第34章DNA的复制和修复

1、20222022年年6 6月月1 1日日1 1？ Reolication Reolication Repair of DNARepair of DNAChapter34 DNAChapter34 DNA的复制和修复的复制和修复核酸代谢核酸代谢20222022年年6 6月月1 1日日2 2（一）（一）DNADNA是生物遗传的物质基础是生物遗传的物质基础遗传信息的载体遗传信息的载体 遗传信息以密码的形式编码在遗传信息以密码的形式编码在DNADNA分子上，表现为分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序特定的核苷酸排列顺序三联体密码三联体密码。一、基因信息的传递一、基因信息的传递20222022年年6 6月

2、月1 1日日3 3（二）中心法则（二）中心法则DNADNARNARNAproteinproteinreplicationreplicationtranscriptiontranscriptionreverse reverse transcriptiontranscriptiontranslationtranslationreplicationreplication20222022年年6 6月月1 1日日4 420222022年年6 6月月1 1日日5 5二、二、DNA的复制的复制（一）（一）DNADNA的存在形式的存在形式 染色体与质粒染色体与质粒严紧控制质粒严紧控制质粒单拷贝质粒：单拷贝质粒

3、：每个细胞内只有一个或少数几个拷贝每个细胞内只有一个或少数几个拷贝松弛控制质粒松弛控制质粒多拷贝质粒：多拷贝质粒：每个细胞内含有许多拷贝（每个细胞内含有许多拷贝（20以上）以上）20222022年年6 6月月1 1日日6 620222022年年6 6月月1 1日日7 720222022年年6 6月月1 1日日8 820222022年年6 6月月1 1日日9 920222022年年6 6月月1 1日日1010以亲代以亲代DNADNA为模板产生子代为模板产生子代DNADNA的过程的过程最初最初半保留复制半保留复制（semiconservationsemiconservation replicati

4、on replication）进一步研究进一步研究: :半保留复制为半保留复制为半不连续复制半不连续复制（semidiscontinuoussemidiscontinuous replication replication） （二）（二）DNADNA复制复制DNADNA的自我复制的自我复制20222022年年6 6月月1 1日日1111 DNA DNA复制，双螺旋解开成单链，合成新的互补链复制，双螺旋解开成单链，合成新的互补链 子代细胞出现新的子代细胞出现新的DNADNA双链双链 其中一股单链是从亲代完整地接受其中一股单链是从亲代完整地接受 另一股单链完全重新合成，且按碱基配对原则互补另一股单

5、链完全重新合成，且按碱基配对原则互补1 1、半保留复制、半保留复制意义：意义：保持保持DNADNA在代谢上的稳定性在代谢上的稳定性19531953，WatsonWatson、CrickCrick20222022年年6 6月月1 1日日12122 2、DNADNA半保留复制的证据半保留复制的证据氮同位素示踪试验、放射自显影法氮同位素示踪试验、放射自显影法（19581958，MeselsonMeselson、StahlStahl）第一代第二代细菌（含15N-DNA)普通DNA普通DNA重DNA 重DNA普通培养基普通培养基细菌DNA双链密度梯度离心15N-DNA14N-DNA20222022年年6

6、 6月月1 1日日131320222022年年6 6月月1 1日日1414（三）（三）DNADNA复制的起点复制的起点(origin)(origin)和方式和方式复制子：复制子：控制复制起始（控制复制起始（originorigin） 终止复制（终止复制（terminusterminus）复制子复制子(replicon(replicon) )：基因组能独立进行复制的单位基因组能独立进行复制的单位原核生物：原核生物：DNADNA环形，环形，1 1个复制起点个复制起点真核生物：真核生物：DNADNA线形，多个复制起点线形，多个复制起点20222022年年6 6月月1 1日日1515复制方式复制方式双

