高效液相色谱分析

1、2022-5-91Chapter 3High Performance Liquid High Performance Liquid ChromatographyChromatography2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering2X13.1 概述概述X13.2 HPLC仪器仪器 包括：包括： 高压输液装置高压输液装置; 进样系统进样系统; 分离系统分离系统; 检测系统检测系统;辅助系统辅助系统X13.3 流动相和固定相简介流动相和固定相简介X13.4 高效液相色谱方法各论高效液相色谱方法各论 分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱

2、、尺分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱寸排阻色谱和亲和色谱2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering313.1 概述概述X 高效液相色谱高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。是以溶剂液体为流动相的色谱方法。按照固定相不同可分为：液液分配色谱；吸附色谱按照固定相不同可分为：液液分配色谱；吸附色谱(液固色液固色谱谱)；离子交换色谱；尺寸排阻色谱；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱)。此外，。此外，还有亲和色谱、平板色谱还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱薄层色谱)等。等。X 早

3、期液相色谱，包括早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径的工作，都是在直径15cm, 长长50500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在的固定相颗粒直径多在150200 m范围内。即使这样，流速范围内。即使这样，流速仍然很低仍然很低(7时，该检测器不够时，该检测器不够灵敏。灵敏。X其它检测器还包括：其它检测器还包括：MS、IR、Evaporative light scattering detector(光散射光散射)、极谱等。、极谱等。2022-5-9College of Chemistry & Che

4、mical Engineering2413.3 HPLC流动相和固定相简介流动相和固定相简介X 一、流动相一、流动相 与与GC流动相不同，流动相不同，HPLC流动相为溶剂，它既有运载作用，流动相为溶剂，它既有运载作用，又和固定相一样，参予对组分的竞争，因此溶剂的选择对又和固定相一样，参予对组分的竞争，因此溶剂的选择对分离十分重要。分离十分重要。 理想的溶剂应有下列特性：理想的溶剂应有下列特性：Y1）对待测物具一定极性和选择性；）对待测物具一定极性和选择性；Y2）使用）使用UV检测器时，溶剂截止波长要小于测量波长检测器时，溶剂截止波长要小于测量波长(为什么？为什么？) ； 使用折光率检使用折光率

5、检 测器，溶剂的折光率要与待测物的折光率有较大测器，溶剂的折光率要与待测物的折光率有较大 差别；差别；Y3）高纯度。否则基线不稳或产生杂峰，同时可使截止波长增加；）高纯度。否则基线不稳或产生杂峰，同时可使截止波长增加；Y4）化学稳定性好；）化学稳定性好；Y5）适宜的粘度。粘度过高，柱压增加；过低，易产生气泡。）适宜的粘度。粘度过高，柱压增加；过低，易产生气泡。X 二、固定相载体二、固定相载体 由于各种由于各种HPLC分离方法的流动相均为液体，因此，分离方法的流动相均为液体，因此，HPLC通常是按照固定相载体或固定液的不同来分类的。通常是按照固定相载体或固定液的不同来分类的。2022-5-9Co

6、llege of Chemistry & Chemical Engineering25X 1. 按承受压力分按承受压力分Y刚性固体：刚性固体：SiO2为基质，耐压为为基质，耐压为7.01081.0109 Pa。可制成直径、形状和孔隙可制成直径、形状和孔隙 深度不同的颗粒；主要用于吸深度不同的颗粒；主要用于吸附、分配和键合色谱；附、分配和键合色谱；Y硬硬 胶：以聚合物为基质胶：以聚合物为基质(常用苯乙烯与二乙烯苯交联而常用苯乙烯与二乙烯苯交联而成成)，耐压上限为，耐压上限为3.5108 Pa, 主要用于离子交换和尺寸排主要用于离子交换和尺寸排阻色谱。阻色谱。X 2. 按孔隙深度分按孔隙深

7、度分Y表面多孔型：以实心玻璃珠为基体，在基体表面覆盖一表面多孔型：以实心玻璃珠为基体，在基体表面覆盖一层多孔活性材料层多孔活性材料(如硅胶、如硅胶、 氧化铝、离子交换剂、分子筛、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等聚酰胺等)。表面多孔型固定相的。表面多孔型固定相的 颗粒大颗粒大(易装柱易装柱)、多孔、多孔层厚度小且孔浅层厚度小且孔浅(渗透性好，出峰快渗透性好，出峰快)；但交换容量小。适；但交换容量小。适于常规分离分析。于常规分离分析。Y全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成，因颗粒全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成，因颗粒极细，因而孔径小、传质快、极细，因而孔径小、传质快、 柱效高。特

