77页。衡量衡量(hng ling)毒株毒力的指数毒株毒力的指数p 经典方法经典方法(fngf)(fngf)：p 1 1日龄鸡的脑内接种致病指数（日龄鸡的脑内接种致病指数（ Intr

29、acerebral Intracerebral Pathogenicity IndexPathogenicity Index， ICPI ICPI）p 6 6周龄鸡静脉致病指数（周龄鸡静脉致病指数（Intravenous Intravenous Pathogenicity Index Pathogenicity Index ，IVPIIVPI）p 鸡胚平均致死时间（鸡胚平均致死时间（ Mean Death Time Mean Death Time ，MDTMDT）第38页/共76页第三十九页，共77页。衡量衡量(hng ling)毒株毒力的新方法毒株毒力的新方法p 分子基础：分子基础：p ND

30、VNDV的的F F蛋白先是蛋白先是(xin.shi)(xin.shi)以无活性的前体以无活性的前体F0F0的的形式存在形式存在, ,当它被宿主细胞蛋白酶裂解成当它被宿主细胞蛋白酶裂解成F1F1、F2F2两两个亚单位时个亚单位时, ,病毒才具有感染活性。病毒才具有感染活性。p 裂解后的活性蛋白一旦到达质膜表面即可介导感染裂解后的活性蛋白一旦到达质膜表面即可介导感染细胞与邻近的细胞融合细胞与邻近的细胞融合, ,并导致病毒新的感染。并导致病毒新的感染。第39页/共76页第四十页，共77页。第40页/共76页第四十一页，共77页。 强毒强毒F1F1的的N N端为苯丙氨酸（端为苯丙氨酸（F),F),弱毒

31、为亮氨酸（弱毒为亮氨酸（L)L) 强毒强毒F2F2的的C C端存在由谷氨酰胺（端存在由谷氨酰胺（Q)Q)隔开的两对碱性氨基酸隔开的两对碱性氨基酸；而弱毒的两对碱性氨基酸部分被甘氨酸替换；而弱毒的两对碱性氨基酸部分被甘氨酸替换 基于上述原理，可以建立区分基于上述原理，可以建立区分NDVNDV强弱毒的强弱毒的RT-PCRRT-PCR方法，方法，这也是目前实验室鉴别诊断这也是目前实验室鉴别诊断(zhndun)(zhndun)的首选方法的首选方法F2第41页/共76页第四十二页，共77页。两个标准：两个标准：1 1、脑内接种致病指数（、脑内接种致病指数（2 2、F1F1蛋白的蛋白的N N端（端（117

32、117位位aa)aa)为苯丙氨酸为苯丙氨酸F F，F2F2蛋白蛋白C C端有多个碱性端有多个碱性(jin (jin xnxn)aa)aa（113-116113-116位位aaaa至少有至少有3 3个精个精氨酸或赖氨酸）氨酸或赖氨酸）第42页/共76页第四十三页，共77页。7、致病机理(j l)第43页/共76页第四十四页，共77页。8、临床(ln chun)症状与病理变化 嗜内脏速发型（嗜内脏速发型（ Viscerotropic Velogenic Newcastle Viscerotropic Velogenic Newcastle Disease Disease ， VVND VVND ）

33、各日龄的鸡均易感，急性、致各日龄的鸡均易感，急性、致死性感染，常见消化道出血死性感染，常见消化道出血 嗜神经嗜神经(shnjng)(shnjng)速发型速发型(Neurotropic Velogenic (Neurotropic Velogenic Newcastle Disease Newcastle Disease ，NVNDNVND）各日龄鸡均易感，急各日龄鸡均易感，急性、致死性感染，表现呼吸道和神经性、致死性感染，表现呼吸道和神经(shnjng)(shnjng)症状症状第44页/共76页第四十五页，共77页。第45页/共76页第四十六页，共77页。第46页/共76页第四十七页，共77页

34、。鸡新城疫呼吸鸡新城疫呼吸(hx)加快加快第47页/共76页第四十八页，共77页。嗜内脏嗜内脏(nizng)速发型（速发型（VVND）第48页/共76页第四十九页，共77页。腺胃前部腺胃前部-食道食道(shdo)移行部移行部腺胃后部腺胃后部(hu b)-肌胃移肌胃移行部行部第49页/共76页第五十页，共77页。盲肠盲肠(mng chng)扁桃体出血扁桃体出血十二指肠十二指肠(sh rzhchng)出血性溃疡出血性溃疡第50页/共76页第五十一页，共77页。小肠小肠(xiochng)出血出血第51页/共76页第五十二页，共77页。泄殖腔粘膜泄殖腔粘膜(zhn m)出血出血第52页/共76页第五十

35、三页，共77页。第53页/共76页第五十四页，共77页。嗜神经速发型（嗜神经速发型（NVNDNVND）主要报道于美国；主要报道于美国；突然发生严重突然发生严重(ynzhng)(ynzhng)的呼吸道症状，的呼吸道症状，1-21-2天后出天后出现神经症状；现神经症状；产蛋急剧下降，不出现下痢；产蛋急剧下降，不出现下痢；发病率可到发病率可到100%100%；成年鸡死亡；成年鸡死亡50%50%，小鸡达，小鸡达90%90%。第54页/共76页第五十五页，共77页。第55页/共76页第五十六页，共77页。气管气管(qgun)、喉头粘膜充血和、喉头粘膜充血和出血出血第56页/共76页第五十七页，共77页。