7、向复制双向复制(bi-directional)(bi-directional) ：大多数复制从起点开始向大多数复制从起点开始向2 2个方向复制个方向复制2 2个复制叉个复制叉(replication fork)(replication fork)单向复制单向复制(unidirectional)(unidirectional) ：少数复制从起点向少数复制从起点向1 1个方向复制个方向复制1 1个复制叉个复制叉或生长点或生长点(growing point)(growing point)20222022年年6 6月月1 1日日161620222022年年6 6月月1 1日日171720222022年

8、年6 6月月1 1日日181820222022年年6 6月月1 1日日1919（四）（四）DNADNA复制的酶系复制的酶系1 1、解旋解链酶：、解旋解链酶：1 1）拓扑异构酶）拓扑异构酶（TopoTopo，解超螺旋酶），解超螺旋酶）：解开解开DNADNA超螺旋超螺旋2 2）解链酶）解链酶（解螺旋酶）（解螺旋酶）：解开碱基间氢键，形成解开碱基间氢键，形成2 2股单链股单链3 3）单链）单链DNADNA结合蛋白结合蛋白（SSBSSB）：结合单股结合单股DNADNA，阻止，阻止DNADNA复性复性2 2、引物酶：、引物酶：合成小段合成小段RNARNA引物，用于引物，用于DNADNA聚合酶延长子链聚合

9、酶延长子链20222022年年6 6月月1 1日日2020TopoTopo 解开超螺旋解开超螺旋TopoTopo DNADNA单链断裂、重新连接单链断裂、重新连接每次只作用于一条链（催化瞬时的单链的断裂和连接）每次只作用于一条链（催化瞬时的单链的断裂和连接）不需要能量辅因子（不需要能量辅因子（ATPATP、NADNAD）E.ColiE.Coli：蛋白蛋白大白鼠肝：切割大白鼠肝：切割- -封闭酶（封闭酶（nicking-closing enzymenicking-closing enzyme）20222022年年6 6月月1 1日日2121TopoTopo 同时断裂、连接双链同时断裂、连接双链D

10、NADNA需要需要ATPATP、NADNAD亚类：亚类：DNADNA旋转酶（旋转酶（DNA gyraseDNA gyrase）：）：原核；原核；引入负超螺旋，复制中起重要作用引入负超螺旋，复制中起重要作用转变超螺旋转变超螺旋DNADNA（正、负超螺旋）（正、负超螺旋）：原核、真核原核、真核无超螺旋的松弛形式（无超螺旋的松弛形式（relaxed formrelaxed form）20222022年年6 6月月1 1日日2222TopoTopo ：切开切开DNADNA中的一条链，与另一中的一条链，与另一条链解缠绕或再缠绕条链解缠绕或再缠绕连接连接TopoTopo 同时切开同时切开DNADNA双链双

11、链解旋或再螺旋解旋或再螺旋连接连接20222022年年6 6月月1 1日日2323本质：本质：切断切断DNADNA磷酸二酯键磷酸二酯键 改变改变DNADNA的链环数，再连接的链环数，再连接 兼具兼具DNADNA内切酶、连接酶的性质内切酶、连接酶的性质 断裂、连接反应相互耦联断裂、连接反应相互耦联不能连接事先已经存在的断裂不能连接事先已经存在的断裂DNADNA20222022年年6 6月月1 1日日242420222022年年6 6月月1 1日日252520222022年年6 6月月1 1日日2626解链酶、解链酶、SSBSSB的作用的作用解链酶解链酶（helicasehelicase，解螺旋酶

12、）：，解螺旋酶）：断裂互补碱基间的氢键，使断裂互补碱基间的氢键，使DNADNA双链分离形成双链分离形成“复制叉复制叉”单链单链DNADNA结合蛋白结合蛋白（SSBSSB）：）：结合于解开的结合于解开的DNADNA单链，防止双螺旋再形成（阻止单链，防止双螺旋再形成（阻止DNADNA复性）复性）20222022年年6 6月月1 1日日2727引物酶：引物酶：合成合成RNARNA引物引物N DNA DNA聚合酶：聚合酶：只能延长子链（不能从头合成）只能延长子链（不能从头合成）N 子链的合成必须有子链的合成必须有55端核苷酸引物存在端核苷酸引物存在N 引物由引物酶催化合成，引物由引物酶催化合成，引物酶

