中医临床基础学《金匮要略》课程实验指导

1、中医临床基础学金匮要略课程实验指导一、目的和任务1.实验教学是现代教育的重要形式，有着理论教学不可替代的作用，是一种必不可缺的教学方式。特别是在现代高等医学教育中，更是有着举足轻重的作用。然而在现代的中医教育中，实验教学一直是薄弱环节，尤其在中医经典课程教学中，几乎属空白。随着中医药逐步走向世界，按过去方式培养的学生已不能适应社会的需要，现代的社会需要新一代开拓型的中医药专门人才，因此中医教育就必须改革。本实验教材正是为中医临床基础实验课作准备，将实验教学纳入中医临床基础学教学轨道，成为教学的重要组成部分。它既是对中医经典理论传统教学模式和方法的重大变革，也是提高学生素质，适应形势发展的必然；

2、它不仅可以丰富教学内容，克服古原文的枯燥，使深奥的理论客观化，而且可以激发学生学习兴趣，增强教学效果，提高教学质量，还可以启发和加深对中医临床基础学原文的理解，将中医经典著作的深奥涵义得以直观再现，验证方药的神奇效果，巩固学生对博大精深的祖国医学的感情。2.了解和掌握复制中医临床基础学中相关证候动物模型的基本方法和实验的基本技能，验证和巩固课堂讲授的理论知识，培养学生理论联系实际的能力，弥补经典课程条文抽象难懂的不足。3.学会观察、记录、分析实验结果及书写实验报告的基本方法，通过具体操作和对所得结果的分析综合，提高独立思考和独立工作的能力，为进行科学研究工作打下一定基础。4.了解获得资料一致性

3、和可靠性的一些基本原则，以培养严肃的科学态度、严谨的工作作风和严密的科学思维方法。二、基础知识和操作的基本技能（一）实验课的基础知识（1）仔细阅读实验指导，了解实验的目的、要求、方法和操作步骤。（2）预测实验中各个步骤可能出现的问题。（3）检查实验器材和药品是否齐全。（1）小组成员应有明确分工，但同时应注意协作，让每个人都能得到应有的技能训练。（2）严格遵守实验室规则，保持安静和良好的课堂秩序，尊重教师指导。（3）严格按照实验指导上的步骤进行操作，谨防菌液污染双手，衣物及实验室内的器物。（4）认真细致地观察实验过程中出现的现象，联系课堂讲授内容进行思考。同时要准确、及时、客观地记录，在没有获得

4、预期结果时，也应据实记录。（5）爱护实验器材，注意节约药品和试剂，尽量减少对动物的不必要损伤。（6）及时放置好实验器材，力求保持实验台面的整洁，做到有条不紊。（1）整理实验结果，经过分析思考写出实验报告，按时交给指导老师。（2）整理实验器材，按微生物实验规则进行处理。死动物及其他废物丢入指定场所。做好实验室的清洁卫生工作。4.实验报告内容和项目要求 (1)实验报告的项目要求：姓名 年级 班组 实验日期(年 月 日) 室温实验名称实验目的实验动物：种属 性别 体重 毛色实验方法和步骤：简要写出主要实验方法，如实验操作改动较大，应详细叙述。实验结果：根据实验目的将原始记录系统化、条理化。其表达方式

5、一般有三种：(1)叙述式：用文字将观察到的与实验目的有关的现象客观的加以描述。描述时需要有时间概念和顺序。(2)表格式：能较为清楚地反映观察内容，有利于相互对比。每一图表应说明一定的中心问题，应有表题和计量单位。(3)简图式：实验中描记的血压、呼吸等可用曲线图表示，也可取不同的时相点，用直线图表示。实验结果的分析和讨论应包括：以实验结果为论据，论证实验目的。实验结果提示了哪些新问题，如出现异常现象，应加以分析。结论实验结论是从实验结果中归纳出的一般概括性判断，应简短。实验报告内容力求简练，全部内容一般应控制在1000字以内。实验结果的分析和讨论应包括：以实验结果为论据，论证实验目的。实验结果提

6、示了哪些新问题，如出现异常现象，应加以分析。(2)注意事项 重视原始记录，原始记录应及时、完整、准确，每个实验都要注明实验目的、实验方法、实验条件、实验日期、实验者等情况，不得对原始数据随意进行修改。 观察和记录时应严谨、细致、实事求是，严格按照实验方法进行操作，并应预先设计好原始数据的记录格式。 分析和判断实验结果时，不能按照实验者的主观愿望去抽样比较，或者对原始数据任意取舍。切忌强求实验结果服从自己的假说，而应根据实验结果总结经验或根据实验结果去修正假说。5.动物实验的特点 所谓实验，就是在人为控制的条件下，向受试对象施加处理因素，并根据实验效应检验某种假说。以人为受试对象的医学实验即临床