8、别适于复杂混柱效高。特别适于复杂混合物的分离。合物的分离。X 3. 按分离原理分：按分离原理分： 分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱和亲和分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等色谱等2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering2613.4 高效液相色谱方法各论高效液相色谱方法各论X 按分离原理可将按分离原理可将HPLC分为分配色谱、吸附色谱、分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。现离子交换色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。现在作分别介绍。在作分别介绍。X一、分配色谱一、分配

9、色谱Y1. 原理：原理： 根据各待测物在互不相溶的两溶液中的溶解度不同，根据各待测物在互不相溶的两溶液中的溶解度不同，因而具不同的分配系数。在色谱柱中，随着流动相的因而具不同的分配系数。在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同，从而实现分离的过程。移速率不同，从而实现分离的过程。Y2. 流动相流动相: HPLC分析中，为防止固定相的流失，流动相与固定液分析中，为防止固定相的流失，流动相与固定液应尽量不互溶，或者说二者的极性相差越大越好。因应尽量不互溶，或者说二者的极性相差越大越好。因此，根据流动相与固定相极性

10、的差别程度，可将液液此，根据流动相与固定相极性的差别程度，可将液液色谱分为色谱分为正相分配色谱正相分配色谱（流动相极性小于固定相极性，（流动相极性小于固定相极性，极性小的先流出，适于极性组分分离）和极性小的先流出，适于极性组分分离）和反相分配色反相分配色谱谱（流动相极性大于固定相极性，极性大的先流出，（流动相极性大于固定相极性，极性大的先流出，适于非极性组分分离）。适于非极性组分分离）。2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering27X 3. 固定相固定相 原则上，用于原则上，用于GC的固定相也可用于的固定相也可用于HPLC作固

11、定作固定相。但相。但HPLC固定液易流失，因此常用的只有机种，固定液易流失，因此常用的只有机种，按极性由高到低为：按极性由高到低为： , -氧二丙腈氧二丙腈(ODPN)、聚乙、聚乙二醇二醇(PEM)、三甲撑二醇、三甲撑二醇(TMG)、十八烷、十八烷(C18)、角、角鲨烷鲨烷(SQ)。 根据涂渍方法的不同，可将固定相分为机械涂渍根据涂渍方法的不同，可将固定相分为机械涂渍型和化学键合型，后者应用更为广泛。型和化学键合型，后者应用更为广泛。Y1）机械涂渍固定相）机械涂渍固定相：将固定液通过机械混合的方法涂将固定液通过机械混合的方法涂渍到表面多孔型渍到表面多孔型(0.5-1.5%涂布量涂布量)或全多孔

12、型载体或全多孔型载体(5-10%涂布量涂布量)上形成的液液色谱固定相。该种固定相最大上形成的液液色谱固定相。该种固定相最大的不足是固定液易流失、分离稳定性及重现性差，不适的不足是固定液易流失、分离稳定性及重现性差，不适合梯度淋洗。合梯度淋洗。 为减少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的为减少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的前置前置柱柱，该柱涂有与分析柱相同但有更高含量的固定液，使，该柱涂有与分析柱相同但有更高含量的固定液，使流动相进入分析柱之前，预先被固定液饱和。流动相进入分析柱之前，预先被固定液饱和。2022-5-9College of Chemistry & Chemical

13、Engineering28X 2）化学键合固定相）化学键合固定相 化学键合固定相是通过化学反应将有机分子键合在载体表面化学键合固定相是通过化学反应将有机分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、流失小、适于梯度淋洗等特所形成的柱填充剂，具有稳定、流失小、适于梯度淋洗等特点。这种固定相分离机理既不是简单的吸附，也不是单一的点。这种固定相分离机理既不是简单的吸附，也不是单一的液液分配，而是二者兼而有之。化学键合的表面覆盖度决定液液分配，而是二者兼而有之。化学键合的表面覆盖度决定哪种机理起主要作用。对多数键合相来说，以分配机理为主。哪种机理起主要作用。对多数键合相来说，以分配机理为主。X 通常，

14、化学键合相的载体主要是硅胶（表面有硅醇基）：通常，化学键合相的载体主要是硅胶（表面有硅醇基）：YSi-O-R：对热不稳定、遇水、乙醇等强极性会水解，使酯对热不稳定、遇水、乙醇等强极性会水解，使酯链断裂，因此只适于链断裂，因此只适于 以不含水或醇的流动相。以不含水或醇的流动相。YSi-R(或或Si-N)：不水解，热稳定性比硅酸脂好。但所用的不水解，热稳定性比硅酸脂好。但所用的格式反应不方便。使用水溶液作流动相时，其格式反应不方便。使用水溶液作流动相时，其pH应在应在4-8之间。之间。YSi-O-Si-R：不水解，热稳定性好，在不水解，热稳定性好，在pH2-8范围内对水稳范围内对水稳定。定。HCl