36、中发型中发型引起呼吸道症状引起呼吸道症状成年鸡产蛋下降，可成年鸡产蛋下降，可持续持续(chx)几周几周也可能出现神经症状也可能出现神经症状死亡率较低死亡率较低缓发型缓发型成年鸡不发病成年鸡不发病易感幼鸡可出现易感幼鸡可出现(chxin)呼吸道症状呼吸道症状并发和继发其它微生并发和继发其它微生物可引起死亡物可引起死亡中发型(f xn)产畸形蛋第57页/共76页第五十八页，共77页。 病原检测病原检测 抗体抗体(kngt)检检测测 分子诊断分子诊断 鉴别诊断鉴别诊断第58页/共76页第五十九页，共77页。样品样品(yngpn)采集采集培养系统培养系统分离方法分离方法病毒鉴定病毒鉴定传代细胞传代细胞

37、原代细胞原代细胞鸡胚鸡胚粪便、肠内容物粪便、肠内容物泄殖腔、气管拭子泄殖腔、气管拭子病变组织病变组织接胚接胚离心取上清离心取上清匀浆或悬浮匀浆或悬浮生化、生物学特征生化、生物学特征致病性试验致病性试验血凝试验血凝试验单抗分群单抗分群第59页/共76页第六十页，共77页。第60页/共76页第六十一页，共77页。第61页/共76页第六十二页，共77页。1010、疫苗、疫苗(ymio)(ymio)* *气雾免疫时可能会引起严重气雾免疫时可能会引起严重(ynzhng)(ynzhng)的反的反应应第62页/共76页第六十三页，共77页。灭活苗灭活苗感染胚尿囊液用福尔马林杀死病毒感染胚尿囊液用福尔马林杀死

38、病毒(bngd)，与佐剂混合。与佐剂混合。可以选用强毒株作为疫苗株。可以选用强毒株作为疫苗株。可以制成二联或多联苗。可以制成二联或多联苗。肌注。肌注。第63页/共76页第六十四页，共77页。RhabdoviridaeRhabdoviridae弹状病毒弹状病毒216000X216000X病毒粒子呈子弹状，大小约病毒粒子呈子弹状，大小约18018075nm75nm，有囊膜。基因组为单一分子的负链单股有囊膜。基因组为单一分子的负链单股RNARNA，长约，长约13-16kb13-16kb。在感染细胞胞浆中。在感染细胞胞浆中形成形成(xngchng)(xngchng)特异性的包涵体，称特异性的包涵体，称

39、为内基氏小体（为内基氏小体（Negri bodiesNegri bodies）。病毒）。病毒宿主范围广。宿主范围广。一、科的特征一、科的特征(tzhng)第64页/共76页第六十五页，共77页。二、主要(zhyo)成员第65页/共76页第六十六页，共77页。 狂犬病毒属弹状病毒科。狂犬病毒属弹状病毒科。 病毒粒子呈清楚的子弹病毒粒子呈清楚的子弹(zdn)(zdn)形一端钝圆，一端平形一端钝圆，一端平凹，长凹，长180nm180nm，宽，宽75nm75nm，由囊膜和核芯两部分组成。，由囊膜和核芯两部分组成。三、狂犬病毒（三、狂犬病毒（Rabies virusRabies virus）1.病毒(b

40、ngd)粒子第66页/共76页第六十七页，共77页。G G（糖蛋白（糖蛋白(dnbi)(dnbi)）M2M2（基质蛋白（基质蛋白(dnbi)(dnbi)）N N（核蛋白（核蛋白(dnbi)(dnbi)）M M（磷酸化蛋白（磷酸化蛋白(dnbi)(dnbi)）L L（RNARNA多聚酶）多聚酶）基因组为不分节段单股负链基因组为不分节段单股负链RNARNA，编码，编码5 5种结构种结构(jigu)(jigu)蛋白蛋白。其中糖蛋白镶嵌于囊膜表面，能诱中和抗体并具有其中糖蛋白镶嵌于囊膜表面，能诱中和抗体并具有(jyu)(jyu)血凝特性。血凝特性。2.病毒基因组第67页/共76页第六十八页，共77页。

41、有有5 5个血清型个血清型I I型：狂犬病毒型：狂犬病毒(bngd)(bngd)原型株。原型株。IIII型：型：LagosLagos蝙蝠病毒蝙蝠病毒(bngd)(bngd)原型株。原型株。IIIIII型：型：MokolaMokola病毒病毒(bngd)(bngd)原型株。原型株。型：型：DuvenhageDuvenhage病毒病毒(bngd)(bngd)原型株。原型株。型：株。型：株。不同血清型抗原性不同，其交叉保护力不同，不同血清型抗原性不同，其交叉保护力不同，如如I I型与型与IIIIII型之间完全无保护性。型之间完全无保护性。3.血清型第68页/共76页第六十九页，共77页。3.毒株固定

42、毒固定毒(fixed virus)(fixed virus)：街毒连续在动物脑内：街毒连续在动物脑内传代传代(chun di)(chun di)，毒力下降，毒力下降，潜伏期缩短，潜伏期缩短，对原宿主失去致病性，对原宿主失去致病性，但保持其免疫原性。但保持其免疫原性。街毒街毒(Street virus)(Street virus)：从自然病例分离：从自然病例分离(fnl)(fnl)到的狂犬病流行毒株到的狂犬病流行毒株 。第69页/共76页第七十页，共77页。5 5、流行病学、流行病学(li xn(li xn bn bn xu) xu) 人、畜、禽、野生动物都对本病易感。人、畜、禽、野生动物都对本病易感。 自然界中，易感动物是犬科和猫科动物以及自然界中，易感动物是犬科和猫科动物以及(yj)(yj)翼手类（蝙