7、试验，以其他动物作为受试对象的医学实验，即动物实验。与临床试验相比，动物实验具有一些独特的优点：（1）可以更严格地控制实验条件；（2）可以进行对机体有害或可能有害的处理因素的研究；（3）可以最大限度地获取反映实验效应的样本；（4）动物实验还具有一些特殊的优点，如传代比人快等；（5）实验动物的繁育在房舍、设备、饲料、管理等各方面都比较经济。（1）常用实验动物的种类与特点青蛙与蟾蜍是教学实验中常用的小动物，其心脏在离体情况下仍可有节奏地博动很久，可用于心功能不全的实验。蛙舌与肠系膜是观察炎症和微循环的良好标本。小白鼠其繁殖周期短，产仔多，生长快，饲料消耗少，温顺易捉，操作方便，又能复制出多种疾病模

8、型，是医学实验中用途最广泛和最常用的动物。 大白鼠亦属鼠科，性情不象小白鼠温顺，受惊时表现凶恶，易咬人。雄性大白鼠间常发生殴斗和咬伤。具有小白鼠的其他优点，在医学实验中用量仅次于小白鼠。 豚鼠性情温顺，胆小，不咬人也不抓人。豚鼠可分为短毛、长毛和刚毛种。短毛种豚鼠的毛色光亮而紧贴身，生长迅速，抵抗力强，可用于实验。其余两种对疾病非常敏感，不宜用于实验。家兔家兔的品种很多，在实验室中常用的有青紫蓝兔、中国本兔、新西兰白兔、大耳白兔等。家兔性情温顺、怯懦、惊疑、胆小，是常用的实验动物，可用于许多实验，如动脉硬化、青光眼、药物检验等。狗狗的嗅觉很灵敏，对外环境的适应力强，狗喜欢接近人，易于驯养，经过

9、训练能很好地配合实验，是最常用的大动物。但其价格较高，教学实验中少用。实验动物学成为一门学科，是近几十年才发展起来的。本世纪二十年代才开始培育近交系动物。因此，关于实验动物品系的分类命名，尚待统一明确。（1）按遗传学特征分类近交系：一般是指采用20代以上的全同胞兄弟姊妹或亲子进行交配，而培育出来的遗传基因纯化的品系。突变品系：在育种过程中，由于单个基因突变，或将某个基因导入，或通过多次回交“留种”，而建立一个同类突变品系。此类个体具有同样遗传缺陷或病变。如侏儒、肥胖症等。杂交一代：由两个近交系杂交产生的子一代称为杂交一代。它即有近交系的特点，又有杂交优势，因此具有生命力旺盛，繁殖率高，生长快，

10、体质健壮等优点。封闭群：在同一血缘品系内，不以近交方式，而进行 随机交配繁衍，经年以上育成的相对维持同一血缘关系的种群。 非纯系：即一般任意交配繁殖的杂种动物。 （2）按微生物学特征分类无菌动物：是指体表、体内任何部位都检不出微生物、寄生虫的实验动物。指定菌（已知菌）动物：是人工将一种或几种菌给予无菌动物使之带有已知的这种细菌。无特殊病原体动物（Specific pathogen free animal,SPF动物）这种动物带有已知的非病原微生物。以上三种动物统称为悉生动物。带菌动物：即在一般自然环境中饲养的普通动物，其体表体内带有多种微生物，甚至带有病原微生物。因价格低，故教 学实验中常用之

11、。 （3）实验动物的选择 根据不同的实验目的，选择使用相应的种属、品系和个体，是实验研究成败的关键之一。种属的选择：尽量选择其结构、功能和代谢特点接近于人类的。 动物品系的选择：个体的选择：.年龄：年幼动物一般较成年动物敏感。应根据实验目 的选用适龄动物。 .性别：一般实验研究中，在各组中宜选用雌雄各半。.生理状态：动物的特殊生理状态，如妊娠、授乳期机体的反应性有很大变化。在个体选择时，应予以考虑。 .健康情况：应选健康情况良好者。（4）实验动物的准备检疫；适应：一般说来在开始实验前，至少在实验室适应一周为宜。饲养：注意保持饲养室的温度、通风、光照等条件的适当与稳定。分组与标志；（二）实验操作

12、的基本技能1.捉持、固定方法（1）小鼠和大鼠捉持小鼠时，以右手提取鼠尾，放在粗糙物(如鼠笼)上面，轻向后拉其尾，左手拇指和食指按住其头部皮肤及双耳，固定在手掌中，使其腹部朝上，以同一手无名指和小指夹住鼠尾；也可用单手捉持，先用左拇措和食指抓住鼠尾，用小指、无名指和手掌压住鼠尾根部，再移动拇指、食指及中指抓住头部皮肤而固定在手拿中。大鼠攻击性强，捉持时先戴上手套，右手拉住尾巴放在鼠笼盖上，左手拇指和中指从背部绕到左右前肢腋下拿起大鼠，其余三指握住整个身体，用力应适当，否则使其窒息死亡。（2）家兔一手抓住颈背部皮肤，轻轻将兔捉起，另一手托其臂部呈坐位姿势(忌抓两耳或抓取腹部)，以防兔挣扎及损伤双耳