15、SiROSiSROHSiRSiClSiOHSiROSiOHROHSiSOClSOCl 33RMgClRLiiCl22方法三(硅烷化)方法二(先氯化)方法一(硅酯化)或2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering29A schematic structure of silica gel.2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering30正相键合色谱法固定相极性大硅胶（-OH或双-OH），硅胶（-CN）流动相极性小烃类+适量极性溶剂（CHCl3,CH3OH,CH3CN)

16、分析对象多用于极性或中等极性化合物的分离，还可用于分离异构体、极性不同的化合物以及不同类型的化合物反相键合色谱法固定相极性小硅胶（C18），硅胶（苯基）流动相极性大甲醇-水，乙腈-水，水和无机盐的缓冲液分析对象多用于多环芳烃（PAHs）等低极性化合物分离；改变流动性配比，也可分离极性化合物X 3. 正相和反相键合色谱法正相和反相键合色谱法X 正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比k k增加。增加。X 在在HPLC分析中，有时要在流动相中加入适量的盐分析中，有时要在流动相中加入适量的盐(碳酸铵、四烷基铵盐碳酸铵、四烷基铵盐)或或酸，为什么？答：都

17、是为防止峰形拖尾。加入盐类是为了减少待测物与键酸，为什么？答：都是为防止峰形拖尾。加入盐类是为了减少待测物与键合相表面的残留硅醇基作用；加入酸是抑制酸类待测物的离解，使其以游合相表面的残留硅醇基作用；加入酸是抑制酸类待测物的离解，使其以游离酸在柱内分离。离酸在柱内分离。X 何为正相色谱，何为反相色谱？何为正相色谱，何为反相色谱？2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering31正相色谱正相色谱低极性流动相低极性流动相反相色谱反相色谱高极性流动相高极性流动相中等极性流动相中等极性流动相中等极性流动相中等极性流动相时间时间时间时间时间

18、时间时间时间待测物极性：待测物极性：ABC正、反相色谱中极性和保留时间的关系正、反相色谱中极性和保留时间的关系2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering32时间，时间，min固定相：固定相：C1固定相：固定相：C8固定相：固定相：C18硅胶硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响1-尿嘧啶；尿嘧啶；2-苯酚；苯酚；3-乙酰苯；乙酰苯；4-硝基苯；硝基苯；5-苯甲酸甲酯；苯甲酸甲酯；6-甲苯甲苯可见：反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。可见：反相键合色谱中，键合相碳链越长，

19、分离效果越好。2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering33二、离子交换色谱二、离子交换色谱X 此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结合，测定各此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既适于无机离子，也适类阴、阳离子的分离分析方法。它既适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、氨基酸、核酸等。于有机物分离，如蛋白质、氨基酸、核酸等。 1. 原理：利用不同等测离子对固定相的亲和能力（或离子原理：利用不同等测离子对固定相的亲和能力（或离子交换能力）的差别来实现分离的。待测离子与离子交换树交

20、换能力）的差别来实现分离的。待测离子与离子交换树脂固定相上带电荷基团或游离的离子发生可逆交换反应：脂固定相上带电荷基团或游离的离子发生可逆交换反应：Y对阳离子，滞留顺序为：对阳离子，滞留顺序为： Fe3+, Ba2+, Pb2+, Sr2+, Ca2+, Ni2+, Cd2+, Cu2+, Co2+, Zn2+, Mg2+, UO22+, Tl+, Ag+, Cs+, Rb+, K+, NH4+, Na+, H+, Li+ Y对阴离子，滞留顺序为：柠檬酸根对阴离子，滞留顺序为：柠檬酸根, SO42-, C2O42-, I-, HSO4-, NO3-, CrO42-, Br-, SCN-, Cl

21、-, HCOO-, CH3COO-, OH-, F- ClXRXClHMRMHR33-3-3NRNR-R:SOSO-:阴离子交换阳离子交换2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering34X 2. 固定相固定相 按离子交换剂类型分四种：按离子交换剂类型分四种： X 按固定相制作方法可分为：按固定相制作方法可分为：Y多孔型离子交换树脂多孔型离子交换树脂(包括微孔型和大孔型包括微孔型和大孔型)；Y表面多孔型表面多孔型(包括薄膜型）离子交换树脂；包括薄膜型）离子交换树脂；Y离子交换键合型。离子交换键合型。类型官能团阳离子交换剂强阳离子交

