中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理

1、中国药科大学药物代谢动力学实验考查知 识点整理药物代谢动力学实验考查知识点整理第一部分：HPLC使用注意事项1、HPLC组成：泵、进样器、色谱柱、检测器、数据系统/积分仪2、反相色谱：分离机理：“反相色谱”固定相极性小于流动相极性常用流动相：乙睛、甲醇，水 3、色谱柱的分类：按填料：球形、无定形 按含碳量：C18、C8按应用：分析柱、制备柱、预处理柱 按粒径：150mm*,5以m等按填料类型：正相柱、反相柱、手性柱 4、键合相色谱柱的优缺点：优点：稳定不易流失；应用广泛，可使用多种溶剂；消除硅羟基的不良影响；缺点：pH得在38范围内5、C18柱的活化：90% 10% 90%勺甲醇溶液1ml/m

2、in依次冲洗30min 6、流动相：使用之前需超声脱气目的：色谱泵输液准确提高检测性能保护色谱柱流动相脱气的方法：加热，抽真空，超声，通惰性气体流动相组成：流动相配置：缓冲溶液现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生变化和成分分解，影响色谱分离的效果；有机溶液和缓冲液使用前均需经以m微孔滤膜过滤；流动相使用前脱气。7、常用定量方法：外标法内标法内标物的要求：化学结构与待测品相似；样品中不存在；不与样品组分发生化学反应；保留值与待测值接近；浓度相当；与其他色谱峰分离好8、样品的预处理：目的：除杂质；浓缩微量成分；改善分离；保护色谱柱； 提高检测灵敏度方法：高速离心，过滤，选择性沉淀，衍生反应；

3、液固萃取、液液萃取沉淀蛋白的溶剂：有机溶剂：乙睛、甲醇 强酸：三氯乙酸、过氯酸盐：50麻酸镂、10%TCA分析测定用试剂为色谱纯及以上， 水为超纯水第二部分：实验设计1、考虑问题：动物种属、给药剂量、取血时间、采样量、血药浓度大概范围2、分析方法建立：色谱柱、流动相组成、柱温箱温度、 样品处理方法、风量下限与标曲范围第三部分：实验相关条件与数据处理实验一：1、采血点设计一般原则为获得给药后的一个完整的血药浓度-时间曲线，采样时间点的设计应兼顾药物的吸收相、平衡相和消除相。一般在吸 收相至少需要23个采样点，对于吸收快的血管外给药的药 物，应尽量避免第一个点是峰浓度；在Cmax附近至少需要3 个

4、采样点；消除相需要 46个采样点。整个采样时间至少应 持续到35个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的 1/101/20 o为保证最佳采样点，建议在正式试验前，选择 23只动物进行预试验，然后根据预试验的结果，审核并修正原设计的 采样点。2、动物给药方式：股静脉注射 3、麻醉：腹腔注射20% 乌拉坦4、采血方式：眼眶静脉丛采血5、蛋白沉淀方式：10喻氯酸，涡旋，15000rpm 10min, 取100ul上清二次离心6、非那西丁色谱条件流动相：50mM磷酸盐缓冲液中，并稀释到 1L）:乙睛色谱柱：岛津 Shimadzu VP-ODS; 150 X; 5 以 m 检测波长：254nm 柱温：40

5、 c进样体积：20以L6、参数计算曲线线性判断为一房室模型，参数计算如下：参数 C0 T1/2 k Vd CL MRT AUC 公式 y = 令 x=0 得 y= 令 丫=得 T1/2=/k 得 Vd=X（给药量）/C0 X=*2mg/ml=CL=k*Vd MRT=1/k AUC=X/CL 值 以 l/ml 480 以参数 k AUC非房室 值 以-k/=- AUC0100min= AUC100s =Cl00min/k= AUC0100min+ AUC100=+AUMC0100min=9030AUMC100=t100minC100min/k+C100min/k2= AUMC=AUMC0100m

6、in+AUMC100s MRT=AUMC/AUC MRT=1/k C0=Div/VSS=/Div/AUC=/ 以 AUMC MRT C0 T1/2 CL Vss 12171 以 g*min2/ml/40min “/ml 无 VSS=/AUC2=*/实验二：1、肝微粒体的制备方法 版本一：获取肝脏：大鼠禁食不禁水 24小时后取肝脏，组织匀 浆：称重剪成碎块后加入匀浆液制成匀浆。差速离心：匀浆液4c 9000g离心15min,弃去沉淀和脂 肪层取上清液于100000g离心管中离心20min,弃上清，沉淀用 pbs 轻轻冲洗。重悬沉淀：用10ml匀浆液重悬，冻存管分装后置 -80 C 冰箱内保存 蛋

7、白定量：BCA法 版本二：大鼠拉颈椎处死，开腹取肝脏，用滤纸吸干水分，称 质量。立即放入冰冷的蔗糖溶液中清洗，用剪刀剪成碎块，反复 清洗至无血色。加 4倍肝质量的蔗糖溶液，在冰浴中用组 织匀浆机制成匀浆，再超声分散30 s, 4 C 下10 000 r/min -离心20 min。上清液用四层纱布过滤除漂浮脂物，滤液在4C下50 000 r/min 离心60 min, 弃上清液，沉淀用焦磷 酸钾缓冲液悬浮均匀，在4 C 下50 000 r/min 离心60 min,沉淀即为肝微粒体。用 Tris HCl缓冲液悬浮均匀，体 积为原上清液的1/ 4即可，分装于塑料管中，于-80 C保 存，采用Lo