13、和两肾，也可置于固定箱内。（3）豚鼠豚鼠性温驯，捉拿时以拇指和中指从其背部绕到腋下，另一只手托起臂部即可，体重轻者可用一只手捉持。（4）狗和猫一人用长柄钳式捕狗夹挟住狗颈按倒，另一人拉出后肢或前肢，将注射部位毛剪去，作后肢外侧小隐静脉(该静脉血管从后肢外踝后侧走向外上侧)或前肢内侧皮下头静脉(该血管位于前肢脚爪上方背侧正前位)穿刺，用3戊巴比妥纳30mg/kg静脉麻醉。如实验需要清醒犬，则另一人将犬嘴绑住。绑嘴方法是先将绳带从嘴下面绕上来，在鼻子上打一结，再将绳带绕至嘴下打一结。然后拉到耳后颈部打结固定。猫的捉持方法同家兔。（5）青蛙和赡蜍通常以左手持握，用食指和中指夹住一侧前肢，大拇指压住另

14、一前肢，用右手将两后肢拉直，再用左手的无名指和小指将其压住固定。若需长时间固定，可捣毁其脑脊髓后，用大头钉钉住四肢和舌，固定在木制蛙板上。（1）经口给药方法有口服和灌胃两种方法。口服可将药物放入饲料或溶于饭水中令动物摄取。为保证剂量准确，可采用灌胃法。小白鼠左手捏住小白鼠颈背部皮肤，以同一手的无名指或小指将尾巴紧压在掌上，使腹部朝上，右手持灌胃管(12mL注射器连接玻璃灌胃管或注射针头磨钝制成灌胃管)。灌胃管长45cm，直径lmm。先从小白鼠口角插入口腔内，然后用灌胃管压其头部，使口腔与食道成一直线，再将灌胃管继续沿颚壁轻轻进入食道，当灌胃管继续轻轻进入时，稍感有抵抗，此位置(体重20g的小白

15、鼠，灌胃管插入12)相当于食道通过膈肌的部位。一般在此部位注射即可。如此时动物安静，呼吸无异常，可将药液注入。如遇有阻力应抽出灌胃管再试插入。如插入气管，则注药后动物立即死亡。注射后轻轻拉出灌胃管。一次投药量为0.10.3mL/10g体重。操作时不宜粗暴以防损伤食道及膈肌。大白鼠一只手的拇指和中指放到大白鼠的左右腋下，食指放入颈部，使大白鼠伸开两前肢，握住。两人做实验时，助手把其后肢和尾巴固定则可。灌胃方法与小白鼠相似，但采用安装在510mL注射器上的金属灌胃管（长68cmcm，尖端为球状的金属灌胃管）。为防止插入气管，可把注射器的内栓轻轻回抽一下，证实没有空气逆流后再注药。一次投药量为12m

16、L/100g体重。豚鼠.口服：给固体药物时，把豚鼠放在金属网上，以左手掌从背部握住豚鼠的头颈部而固定之，以拇指和食指压迫其口角部使口张开。用镊子夹住固体药物，放进豚鼠舌根部的凹处，使动物迅速闭口而咽下。当证实咽下后即放手。.灌胃：投入液体药物时，助手以左手从动物的背部把其后腿伸开，并把其腰部和后腿一起固定，以右手的拇指和食指夹住其前两腿固定之。术者右手所持的豚鼠用灌胃管沿动物上鄂滑行插入食道，进而插入胃内灌药。也可应用木制开口器，把导尿管通过开口器中央的孔插入胃内。上述两种方法皆须稍回抽一下注射器的内栓，证实注射器内无空气时，再慢慢注入药液。如注射器内有气泡，说明灌胃管或导尿管插在气管内，必须

17、拨出重插。最后注入生理盐水2mL，将管内残留的药液吸出，以保证投药剂量的准确。兔固体药物口服法与豚鼠基本相似。用液体药物灌胃需二人协作进行。其中一人坐好，将兔的躯体夹于两腿之间，左手紧握其双耳，固定其头部，右手抓住其前肢。另一人把开口器横放于免口中，将其舌头压在开口器下面，把开口器固定。将合适的胃管(例如导尿管)经开口器中央小孔慢慢沿其上颚壁插入食道约1518cm长。为避免误入其气管，可将胃管的外口端放入清水标中，若有气泡从胃管口逸出，则证明插在气管内，应拔出重新插入，若无气泡则用注射器将药液灌入。然后再注入少量清水，将胃管内药液冲入胃内；灌胃完毕后先拨出导尿管，然后再拿出开口器。（2）注射给