22、换剂-SO3-弱阳离子交换剂-CO2-阴离子交换剂强阴离子交换剂-NR3+弱阴离子交换剂-NH2+2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering35X 1）多孔型：聚苯乙烯）多孔型：聚苯乙烯+二乙二乙烯苯交联，分微孔型和大孔烯苯交联，分微孔型和大孔型。交换基团多型。交换基团多交换容量交换容量大，稳定。但易溶胀，传质大，稳定。但易溶胀，传质慢、柱效低、分析速度慢。慢、柱效低、分析速度慢。X 2）表面多孔型：）表面多孔型：薄膜型薄膜型=惰性核惰性核+树脂薄层树脂薄层(1-2 m) 多孔型多孔型=惰性核惰性核+硅胶微球硅胶微球+树脂薄层

23、。克服了多孔型树脂薄层。克服了多孔型离子交换树脂的不足，但交离子交换树脂的不足，但交换容量低，柱子易超负荷。换容量低，柱子易超负荷。X 3）离子交换键合相：利用）离子交换键合相：利用化学反应将离子交换基团键化学反应将离子交换基团键合到惰性载体表面。载体可合到惰性载体表面。载体可以是薄壳玻珠，也可以是多以是薄壳玻珠，也可以是多孔硅胶微粒。使用后者为载孔硅胶微粒。使用后者为载体，可得到性能稳定、耐压、体，可得到性能稳定、耐压、高柱效的柱子。高柱效的柱子。微孔型微孔型 大孔型大孔型微孔微孔微孔微孔薄膜型薄膜型 表面多孔型表面多孔型离 子 交离 子 交换层换层惰性核惰性核惰性核惰性核离子交换剂硅离子交

24、换剂硅胶层涂覆胶层涂覆2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering36X 3. 流动相流动相 离子交换色谱流动相为盐类缓冲溶液离子交换色谱流动相为盐类缓冲溶液(有一定有一定pH和离子强和离子强度度) ，通过改变，通过改变pH、缓冲剂类型、离子强度、加入有机试剂、缓冲剂类型、离子强度、加入有机试剂和配位剂等条件来控制分配比和配位剂等条件来控制分配比k，改变交换剂的选择性，进，改变交换剂的选择性，进而影响样品待测物的分离。而影响样品待测物的分离。YpH值：值：影响酸或碱的离解平衡，控制组分离子形式所占的分数。当影响酸或碱的离解平衡，

25、控制组分离子形式所占的分数。当组分以分子形式存在时，则不被保留；离子分数越高，保留值越大。组分以分子形式存在时，则不被保留；离子分数越高，保留值越大。常用的有柠檬酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐和氨水等。常用的有柠檬酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐和氨水等。Y离子强度离子强度I：对保留值的影响比对保留值的影响比pH更大。组分保留值受流动相中盐类更大。组分保留值受流动相中盐类总浓度控制。增加外加阴或阳离子将增加它们对总浓度控制。增加外加阴或阳离子将增加它们对R+或或R-的竞争的竞争能力，使组分保留值减小。通过加入不同种类的盐，可影响柱的选能力，使组分保留值减小。通过加入不同种类的盐，可影响柱的选择性，因

26、为不同物质对交换剂的亲和能力不同。择性，因为不同物质对交换剂的亲和能力不同。Y有机溶剂：有机溶剂：外加有机溶剂通常减小组分的保留值。其极性越小，保外加有机溶剂通常减小组分的保留值。其极性越小，保留值越小。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈和二氧杂环已烷等。留值越小。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈和二氧杂环已烷等。Y配离子配离子L：当大量当大量L、组分、组分X随流动相进入柱后，发生配位剂交换：随流动相进入柱后，发生配位剂交换：RM-L+X RM-X+L 该法用于分离各种氨基酸或碱类。该法用于分离各种氨基酸或碱类。X 思考：离子交换色谱法中，流动相常以无机盐的缓冲液为流思考：离子交换色谱法中，流动

27、相常以无机盐的缓冲液为流动相。请问缓冲液的动相。请问缓冲液的pH值及离子强度对分离各有何影响？值及离子强度对分离各有何影响？2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering37三、离子色谱三、离子色谱X 离子色谱离子色谱(IC)是是70年代发展的新方法。其分离原理与离子交换色谱原理年代发展的新方法。其分离原理与离子交换色谱原理一样，只是流出的各种离子用电导检测器检测。但由于流动相都是强电一样，只是流出的各种离子用电导检测器检测。但由于流动相都是强电解质，其电导率比待测离子约高解质，其电导率比待测离子约高2个数量级，这种强背景电导会完

