高温菌的纯种分离与鉴定

1、高温菌的纯种分离与鉴定汇报人:赵影汇报内容 实验内容 实验结果及分析实验后期工作 实验内容篇 接着上次的实验结果,老师给的样品DSM88固体培养基，温度70度，PH7.0培养长出了菌株 对菌株进行纯种分离 :在培养出的菌株中挑选了10个单菌落从菌落特怔看为不同的菌种进行培养,多次划线,直到长出的菌为纯种菌 对得到的10种菌进行斜面保藏及革兰染色观察它们的形态结构对部分菌进行了芽孢染色实验结果篇 10种菌的菌落特征及形态结构(革兰染色,单染色)2号菌革兰染色图片2号菌单染色图片3号菌革兰染色图片3号菌单染色图片4号菌革兰染色图片4号菌单染色图片5号菌革兰染色图片5号菌单染色图片6号菌革兰染色图片

2、6号菌单染色图片7号菌革兰染色图片7号菌单染色图片8号菌革兰染色图片8号菌单染色图片9号菌革兰染色图片9号菌单染色图片10号菌革兰染色图片10号菌单染色图片实验结果分析篇 对挑取的9种样品进行多次重复划线内容2 菌种的分子鉴定 细菌 的DNA提取： 实验原理：苯酚 氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性。SPS将细胞膜裂解，在蛋白酶K，EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来，DNA溶于水，不溶于有机溶剂，蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利进入到水溶液中形成稳定的胶体溶

3、液，当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定遭到破坏，变性沉淀，离心后有机溶剂在试管底层（有机相），DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两项之间，酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质，氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的溶液用2倍体积的无水乙醇在乙酸钠存在下沉淀DNA。回收DNA用70%乙醇法洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。内容2实验步骤：1、挑米粒大小菌体+50微升溶菌酶+460微升1TE,放入37摇床2小时以上（注意摇菌时离心管要横放）2、20SDS50微升+Pk5-10微升震荡混匀，放入55烘箱3060min3、550微升苯酚：

4、氯仿：异戊醇（25:24:1）震荡混匀，12000rPm离心10min，吸取上清（不吸到中间渣滓，反复抽提2次）4、上清液+2倍上清液体积无水乙醇+0.1倍体积的乙酸钠，室温放置10min以上；5、12000rPm离心10min，去上清，用70乙醇轻摇洗盐12次，再次离心5min，弃乙醇6、3755干燥后（确保乙醇完全挥发干净，防止影响PCR），加水保存备用50mi 加热使其溶解 定容TE配制方法：(用于悬浮和贮存DNA)配制100ml溶液各成分用量1ml 1mol/L Tris-HCL (pH7.4-8 , 25)200ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)水98.8mlTris-HCL缓冲液配制：将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸，用水调至终体积1L浓盐酸体积（ml） pH70ml 7.460ml 7.642ml 8.00.5mol/LEDTA配制：93.05gEDTA.Na2+10