18、药方法.皮下注射小白鼠：通常在其背部皮下注射。将其皮肤拉起，注射针刺入皮下。把针头轻轻向左右摆动，容易摆则表明已刺入皮下，然后注射药物。拔针时，以手指捏住针刺部位，可防止药液外漏。熟练者可把小白鼠放在金属网上，一只手拉住其尾巴，小白鼠以其习性向前方移动，在此状态下，易将注射针刺入其背部皮下，注射药液。大批注射时，可采用此法。注射药量为0.10.3mL/10g体重。大白鼠：注射于其背部或大腿部的皮下。拉起注射部位的皮肤，将注射针刺入皮下。一次注射药量为lmL/100g体重以下。豚鼠：注射部位选用大腿内侧面或背部、肩部等皮下脂肪少的部位。通常在大腿内侧面注射。助手把豚鼠固定在台上，术者一边把注射侧

19、的后肢握住使之不动，一边充分捏住皮肤，以450角将注射针刺入皮下。确定针在皮下后进行注射。注射完毕后以指压刺入部位少许时间，并轻揉之。兔：用左手拇指与中指将兔的背部皮肤提起，使成一皱褶，并用食指按压皱褶的一端，使成三角体，增大皮下空隙，以利针刺。右手持注射器，自皱褶下刺入。证实针在皮下后，松开皱褶，将药液注入。.皮内注射先将注射部位剪毛，酒精消毒，然后以左手的拇指和食指把其皮肤按住在两指中间，注射器沿皮肤表浅层插入，注射药液。如果注射成功，则注药处应出现一白色小皮丘。大白鼠和豚鼠注射部位一般选用背部或腹壁部皮肤。.肌肉注射选择动物肌肉较发达部位注射，如狗、猫、兔可注入两侧臀部或股部肌肉。固定动

20、物勿使其活动，右手持注射器，使注射器与肌肉成600角，一次刺入肌肉中。为防止药物进入血管，在注射前应回抽针栓，如无回血则可注药。注射完毕后，用手轻轻按摩注射部位，帮助药液吸收。mL。鸽肌肉注射可注射于胸肌或腓肠肌。.静脉注射小白鼠和大白鼠：一般多用尾静脉，注射前先将小白鼠装入固定筒内或铁丝罩内或扣在重烧杯内，使其尾巴露出，尾部用45500g体重。豚鼠：一般前肢皮下静脉较后肢小隐静脉易注射。后肢小隐静脉在上部比较明显。但据经验在接近下部易于插入，该处静脉虽不明显，却比较固定，而上部虽较明显，但易动，不易刺入。也可先将皮肤切开一小口，使胫前静脉露出而后注射。注射量不超过2mL。有时也利用耳壳静脉或

21、雄豚鼠的阴茎静脉，偶而也用心脏穿刺法给药。兔：兔静脉注射一般采用耳缘静脉注射(耳外缘的血管为静脉，中央的血管为动脉)，先除去注射部位的毛，用酒精棉球涂擦耳部边缘静脉，以左手食指放在其耳下作垫，并以拇指压着耳边缘部分，右手持带有1820号针头的注射器，尽量从静脉末端刺入血管(不一定有回血)。一般是注射针先经皮下后进血管，并使注射针推入血管内少许。推动针栓，感到有阻力或发现静脉发白隆起，表示针不在皮下，这时应将针头稍退回一点，再往前端刺入。如无阻力和发白隆起现象，即可注药。注射完毕后，压住针眼，拔出针头，继续压迫数分钟以防流血。.腹腔注射小白鼠；左手握紧动物，将腹部朝上，右手将注射器的针头刺入皮肤

22、。其部位是距离下腹部腹白线稍向左或右的位置。针头达到皮下后，再向前进针35mm，接着使注射针与皮肤面呈450角刺入腹肌，针尖通过腹肌后抵抗力消失。在此处保持针尖不动的状态下，以一定速度轻轻注入药液。如注射针一下子刺入腹腔内深部或摇摆针头时，有可能刺伤内脏，可将动物头部放低，使脏器移向横膈处。小白鼠的一次注射量为0.10.2mL/10g体重。大白鼠腹腔注射部位与小白鼠相同，注射量为12mL/100g体重。豚鼠、猫、狗、兔等：豚鼠、猫腹腔注射部位同小白鼠。狗在脐后腹白线侧边12cm处注射。兔在下腹部近腹白线左右两侧约1cm处。（1）小鼠和大鼠尾尖取血将动物装在固定筒内，露出尾巴。将尾共剪掉12mm

23、(小鼠)或5cm(大鼠)，然后自尾根向尖端按摩，血自尾尖流出。亦可先将鼠尾泡于500C热水中，揩干后剪去尾尖，取血后用棉球压迫止血。此法可反复多次取血，小每次可取血0.1ml，大鼠0.30.5ml。眶动脉和眶静脉取血将动物头部按住并压迫眼球使突出充血后，以止血钳迅速钳取眼球后。眼眶内很快流出血液，将血滴入玻璃器皿内，达到所需采用量后用棉球压迫眼眶止血。此法所取血量较多，小鼠每次可采血0.20.3ml，大鼠每次可采血0.5lml，动物可存活。间隔数日后可自另一侧眼眶取血。眼眶后静脉丛取血用一长约7lOcm的玻璃毛细管(内径约1mm)，另端渐扩大呈喇叭形，将其尖端折断。折断端锋利，预先将玻璃管浸入

