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文档简介

1、PCRPCR产物的回收纯化产物的回收纯化. .实验目的实验目的 学习和掌握从琼脂糖凝胶中纯化回收学习和掌握从琼脂糖凝胶中纯化回收DNADNA片段的有片段的有关技术。关技术。背景知识背景知识vDNADNA片段的纯化：主要目的是回收得到纯的目的片段的纯化：主要目的是回收得到纯的目的DNADNA片段，去片段，去除影响除影响DNADNA连接酶活性的物质以及其它的连接酶活性的物质以及其它的DNADNA片段。片段。v纯化纯化DNADNA片段的方法有多种，如：电洗脱法、从低熔点或普片段的方法有多种，如：电洗脱法、从低熔点或普通琼脂糖凝胶中回收、玻璃珠纯化、柱层析以及硅胶吸附等通琼脂糖凝胶中回收、玻璃珠纯化、

2、柱层析以及硅胶吸附等方法。目前一些生物公司推出了直接从方法。目前一些生物公司推出了直接从 PCRPCR产物中或琼脂糖产物中或琼脂糖凝胶中回收凝胶中回收DNADNA片段的试剂盒，有效地加快了片段的试剂盒，有效地加快了DNADNA的纯化的速的纯化的速度。度。实验材料实验材料vPCRPCR产物产物(1.15kb(1.15kb，带有，带有BamBamHIHI、XhoXhoI I酶切位点酶切位点) )v酚；氯仿；无水乙醇；酚；氯仿；无水乙醇；70%70%乙醇；灭菌双蒸水乙醇；灭菌双蒸水vTAETAE缓冲液缓冲液(1(1) )v上样液上样液(10(10) )实验仪器实验仪器v1、琼脂糖凝胶电泳系统v2、紫

3、外观察分析仪v3、离心机（Eppendoff）v4、单面刀片实验步骤实验步骤v1、制备1%琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。v2、在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。 此时应注意尽量切除不含目的此时应注意尽量切除不含目的DNADNA部分的凝胶，部分的凝胶，尽量减少凝胶体积，提高尽量减少凝胶体积，提高DNADNA回收率。回收率。 注：切胶时请注意不要将注：切胶时请注意不要将DNADNA长时间暴露于紫外长时间暴露于紫外灯下，以防止灯下，以防止DNADNA损伤损伤。v3、将切下的凝胶放入Eppendorf管中，移入100ulTE缓冲液，使其浸没于TE缓冲液中v4、捣碎凝胶 ,-80 ,10min 。v5、加入等体积（各200L )酚氯仿，盖紧，剧烈振摇。 10000rpm 4 离心5分钟。v6在一新1.5mL 离心管中加入 2.5倍体积预冷 无水乙醇、1/10体积3M的醋酸钠。将步骤5的上清小心加入本步骤离心管中。颠倒数次混匀。在 -80,静置30min，12000rpm 4 离心15分钟。v7弃上清，将离心管倒置于干净吸水纸巾上5分钟。室温下吹风

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