+LC(MS)MS液相色谱质谱质谱联用仪

1、+LC （ MS） MS 液相色谱质谱质谱联用仪液质联用仪的性能选择和价格比较液质联用仪的原理及应用简介:迷人的液体颜色1977 年，液相色谱/质谱开始投放市场。1978 年，液相色谱/质谱首次用于生物样品分析。液相色谱/质谱/质谱在1989 年获得成功。1991 年，原料药液相色谱/质谱用于药物开发。1997 年，液相色谱/质谱/质谱用于药代动力学高通量筛选。西方大国质谱协会统计的药物色谱分析中不同方法的XXXX 比例。1990 年，高效液相色谱高达85%，而在 XXXX 则降至15%。相反，液相色谱/质谱联用仪的份额从3%增加到80%左右。我国目前在这方面的水平可能相当于1990 年西方强

2、国的水平。因此，将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对大量混合物进行更准确的定量和定性分析，离色谱-质谱的在线结合还有很长的路要走。此外，样品的预处理过程被简化，样品分析更简单。气相色谱-质谱包括气相色谱-质谱和液相色谱-质谱。液相色谱-质谱联用仪和气相色谱-质谱联用仪相互补充，分析不同性质的化合物。液相色谱-质谱和气相色谱-质谱的区别；气相色谱-质谱是最早商业化的仪器，适用于分析小分子、挥发性、热稳定性和气化性化合物。通过电子轰击获得的光谱可以与标准光谱 库进行比较。液相色谱-质谱联用技术可以解决以下问题:非挥发性化合物的分析和测定；极性化合物的分析和测定；热不稳定化合物的分析和测

3、定:高分子量化合物（包括蛋白质、聚肽、聚合物等。）；没有商业化的光谱库可以比较和查询，只能建立光谱库或者自己分析光谱图。主要使用常用的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱。随着我国财政能力的不断提高和理化分析仪器的快速发展，许多单位正处于设备快速增长的高峰期，也有许多单位提出购买质谱。以下是我个人对气相色谱-质谱联用仪在疾病控制系统的采购和应用中需要回答的问题的看法。从技术角度来看，气相色谱-质谱联用仪的采集主要针对两个方面:定性分析和灵敏度。当涉及到气相色谱-质谱在定性分析中的作用时，我们必须首先谈谈从色谱中发现的逻辑缺陷。色谱定性分析和色谱定量分析都涉及一个基本逻辑: “当两个过程中的大多数因素

4、完全相同时，唯一不变的因素最终会导致不同的结果。”色谱定量基于这一逻辑（当所有条件一致时，决定峰面积的唯一因素是浓度），色谱表征也是如此（当所有条件一致时，决定分离保留时间的唯一因素是成分）。色谱表征最重要的基础是色谱峰的保留时间（在大多数情况下，这甚至是唯一的基础）。在确定性质时，我们的色谱定义是: “如果组分峰的保留时间与标准峰的保留时间相同，则判断该组分=标准物质 ”。 请注意，我们使用的是“不不同 ”，而上述逻辑中的重点是“不同 ”。为了使这种色谱测定合乎逻辑，必须至少增加一个限制: 过程中的每个因素对结果都有特别好的影响。对于色谱法，它意味着“当确定性质时，每个不同的组分必须对应不同

5、的保留时间”。然而， 大量的测试结果告诉我们，不同的成分通常有非常相似的保留时间。这就是为什么我们经常说色谱定性可靠性不高的原因。在色谱测试中，不同的保留时间对应不同的组分。然而，另一方面，相同的保留时间象征着相同的组件是不可靠的。因此，在测试中，排除是相当确定的，而确认在很大程度上是“依靠天气吃饭 ”。一个部分原因是运气。人们对此期待已久，也在努力提高定性分析的准确性。因此，应用标记测定法、双柱法、二极管阵列检测器等。在这些方法中，标记测定法在概念上是不正确的，双柱法也接近于零，二极管阵列法发挥了一定的作用，遗憾的是它的特殊优点不高，容易造成不公正的情况。色谱中引入质谱大大提高了定性分析的可