24、l肝素溶液，取出干燥。取血时左手抓住鼠两耳间头部皮肤，使头固定，并轻轻向下压迫颈部两侧，使眼球充分外突，眼眶后静脉丛充血。右手持毛细管，将其尖端插入眼睑与眼球之间并向眼底方向移动，稍加吸引，血液即流入玻璃管中。取血完毕拔出毛细管，左手放松出血即停止。股静脉(或股动脉)取血麻醉动物背位固定，切开左或右腹股沟的皮肤，作股静脉或股动脉分离手术。注射针穿刺股动脉或股静脉抽血，也可在颈静脉或颈动脉处穿刺取血。此法小鼠可采血0.20.8ml，大鼠约0.40.6ml。断头取血用剪刀剪掉鼠头，立即将鼠头向下，提起动物，将血滴入容器内。小鼠可采用081.2ml，大鼠5lOml。（2）豚鼠心脏取血豚鼠背位固定，左

25、手触摸心脏搏动最明显处。一般在胸骨左缘第46肋间隙，用注射针刺入心脏。血液即进入注射器内，取血宜迅速，以防血液凝固。本法取血量多，可达1520ml。背中足动脉取血助手固定动物，将其右或左后肢膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背面用酒精消毒，找出背中足静脉后以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手持注射针刺入静脉。采血后，迅速压迫止血。（3）家兔耳缘静脉取血 以小血管夹夹紧耳根部，并以二甲苯涂局部使血管扩张。涂后即以酒精拭挣，然后以粗大针头插入耳缘静脉取血，一次可采血5lOml。 耳中央动脉取血 将兔置于兔固定简内，在兔耳的中央有一条较粗，颜色较鲜红的中央动脉，涂二甲苯使局部血管扩张。用左手固定

26、兔耳，右手取注射器，在中央动脉的末端，沿着动脉平行地向心方向刺入动脉，即可见动脉血进入针筒，取血完毕后注意止血，一次可采血15ml。 股静脉取血注射器平行于血管，从股静脉下端向心方向刺入，徐徐抽动针栓即可取血，一次可来血约lOml。心脏取血先将家兔固定在解剖台上，采血者以左手拇指在动物胸骨剑突上二横指中线偏左侧处，触摸心脏的跳动，在触感到心脏跳动最明显处去毛，以碘酒、酒精消毒局部皮肤，左手其它四指按贴在动物胸壁右侧，右手持注射器，在心跳最明显处垂直刺入，再以左手拉针芯抽取血液。若抽不出血液，则表示针头不在心脏内，或已穿过心脏，这时将针头稍拔出少许再抽血。若仍抽不出血液，则将针头拔出到皮下，另行

27、穿刺。一般体重在2000g以上的家兔，一次可采血20ml左右。（4）狗和猫可从前肢皮下头静脉、后肢小隐静脉取血。四、编号标记方法药理实验使用小鼠和大鼠时，往往数量较多，在随机分组后需要编号与标记，良好的标记方法应符合标号清晰、耐久、简便及适用的要求。编号方法无统一规定，以下方法供参考。(1)皮毛标记编号常用35苦味酸溶液(黄色)，也可用2硝酸银溶液(咖啡色)或0.5中性晶红溶液(红色)涂擦在动物颈、背、腿部皮毛上，编号的原则一般先左后右，从上到下，左边编码个位数，右边编码十位数，动物编号为个位数之和和十位数之和组合而成，基本号数为左耳为1，左前肢为2，左后肢为3，左腹为6,十位数则为右耳为l0

28、，右前肢为2 0，右后肢为30，右腹为60，余下号码为基本号数相加，个位数为左边号码相加，十位数为右边号码相加。如7号为左耳与左腹相加，70号则为右耳与右腹相加，81则可分十位数8和个位数1，十位数8为右前肢与右腹相加，个位数1为左耳,编号时须涂擦右前肢、右腹及左耳。(2)鼠尾标记编号用苦味酸溶液涂擦在鼠尾部，此法标记号数较少，在次不作详述。.动物的处死 用注射器将空气经耳缘静脉急速注入，可使家兔致死，剂量一般在10-20ml。.解剖程序（1）解剖前，先肉眼观察家兔的外部变化； （2）将实验动物固定在铺有油纸的解剖台上，再放入一铺有消毒纱布的搪瓷盘内； （3）先以浸有3-5%来苏儿或石炭酸棉球

