细胞基本培养技术学习教案

1、会计学1细胞基本培养细胞基本培养(piyng)技术技术第一页，共96页。n需要清洗的培养用品需要清洗的培养用品n玻璃器皿、胶塞、塑料制品玻璃器皿、胶塞、塑料制品第2页/共96页第二页，共96页。第3页/共96页第三页，共96页。第4页/共96页第四页，共96页。第5页/共96页第五页，共96页。第6页/共96页第六页，共96页。第7页/共96页第七页，共96页。第8页/共96页第八页，共96页。第9页/共96页第九页，共96页。第10页/共96页第十页，共96页。第11页/共96页第十一页，共96页。第12页/共96页第十二页，共96页。第13页/共96页第十三页，共96页。第14页/共96页

2、第十四页，共96页。第15页/共96页第十五页，共96页。第16页/共96页第十六页，共96页。第17页/共96页第十七页，共96页。干热消毒：一般在烤箱中进行，需加温到 160，保持90120 min方能杀死芽孢。注意！消毒完毕(wnb)后不可马上将烤箱门打开，以免冷空气突然进人，影响消毒效果和损坏玻璃器皿或发生意外事故。第18页/共96页第十八页，共96页。到到(d do)所需要的压力时，开所需要的压力时，开始记录时间，并控制压力恒定。始记录时间，并控制压力恒定。第19页/共96页第十九页，共96页。第20页/共96页第二十页，共96页。第21页/共96页第二十一页，共96页。n培养板：紫

3、外线照射培养板：紫外线照射12小时以小时以上。上。n培养基：过滤除菌培养基：过滤除菌、 第22页/共96页第二十二页，共96页。第23页/共96页第二十三页，共96页。野用品过多或重叠放置，物品野用品过多或重叠放置，物品相互遮挡射线，会降低消毒效相互遮挡射线，会降低消毒效果果第24页/共96页第二十四页，共96页。般工作服即可。在无菌室内工般工作服即可。在无菌室内工作需着消毒衣帽。作需着消毒衣帽。第25页/共96页第二十五页，共96页。第26页/共96页第二十六页，共96页。部，如不便消毒时，应取备品更部，如不便消毒时，应取备品更换。换。3、布局：、布局：原则上应是右手使用的东西放置在原则上应

4、是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央置于中央(图图4-1)。工作由始至终。工作由始至终要保持一定顺序性。要保持一定顺序性。第27页/共96页第二十七页，共96页。第28页/共96页第二十八页，共96页。第29页/共96页第二十九页，共96页。第30页/共96页第三十页，共96页。第31页/共96页第三十一页，共96页。第32页/共96页第三十二页，共96页。贴壁细胞第33页/共96页第三十三页，共96页。贴附生长(shngzhng)型细胞细胞培养常用(chn yn)的培养瓶、培养皿、6孔板、96孔板第34页/共96页第三十四页，共96页。+ +

5、 + + + + + + + + +细胞(xbo)的贴附过程贴附物质(wzh)带正电荷细胞(xbo)带负电荷第35页/共96页第三十五页，共96页。成纤维细胞：梭形、三角形、2-3个突起(tq)上皮细胞：扁平、多角形、园核可连成单层第36页/共96页第三十六页，共96页。第37页/共96页第三十七页，共96页。图5-6 消化(xiohu)法传代培养步骤第38页/共96页第三十八页，共96页。第39页/共96页第三十九页，共96页。置温箱中培养。置温箱中培养。第40页/共96页第四十页，共96页。第41页/共96页第四十一页，共96页。悬浮生长(shngzhng)型细胞第42页/共96页第四十二

6、页，共96页。第43页/共96页第四十三页，共96页。第44页/共96页第四十四页，共96页。第45页/共96页第四十五页，共96页。第46页/共96页第四十六页，共96页。（一）取材(qci)第47页/共96页第四十七页，共96页。第48页/共96页第四十八页，共96页。1、鼠组织(zzh)取材各种( zhn)组织取材第49页/共96页第四十九页，共96页。第50页/共96页第五十页，共96页。第51页/共96页第五十一页，共96页。械法和化学法三种；械法和化学法三种；第52页/共96页第五十二页，共96页。第53页/共96页第五十三页，共96页。第54页/共96页第五十四页，共96页。第5

7、5页/共96页第五十五页，共96页。培养。剪刀剪切法可能对组织培养。剪刀剪切法可能对组织有一定损伤，但操作比较方便。有一定损伤，但操作比较方便。第56页/共96页第五十六页，共96页。压挤法第57页/共96页第五十七页，共96页。第58页/共96页第五十八页，共96页。第59页/共96页第五十九页，共96页。(三)原代细胞培养类型(lixng)第60页/共96页第六十页，共96页。中中3060 分钟；分钟；(3)剪切：用眼科剪把组织块切成剪切：用眼科剪把组织块切成23 毫米大小的块毫米大小的块(用手术刀切用手术刀切割亦可割亦可)，以便于消化；，以便于消化；第61页/共96页第六十一页，共96页

8、。第62页/共96页第六十二页，共96页。第63页/共96页第六十三页，共96页。第64页/共96页第六十四页，共96页。第65页/共96页第六十五页，共96页。第66页/共96页第六十六页，共96页。第67页/共96页第六十七页，共96页。第68页/共96页第六十八页，共96页。第69页/共96页第六十九页，共96页。第70页/共96页第七十页，共96页。第71页/共96页第七十一页，共96页。第72页/共96页第七十二页，共96页。第73页/共96页第七十三页，共96页。第74页/共96页第七十四页，共96页。第75页/共96页第七十五页，共96页。第76页/共96页第七十六页，共96页。

9、第77页/共96页第七十七页，共96页。第78页/共96页第七十八页，共96页。第79页/共96页第七十九页，共96页。各种细胞对冻存速度的要求也不一样；上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些，另外用什么防护剂合适和用量多大，要依细胞而定，初代培养细胞用DMSO 较好，一般细胞可用甘油；用量以较小为好。有人认为人皮肤(p f)上皮细胞贮存在20 30甘油中很好。原则上细胞在液氮中可贮存多年，但为妥善起见，冻存一年后，应再复苏培养一次，然后再继续冻存。第80页/共96页第八十页，共96页。第81页/共96页第八十一页，共96页。第82页/共96页第八十二页，共96页。第83页/共96页第八十三页，共

10、96页。第84页/共96页第八十四页，共96页。悬液，装入离心管中，再补加悬液，装入离心管中，再补加(b ji)10ml 培养液，吹打使细培养液，吹打使细胞悬浮；胞悬浮；第85页/共96页第八十五页，共96页。达到达到107ml，在稀释，在稀释20 倍时，倍时，仍能保持仍能保持5105ml 数量。数量。第86页/共96页第八十六页，共96页。第87页/共96页第八十七页，共96页。(3) 到达后，倒出大部分培养液，到达后，倒出大部分培养液，保留正常量，置保留正常量，置37培养，次日培养，次日传代。传代。第88页/共96页第八十八页，共96页。第89页/共96页第八十九页，共96页。匀，放入匀，放入 37 ，5 % CO2 培养箱培养。培养箱培养。第90页/共96页第九十页，共96页。第91页/共96页第九十一页，共96页。第92页/共96页第九十二页，共96页。第93页/共96页第九十三页，共96页。1支持物制备特制有机玻璃、特氟隆薄膜、玻璃等：其中以玻璃片和特氟隆薄膜最为多用。前者(qin zh)便于做各种固定、染色处理和观察；后者最适做电镜技术，允许做包埋和切片。加支持物培养法程