6、靠性。质谱是针对分子结构、信息特征和丰富的厚度，甚至在绝对程度上可以免除标准物质的限制。让我们谈谈敏感性。通用检测器（如FID和TCD）一般灵敏度有限，特别是优秀的检测器灵敏度更高，但检测范围更大，而质谱检测器是一种兼具通用灵敏度和高灵敏度的检测器。灵敏度取决于信号和背景。我们通常理解，增加灵敏度需要尽可能增加被测物体的信号值。作为一种通用检测器，质谱仪在信号方面没有特殊的优势。然而，它的优点在于它可以大大减少检测背景，从而将检测灵敏度提高一个数量级。检测背景是指检测器对样品基本成分的相应反应。作为一种通用探测器，有许多相应的因素，因此背景相对较高，灵敏度有限。然而，质谱检测器可以通过检测受限

7、的结构信息来过滤掉大多数不必要的背景信息，例如气相色谱-质谱的质谱模式和液相色谱-质谱的质谱模式2.疾病控制和预防系统中常用的色谱类型出于不同的目的，决定购买不同类型的气相色谱-质谱联用仪气相色谱-质谱联用仪的分类方法有很多种，根据仪器大小可分为大、中、小三种。根据仪器的性能，可分为研究级和检测级。根据质谱技术，可分为气相色谱-质谱（气相色谱-四极杆或磁质谱）、气相色谱-ITMS（气相色谱-离子阱质谱）和气相色谱-飞行时间质谱。根据分辨率，它可以分为高分辨率（分辨率高于5000）和中等分辨率（分辨率在1000 和 5000之间 ）。低分辨率（分辨率低于1000）。对于一般用户来说，最重要的关注

8、点是电离源，如电离源、电离源和NCI 源。日源是我们使用最多的，属于最温和的。70 eV的标准库可以提供搜索未知有机物的可能性（例如NIST 化学结构、威利库、 标准害虫CIDE库、 PFL 德国药物库）。这里应该注意的是，当我们提到通过质谱检测未知物质时，我们仅指EI 源的质谱。其他物质，如电离源、质谱或所有液体物质不能检测未知物质。EI 来源的优势在于对功能组的分析。EI 源质谱的第一个重要项目是未知物质的检测和常规已知物质的检测与确认。它也适合初学者学习，但它的灵敏度有限，不适合非常低的内容检测。NCI 的线人就像一页纸的两面。前者的优点是获得准确的分子量信息，特别是长链分子如脂肪酸，但

9、此时结构信息较少。后者的优势是在使用过程中电负性成分可能达到接近电子捕获检测器的水平，更适合有机氯农药的检测和确认，但其检测限相对较大。除离子源外，四极杆也有差异，主要是单四极杆和串联四极杆的差异，而我国配备质谱的气质较少。就真空系统而言，分子涡轮泵和扩散泵之间存在差异。常用液相色谱-质谱联用仪的分类较大。离子源有很多种。电喷雾电离(ESI)和大气压化学电离(APCI)是常用的，但最重要的区别在于检测 方法，如离子阱、单极四极杆、串联四极杆和航行时间。离子阱的优点是容易获得丰富的结构信息，适用于生化和药物结构测试。 它的缺点是基本上不定量，而且 TRAP 容易污染，通常不适合食品分析。单极质谱

10、可用于简单的结构分析或定量分析，且价格不太高。它属于经济液体物质。无需紫外吸收或简单结构判断的常量分析更适合被检测物质，但灵敏度不太高。高，也容易被杂质干扰。系列四段棒的液体质量可分多段进行分析，超低含量分析可因良好的演绎背景而进行。它适用于低含量检测。给出了三个例子来说明如何使用好色质谱仪。气相色谱 -质谱相对简单。它可以被看作是一个气相色谱仪加上一个质谱仪检测器。安装、布局和使用不会有太多特殊要求。巨大的气相色谱-质谱是一个液相色谱-质谱计。有一种说法是从一些仪器的销售中听到的: “ 50%的国内气相色谱-质谱仪器处于睡眠状态，其余25%的仪器使用不加区别，15%很少使用，只有10%经常使