29、消毒皮毛； （4）以无菌有钩镊子提起耻骨部的皮肤，用无菌剪刀沿中线将皮肤剪开至颈部，勿伤及肌肉层。在将皮肤向两侧剥离开，使整个胸腹部暴露出来。仔细观察皮下组织及淋巴结有无病理变化； （5）将两侧肋骨沿锁骨中线剪断，以镊子夹住胸骨下缘，剪断膈肌的肋骨缘，提起切下的胸壁，小心与纵膈分开，将切下的胸壁向上掀，观察胸腔及心，肺有无渗出，粘连和炎证。 （6）将腹肌内层自横膈处沿中线向耻骨剪开，在切口的上下两端，再与中线切口垂直的方向将肌肉层两侧剪开，将腹壁肌肉连带腹膜翻向两侧，观察腹腔及腹腔内脏的变化。 （7）解剖完毕，将实验动物尸体，用垫在解剖台上的油纸包好，进行焚烧。所用器械，应煮沸消毒。实验台用5

30、%来苏儿消毒。记录所发现的一切异常变化。如需要，各取异常器官一块，固定后，备作病理组织学检查。脏器组织标本取材：先取心、肺，再取肝、脾、肾、肾上腺、胃肠等，脑组织一般最后取。组织标本应取有病理价值的部分，标本厚度约34mm，大小约1.52cm2左右，不宜过厚过大。组织标本固定法：标本取出后应立即固定在10% 福二马林液或中性福尔马林液中，固定液的体积应为组织标本的1020倍。三、实验设计的基本原则实验设计是关于实验研究的计划和方案的制订，是对实验研究所涉及的各项基本问题的合理安排，它包括实验动物的选择与分组、处理因素（外加于实验对象上并要观察其作用效应的因素）的设计，观测指标与实验方法的选择及

31、统计方法的确定等等。实验设计是否科学合理，高效严谨，直接关系到实验研究的成败。现就实验设计中几个基本问题分述如下： （一）选题选题是实验研究中的首要问题，它具有战略意义。只有研究课题选得准，立得牢，研究工作才有可能取得有意义的成果。一个好的实验研究立题应该具有：（1）充分的科学性，所立题目应有充分的科学依据，与已有的科学理论、科学规律及定律相符；（2）明确的目的性。即明确、具体地提出所要解决的问题。一个研究题目所包含的内容不宜过多，最好集中解决12个问题。题目切忌笼统模糊、包罗万象；（3）创造性和先进性。研究工作必须有创新。所谓创新就是发出新的规律或现象（包括补充或修改前人发现的规律和现象），

32、提出新的学说和见解（包括发展完善前人提出的学说或见解），设计、研制出国防首创的技术、方法、产品、工艺等。没有一点新意的课题毫无价值。（4）实现的可行性。立题时要充分考虑实验的主、客观条件，不可盲目求大求全。立题过程是科学的创造性思维过程。在立题过程中要搜集大量文献资料及实践资料并进行分析问题，了解前人及他人对本课题有关问题已作的工作，取得的成果及尚未解决的问题，了解目前的进展和动向。在对有关资料进行综合分析的基础上，找出所要探索的研究课题的关键所在，进而确定研究课题。（二）实验设计的基本原则立题完成后，即应在围绕立题进行实验设计，主要是对实验对象、处理因素和观测指标作出科学、合理的安排。实验设

33、计的科学性很强，有一些必须遵循的原则，现择其主要分述如下。对照即对比。在设立实验组同时，须相对应地设立作为比较参照的对照。对照的意义在于：鉴别处理因素与非处理因素之间的差异。处理因素效应的大小，重要的不是其本身，而是通过对比后得出的结论。要作到正确的鉴别，设立对照必不可缺。消除和减少实验误差。在医学实验中，自然环境和实验条件对实验结果有很大影响，同时实验动物的个体差异也使实验条件难以控制，设立对照有利于使实验组和对照组的非处理因素基本处于相同状态，可减少或消除实验误差。对照有多种形式，可根据实验研究的目的和内容加以选择：（1）空白对照：亦称正常对照，对照组不加任何处理因素。如观 察某降压药的作

34、用时，实验组动物服用降压药，对照组动物不服药 或服安慰剂。（2）自身对照，对照与实验同一受试动物上进行。例如，用药前后的对比，先用A药后用B药的对比，均为自身对照。（3）相互对照：又称组间对照。不专门设立对照组，而是几个实验组之间相互对照。例如用几种药物治疗同一疾病，对比这几种药物的效果，即为相互对照。（4）标准对照：不设立对照组，实验结果与标准值或正常值对比。在实验动物中，采用较多的是前三种对照方式。在医学实验中，一般不仅要求有对照，而且要遵循均衡原则（齐同等比）。所谓均衡，就是在相互比较的各组间（实验组与对照组间、实验组与实验组间），除了要研究的处理因素需要作有计划的安排外，其余因素，特别