28、全掩个数量级，这种强背景电导会完全掩盖待测离子信号。盖待测离子信号。 为解决此问题，为解决此问题，1975年年Small提出，在离子交换柱之后，再串结一根抑提出，在离子交换柱之后，再串结一根抑制柱。该柱装填与分离柱电荷完全相反的离子交换树脂。通过分离柱后制柱。该柱装填与分离柱电荷完全相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变为低背景电导的的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变为低背景电导的流动相，从而可用电导检测器检测各种离子的含量。流动相，从而可用电导检测器检测各种离子的含量。X 例如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴例

29、如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应：离子交换树脂，则发生下列反应：R+OH + HCl(流动相流动相)R+Cl- + H2O R+OH + MCl(待测物待测物) R+Cl + M+OH-可见，不仅大量酸转化为低电导的水，而且待测离子转化为具有更大淌可见，不仅大量酸转化为低电导的水，而且待测离子转化为具有更大淌度的碱。度的碱。X 该法的不足之处在于：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，该法的不足之处在于：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度。因此有人提出了使用电导率很低的溶液降低分离度。因此有人提出了使用电导率很低

30、的溶液(如苯甲酸盐稀溶如苯甲酸盐稀溶液液)作流动相。作流动相。X 思考：思考：IC分离中，何为抑制柱？分析阴离子时，抑制柱中应填充何种分离中，何为抑制柱？分析阴离子时，抑制柱中应填充何种离子交换树脂？离子交换树脂？2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering38四、离子对色谱法（四、离子对色谱法（IPC）X 离子色谱对色谱主要用来分离强极性有机酸和有机碱。离子色谱对色谱主要用来分离强极性有机酸和有机碱。 1. 原理：将与待测物离子原理：将与待测物离子A电荷相反的离子电荷相反的离子B（称为对离子或（称为对离子或反离子）加入到流动相

31、中，使待测离子与对离子形成离子对反离子）加入到流动相中，使待测离子与对离子形成离子对AB，该，该AB离子对的性质与离子对的性质与A离子或离子或B离子的性质不同，即间离子的性质不同，即间接改变了待测离子的保留特性。接改变了待测离子的保留特性。例如：固定相为非极性键合相，流动相为水溶液，于流动相例如：固定相为非极性键合相，流动相为水溶液，于流动相中加入与待测离子中加入与待测离子A-有相反电荷的离子有相反电荷的离子B+：X 由于离子对由于离子对AB具有疏水性，因而被非极性固定相提取。其它具有疏水性，因而被非极性固定相提取。其它待测离子待测离子A1，A2，A3.因与因与B离子间的成对能力不同，而离子间

32、的成对能力不同，而形成不同疏水性的离子对，使得各待测物在柱内的保留值不形成不同疏水性的离子对，使得各待测物在柱内的保留值不同，从而达到分离的目的。同，从而达到分离的目的。有机相水相水相BABA2022-5-9College of Chemistry & Chemical Engineering39五、尺寸排阻色谱法五、尺寸排阻色谱法X 尺寸排阻色谱又称凝胶尺寸排阻色谱又称凝胶(渗透渗透)色谱，主要用于大分子的分子分色谱，主要用于大分子的分子分离。它是基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的。离。它是基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的。Y1. 分离原理：固定相为化学惰性的多孔凝

33、胶，它类似于分子筛，但孔径分离原理：固定相为化学惰性的多孔凝胶，它类似于分子筛，但孔径更大。凝胶内有一定大小的空穴，分子体积大的待测物不能渗入孔穴中更大。凝胶内有一定大小的空穴，分子体积大的待测物不能渗入孔穴中而被排阻，较早地被淋洗出来，中等的部分渗透，小分子则完全渗透，而被排阻，较早地被淋洗出来，中等的部分渗透，小分子则完全渗透，最后流出色谱柱。即待测物分子按分子大小最后流出色谱柱。即待测物分子按分子大小(分子量大小分子量大小)先后从柱中流先后从柱中流出。出。Y2. 固定相固定相Y3. 流动相的要求：能溶解样品且与凝胶相似流动相的要求：能溶解样品且与凝胶相似(润湿凝胶润湿凝胶)、粘度小、粘度小(增加扩增加扩散速度散速度)。 类型类型 材料材料 型号型号