11、用”。这样的声明是严厉的，但它不能否认他的真实性。如果你想使用好色的质谱仪，你应该从正确的选择开始。首先，让我们谈谈气相色谱-质谱疾病控制和预防系统中至少三分之二的气相色谱-质谱仪器是以未知农药为由购买的。一般来说，购买后不久就会发现气相色谱-质谱联用仪的灵敏度达不到要求的测试要求。在实际工作中，用常规的气相色谱-质谱联用技术进行痕量农药，尤其是未知农药的分析是不现实的。但是，它非常适合于劳动卫生的检查，气相色谱-质谱非常适合于劳动卫生的检查。当测试室内有一台普通的气相色谱仪时，它可以作为一种很好的辅助手段。如果我们认识到无错区域并正确应用它们，我们就能达到互相学习、互相支持的效果。使其成为唯

12、一最适合在健康检测中推广气相色谱-质谱联用技术的领域。为什么车间空气的检测更适合气相色谱-质谱联用？首先，车间空气中的大多数待测组分都是挥发性的，在温度不太高的样品入口中容易蒸发，并且在毛细管柱中分离良好。其次， 车间空气中大多数待测组分的分子量范围在 30 至 400 之间，属于最适合气相色谱-质谱检测的范围。最后，车间空气中大多数待测组分的浓度通常较高，无需苛刻的质谱参数即可获得良好的信号响应。（对于溶剂分析尤其如此）。考虑到疾病控制系统中理化检测的现状，气相色谱-质谱联用仪的首选配置是EI 电离源和四极杆型。当资金充裕时，配置项来源可以匹配，但前面的问题是，为了方便起见，需要更改配置项来

13、源和配置项来源，并且不要相互影响（毕竟，在绝大多数情况下在这种情况下，EI 源是主要的源）。至于直接免疫法，不推荐使用，因为在疾病控制系统中检测到的纯产品很少。同时， 离子阱不被推荐，质谱-质谱-质谱不是首选。让我们来谈谈液相色谱质谱液相色谱-质谱联用技术在疾病控制系统中的应用应侧重于“微量已知化学物质的定量分析”，而不是药物或生物化学，而是明确的定量分析。根据这样的要求，三重四极杆液相色谱-质谱几乎是唯一的选择。配置选项不多，主要是ESI 和 APCI ，它们是最常用的前端，而后者只能在与前者交换方便的前提下购买。同样， 不建议购买离子阱和单极四极杆， 前者是因为需要定量解决的问题，后者是为

14、了定性和灵敏度需要解决的问题。在 中 国 ， 三 重 四 极 杆 液 体 产 品 主 要 是 MICROMASS 、 ABI 和FINNIGAN 。购买时应考虑当地用户的具体指数、当地服务能力、数量和声誉。在价格方面，建议土地越少越好，因为液晶显示器的价格非常高，不要认为高交易价格意味着更好的售后服务。原因很简单。这些公司的销售和售后服务部门独立运作，销售收入不会转移到售后服务部门。国产气相色谱-质谱联用仪（尤其是液相色谱-质谱联用仪）使用不佳的主要原因是检测室的设计，除了建模和定位之外，检测室的设计经常被忽视。气相色谱-质谱可以看作是气相色谱和质量检测器的结合。使用的重点和难点仍在气相，对仪

15、器室的环境要求不高。然而，液相色谱-质谱 （以三重四极杆质谱为例）的重点是质谱，液相色谱只是一种定量和取样工具。然而，液相色谱/质谱需要一个长期的启动期（启动周期至少为几个月）。因此，建立一个专业的仪器室比普通仪器重要得多。这是决定液相色谱/质谱是否能很好地完成和能长时间完成的基础。除了墙上的桌椅，在液体仪器室里还有四个简单的问题需要回答 : “电、气、水和声音 ”。“电 ”良好的电源是液相色谱-质谱正常工作的最低要求。我们需要良好的电压、良好的接地和良好的电源保证。此时，大功率不间断电源是最基本的要求。功率可以是6KVA或10KVA,时间必须至少为2小时。此外， 由于液体是一种不容易关闭的普