35、是可能影响实验结果的因素尽量相同。在实验动物中，往往要求各组间动物的数量、种系、性别、年龄、体重、毛色等等尽量一致，实验仪器、药品、时间等其它方面也应一致，这样才能有效减少实验误差。随机是指分配于实验各组对象（样本）是由实验对象的总体中任意抽取的，即在将实验对象分配致各实验组或对照组时，它们的机会是均等的。如果在同一实验中存在数个处理因素（如先后观察数种药物的作用），则各处理因素施加顺序的机会也是均等的。通过随机化，一是尽量使抽取的样本能够代表总体，减少抽样误差；二是使各组样本的条件尽量一致，消除或减少组间人为的误差，从而使处理因素产生的效应更加客观，便于得出正确的实验结果。随机化的方法很多，

36、如抽签法、随机数字表法、随机化分组法等，具体可参阅医学统计学。重复是保证科研结果可靠性的重要措施。由于实验动物的个体差异等原因，一次实验结果往往不够确实可靠，需要多次重复实验方能获得可靠的结果。实验需要重复的次数（即实验样本的大小， 对于实验动物而言，指实验动物的数量）取决于实验动物的性质、内容及实验资料的离散度。一般而言，计量资料的样本数为1020例，计数资料则需30100例。（三）实验对象的选择在实验动物中，实验对象主要是动物。实验动物选择合适与否对实验成败及误差大小有很大关系。其选择要点是：动物种类要接近于人类而又经济的动物。根据实验要求进行品种和纯度的选择。一般以用纯种动物为好。动物的

37、健康、营养状况良好。动物的年龄、体重、性别等最好一致。在对性别要求不高的实验和雌雄动物混用，但分组时应雌雄搭配。与性别有关者，只能用某种性别的动物。（四）观察指标的选择指标是在实验观察中用来指示或反映研究对象中某些可被研究者或仪器感知的特征（如对药物的反应）或现象标志。医学实验指标，是反映实验对象所发生的生理现象或病理现象的标志。指标分为计数指标和计量指标，及主观指标和客观指标等。所选定的指标，应符合下列基本条件：指标应特地反映所观察事物的本质，即能特异地反映某一特定现象，不致与其它现象相混淆。如高血压尤其是舒张压可作为高血压病的特异指标。最好选用可用具体数值或图形表达的指标（如脑电图、心电图

38、、化验检查等）。因为主观指标（如肝脾触诊、目力比色等）易受主观因素的影响而造成较大误差。重复性高的指标一般表示无偏性或偏性小、误差小，能较真实的反映实际情况。不选用重现性小的指标。指标测量的技术方法或仪器灵敏度十分重要。该测出的变化测不出，就会得出“假阴性结果”，仪器不精密，所得阳性数值则不真实。尽量选用既灵敏客观，又切合本单位和研究技术和设备实际的指标。现成（定型）指标必须有文献依据，自己创立的指标必须经过专门鉴定。（五）观察与记录观察和记录在科学实验中占有十分重要的地位。为了正确的观察和记录，实验者在技术上应明确实验目的、要求，熟悉所使用技术或仪器设备；观察记录时要严谨、细致、实事求是，力

39、戒主观片面性。要重视原始记录。在实验设计中应预先规定或设计原始记录方式：文字、数字、表格、图型、照片或录像带等。原始记录要及时、完整、精确。切不可用事后整理的记录代替原记录。原始记录应写明：实验题目、实验方法、实验条件、实验者、实验日期并记录好观察测量的结果和数据。规定填写的项目一定要及时、完整、正确地填写；图形、图片一定要整理保存。（六）实验结果的处理、分析及判断研究工作不仅是取得数据或资料，而且要应用数理统计学的原理和方法对所获得的资料进行处理和分析。首先必须把原始资料或数据系统化，计算出各组数据的均值或百分数。如是计数指标，一般用百分数表示；若为计量指标，最好标明均数和标准差，进而标明均

40、数的标准误差。其次对各组数据进行统计学的显著性检验，具体方法参阅医学统计学。分析和判断实验结果时，不能按照研究者的偏见去抽样比较，或者对原始数据任意取舍。研者必须实事求是，不能强求实验结果服从自己的假说，而应根据实验结果去修正假说，使假说上升为结论或理论。四、金匮病理模型的建立方法（一）类风湿关节炎实验专项技术（SOP） 1性关节炎模型（AA）造模方法1.目的：制备类风湿关节炎动物模型；2 试剂：弗氏完全佐剂10ml ×1支；3.材料：1ml注射器；4.对象：纯种wistar大鼠；5.实验环境：温度150C250C，相对湿度60%80%，无菌；6.操作步骤：以弗氏完全佐剂1%结核菌素