8、wry法测定肝微粒体蛋白浓度版本三：2、NADPF#系：葡萄糖-6- 磷酸(G- 6- P)葡萄糖 6 磷酸脱氢酶(G- 6- P- OH) B -NADP+ 氯化镁5Mm3、温孵实验步骤：肝微粒体，非那西丁溶液，37 C水溶预温孵5min,加入NADPH#系溶液，37c水浴温孵，30min,加入冰 甲醇，终止温孵，涡旋1min,高速离心10min,转移上清液 2006 4、数 据处理双倒数法1/V的截距为1/Vmax, 1/S的截距为-1/ Km药物代谢动力学实验考查知识点整理第一部分：HPLC使用注意事项1、HPLC组成：泵、进样器、色谱柱、检测器、数据系统/积分仪2、反相色谱：分离机理：

9、“反相色谱”固定相极性小于流动相极性常用流动相：乙睛、甲醇，水 3、色谱柱的分类：按填料：球形、无定形 按含碳量：C18、C8按应用：分析柱、制备柱、预处理柱 按粒径：150mm*,5以m等按填料类型：正相柱、反相柱、手性柱 4、键合相色 谱柱的优缺点：优点：稳定不易流失；应用广泛，可使用多种溶剂；消除硅羟基的不良影响；缺点：pH得在38范围内5、C18柱的活化：90% 10% 90%勺甲醇溶液1ml/min依次冲洗30min 6、流动相：使用之前需超声脱气目的：色谱泵输液准确提高检测性能保护色谱柱流动相脱气的方法：加热，抽真空，超声，通惰性气体流动相组成：流动相配置：缓冲溶液现用现配，不要储

10、存时间过长，避免 pH值发 生变化和成分分解，影响色谱分离的效果；有机溶液和缓冲液使用前均需经以m微孔滤膜过滤；流动相使用前脱气。7、常用定量方法：外标法内标法内标物的要求：化学结构与待测品相似；样品中不存在；不与样品组分发生化学反应；保留值与待测值接近；浓度相当；与其他色谱峰分离好8、样品的预处理：目的：除杂质；浓缩微量成分；改善分离；保护色谱柱； 提高检测灵敏度方法：高速离心，过滤，选择性沉淀，衍生反应；液固 萃取、液液萃取沉淀蛋白的溶剂：有机溶剂：乙睛、甲醇 强酸：三氯乙酸、过氯酸 盐：50麻酸镂、10%TCA分析测定用试剂为色谱纯及以上， 水为超纯水第二部分：实验设计1、考虑问题：动物

11、种属、给药剂量、取血时间、采样 量、血药浓度大概范围2、分析方法建立：色谱柱、流动相组成、柱温箱温度、 样品处理方法、风量下限与标曲范围第三部分：实验相关条件与数据处理实验一：1、采血点设计一般原则为获得给药后的一个完整的血药浓度-时间曲线，采样时间点的设计应兼顾药物的吸收相、平衡相和消除相。一般在吸 收相至少需要23个采样点，对于吸收快的血管外给药的药 物，应尽量避免第一个点是峰浓度；在Cmax附近至少需要3 个采样点；消除相需要 46个采样点。整个采样时间至少应 持续到35个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的 1/101/20 o为保证最佳采样点，建议在正式试验前，选择 23只动物进行预

12、试验，然后根据预试验的结果，审核并修正原设计的采样点。2、动物给药方式：股静脉注射 3、麻醉：腹腔注射20% 乌拉坦4、采血方式：眼眶静脉丛采血5、蛋白沉淀方式：10%U氯酸，涡旋，15000rpm 10min, 取100ul上清二次离心6、非那西丁色谱条件流动相：50mM磷酸盐缓冲液中，并稀释到1L）:乙睛色谱柱：岛津 Shimadzu VP-ODS; 150 X; 5 以 m 检测波长：254nm 柱温：40 C进样体积：20以L6、参数计算曲线线性判断为一房室模型，参数计算如下：参数 C0 T1/2 k Vd CL MRT AUC 公式 y = 令 x=0 得 y= 令 丫=得 T1/2

13、=/k 得 Vd=X（给药量）/C0 X=*2mg/ml=CL=k*Vd MRT=1/k AUC=X/CL 值 以 l/ml 480 以参数 k AUC非房室 值 以-k/=- AUC0100min= AUC100s =Cl00min/k= AUC0100min+ AUC100=+ AUMC0100min=9030AUMC100=t100minC100min/k+C100min/k2= AUMC=AUMC0100min+AUMC100sMRT=AUMC/AUC MRT=1/k C0=Div/VSS=/Div/AUC=/ 以 AUMC MRT C0 T1/2 CL Vss 12171 以 g*min2/ml/40min “/ml 无 VSS=/AUC2=*/实验二：1、肝