16、通仪器，它通常运行很长时间。对于仪器室中的其他设施，如空的和谐风扇，也应考虑如何确保安全。我的建议是当员工长时间离开时，关掉风扇和灯。至少应安装两台空调，以防止一次故障后突然升温影响仪器。同时，两台空调还可以缓解长期运行带来的压力。“齐 ”不同的公司需要相同的气源方案用于液相色谱-质谱分析。例如，芬尼根需要氮气和氦气，微操作系统需要氮气和氩气，而ABI 只需要氮气。如果你不想一天换一瓶气体，使用杜瓦瓶几乎是唯一的选择。因为杜瓦瓶又笨又重，我们需要在太空中喘口气来促进事情的发展。例如，我们应该尽最大努力把杜瓦瓶放在门附近，杜瓦瓶顶部不应该有易腐物品。杜瓦瓶首次使用时，有一个准备过程。此时，应注意

17、增压阀是否开得太大。人们经常把阀门开得太大，因为一开始就没有空气出来。当气压上升时，压力就会释放出来，造成严重的浪费。在气体的概念中，“废气 ”还有一个内在的实质性含义。当使用机械泵时，废气包括挥发性流动相和油气，但最需要解决的问题是在连接液相时产生。一般的液相会造成废液，只要有一个瓶子来收集它，但液体的质量是不同的。液体完全蒸发，以每分钟几十升的废气形式存在。如此惊人的音量必须及时排出房间。“水 ”液相色谱 -质谱 （液相色谱 -质谱 ）将在流动相中使用无水，但这不会导致任何问题得到解决。真实的一些需要回答的问题是由露珠的使用引起的。杜瓦瓶充满了液氮，杜瓦瓶的外部在气化过程中会冻结，有时冻结

18、的量相当大。当冰融化时，水会在地面上流动，这不会影响单独的圆柱形腔室或远离仪器。然而，如果杜瓦瓶放在仪器旁边，流动的水可能会造成极大的贫困。另一个概念是，用于液体质量的水不仅是一个纯水机器，而且是一个适当维护的纯水机器。“水 ”的最后一个概念是长期空调造成的冻结水。这时，除湿机就成了必要的设备。“声音 ”一般的色谱仪比较安静，即使是气相色谱-质谱联用仪，当真空度达到绝对水平时噪音也不明显。然而，液相色谱-质谱联用仪的噪音已经 “无法忍受 ”。此时，最好建造一堵软墙，将仪器与操作人员隔离开来。如果仪器室太窄，可以购买带排气扇的密封盒（出售商品），这样也可以减少很多。这台仪器能否使用好取决于人员。

19、也可以想象，如果环境使人们难以忍受或拒绝久留，这种仪器可以很好地使用。第四，使用好的色谱仪的一些细节。1 通电和断电气相色谱-质谱和液相色谱-质谱都强调，当机械泵开启时，分子涡轮泵不能开始工作，直到第一个真空达到绝对水平。当关闭时，绝对有必要停止分子涡轮泵，直到等离子体源的温度下降，然后仅当机械泵的转速下降到接近完全停止时，才关闭机械泵。一般的气相色谱-质谱联用仪有固定的启动和关闭速度。工作站操作和控制启动和关闭过程的原则是，某些液相色谱-质谱仪器需要手动操作，此时需要特别警惕。3 个需要回答的干净问题气相色谱 -质谱联用仪对样品中试剂的清洁度与普通气相测试没有区别。只要能装载电子捕获检测样品，气相色谱绝对不会有问题。最重要的是要注意液相色谱-质谱。第一个表现是(1)流动相应该是干净的。我不想去想国内的试剂，入口不能保证绝对好用，尤其是流动相的水，绝对干净。(2)样品预处理应尽可能干净。(当然，清洁度与效率和接管的接受度成反比，这一点应该综合考虑)。最好有一个十通阀，将非峰时间的流动相排除在质谱之外。(3)在满足灵敏度的前提下，流动相的量也应尽可能小(探索条件时应尽可能考虑普通液相 )，进样量应尽可能小，进样浓度应尽可