41、于鼠根部皮内注射，注射时，皮内注射针头的孔朝上与皮肤平等刺入皮内（表皮与真皮之间），然后推液。当试剂注入皮内时，可见到皮肤表面马上会鼓起一小泡，形成白色，橘皮样皮丘，皮丘如不很快消失，则证明确实注入皮内。一周后仍以弗氏完全佐剂1%结核菌素于鼠根部皮内加强免疫注射，免疫后一般913天是炎症的高峰。7.实验结果及评价方法：肉眼观察足肿胀，按四肢肿胀程度计算肿胀指数，每条腿共4分，度肿胀1分、度肿胀2分、度肿胀3分、度肿胀4分，最高分16分，另采用T型试管计算足肿胀的容积；X线摄片检测各爪骨质破坏情况；踝关节及跖趾关节病理片检测。2诱导关节炎模型（CIA）的复制1.目的：制备类风湿关节炎动物模型；2

42、.试剂：牛型胶原10mg×1支(Bovine Type Collagen), 醋酸(Acetic acid),弗氏不完全佐剂10ml×1支(Freunds Adjuvant incomplete)；3.材料：1ml注射器；4.对象：纯种Lowis(或westar系)或DBA/IJ小鼠；5.实验环境：温度1525，相对湿度60%80%，无菌；6.操作步骤：用牛型胶原溶于醋酸中，按2mg/ml比例与弗氏不完全佐剂1:1充分混和乳化，实验0周和3周分别于小鼠尾根部注射/只/次)，距尾根部约1-2cm皮下（这一点很关键）注射，应可以看到出现一个白色的小皮丘。胶原免疫注射后4周后诱发

43、关节炎。充分发作的关节炎症，包括爪子红肿，在发病后35天可以观察到。发病后的炎症要持续34周，虽然炎症最终将消失，但关节损害将不会治愈而且关节僵硬会永久存在。7.实验结果及评价方法：肉眼观察足肿胀，按四肢肿胀程度计算肿胀指数，每条腿共4分，度肿胀分、度肿胀2分、度肿胀3分、度肿胀4分，最高分16分，另采用型试管计算足肿胀的容积；X线摄片检测各爪骨质破坏情况；ELISA方法测血清中抗II型胶原抗体滴度；踝关节及跖趾关节病理片检测。（二）肾气丸对小鼠免疫功能的影响1、目的：通过观察小鼠外周淋巴细胞转入率及抗体产生的情况，进一步探讨该药对机体免疫功能的影响。2、材料：动物：幼龄健康小白鼠，雌雄各半，

44、体重1920g。药物：金匮肾气丸，为传统中医配方；植物血凝素（PHA），以蒸馏水溶解，以生理盐水稀释成100；抗原：鸭沙门氏菌，通过转种、培养、甲醛处理，稀释成109/ml的死菌液；实验器械：灌胃器，注射器，剪刀，玻片，滴管，油镜等。3、实验方法：（1）正常小鼠体内外周血淋巴细胞转化率的测定将40只小鼠分为雌雄两批进行实验，每批随机分为服药组与对照组，每组各10只。全部小鼠注射PHA前，剪尾，取血，推血片，瑞氏染色，在油镜下计数100个淋巴细胞，计算出淋转率及平均值。然后，每只小鼠由大腿肌肉注射PHA100g/ml，注射后24、48、72h取血，如上法计算淋转率。结果填入表1。表1 服药前正常

45、小鼠注射PHA前后的淋转率（%）批号组别例数（只）注射PHA前注射PHA后24h48h72h第一批（雄）服药组对照组第二批（雌）服药组对照组平均值（2）肾气丸对小鼠淋巴转化率的影响g（按体重计算，相当于人用量的100倍），溶于1mlml。对照组以同法同量灌以蒸馏水。服药后10天，于注射PHA前和注射后48h，检测淋转率。结果填入表2。表2 服药后10天注射PHA前后的淋转率（%）批号组别例数（只）注射PHA前注射PHA后48hP值第一批（雌）服药组对照组第二批（雄）服药组对照组（3）肾气丸对小鼠血清抗体产生的影响ml，隔日1次，共3次，继续服药。于注射菌液后10天及21天，分别将小鼠断颈取血，

46、收集血清作凝集试验。将结果填入表3。表3 肾气丸对小鼠血清抗体产生的影响组别例数（只）注射菌液后天数血清凝集效价服药1组10对照1组10服药2组21对照2组21（三）肾气丸对大鼠附睾尾精子数及精子活动率的影响1、目的：金匮要略中肾气丸临床可用于治疗男性不育和性功能障碍等疾病。本实验通过模型动物证实，肾气丸对大鼠睾丸生精障碍具有明显恢复作用。2、材料：动物：Wistar系雄性大鼠，体重120140g。药物：按肾气丸组方比例称取药材，水煎至每毫升含生药2g，40C贮存备用。实验器械：水浴锅，电子天平，灌胃器，研磨器，剪刀，血细胞计数板，任氏液，支架等。3、实验方法：（1）将大鼠全部乙醚麻醉后，把四肢绑于立式支架上，使阴囊浸没于430C温水中20分钟，造成大鼠睾丸生精