13、引物酶特殊的特殊的RNARNA聚合酶聚合酶N 引物：小段引物：小段RNARNA，在此基础上，在此基础上，DNADNA聚合酶延长子链聚合酶延长子链20222022年年6 6月月1 1日日28283 3、DNADNA聚合酶聚合酶（DNA polymeraseDNA polymerase） ：延长子链延长子链DNADNA聚合酶不能从头合成子链，只能延长聚合酶不能从头合成子链，只能延长DNADNA聚合酶：多种类、多种活性聚合酶：多种类、多种活性20222022年年6 6月月1 1日日292920222022年年6 6月月1 1日日30301 1）DNADNA聚合反应条件聚合反应条件（1 1）底物）底物

14、 dNTPdNTP（dATPdATP，dGTPdGTP，dCTPdCTP，dTTPdTTP）（2 2）聚合酶）聚合酶（3 3）模板）模板单链的单链的DNADNA母链母链（4 4）引物）引物寡核苷酸引物（寡核苷酸引物（RNA)RNA)（5 5）其他：）其他：解链酶，解旋酶，单链结合蛋白，连接酶解链酶，解旋酶，单链结合蛋白，连接酶20222022年年6 6月月1 1日日31312 2）聚合机制）聚合机制（1 1）DNADNA聚合酶：聚合酶： 5 35 3的聚合活性的聚合活性pp pp pppPPPOHOHOH55PPiN1N2N3N1N2N3533 需需引物链引物链20222022年年6 6月月1

15、 1日日3232（2 2）DNADNA聚合酶：聚合酶：核酸外切酶活性核酸外切酶活性 35 35外切酶活性外切酶活性 53 53外切酶活性外切酶活性533535外切酶活性53外切酶活性20222022年年6 6月月1 1日日33333 3）DANDAN聚合酶聚合酶（DNA polymeraseDNA polymerase）分类分类大肠杆菌大肠杆菌DNADNA聚合酶聚合酶I I、DNADNA聚合酶聚合酶I I：多功能酶多功能酶1 1）沿）沿5533方向延长方向延长DNADNA链（链（DNADNA聚合酶活力）聚合酶活力）2 2）由）由33端水解端水解DNADNA链（链（3 53 5核酸外切酶活力）核

16、酸外切酶活力）3 3）由）由55端水解端水解DNADNA链（链（5 35 3核酸外切酶活力）核酸外切酶活力）等等 常用的工具酶常用的工具酶复制准确性的保证：复制准确性的保证： 复制过程中碱基的配对受到双重核对复制过程中碱基的配对受到双重核对1 1）DNADNA聚合酶的选择作用聚合酶的选择作用2 2）3 3 5 5 外切酶的校正作用。外切酶的校正作用。20222022年年6 6月月1 1日日3434子链的准确延长子链的准确延长所有所有DNADNA聚合酶：聚合酶： 聚合酶活性聚合酶活性 33，55外切酶活外切酶活性性 dNTP dNTP进入进入 与前一个核苷酸与前一个核苷酸3-OH3-OH形成磷酸

17、二酯键形成磷酸二酯键 水解切除错配碱基水解切除错配碱基DNADNA子链准确延长子链准确延长保证遗传信息稳定传递到下一代保证遗传信息稳定传递到下一代变异，几率非常小，进化速度非常缓慢变异，几率非常小，进化速度非常缓慢20222022年年6 6月月1 1日日3535DNADNA聚合酶聚合酶： 3 3 5 5核酸外切酶活核酸外切酶活力力DNADNA聚合酶聚合酶：真正起复制作用的酶，对温度敏感（真正起复制作用的酶，对温度敏感（415415页）页）20222022年年6 6月月1 1日日3636E.ColiE.Coli的的DNADNA聚合酶聚合酶20222022年年6 6月月1 1日日3737真核细胞中

18、的真核细胞中的DNADNA聚合酶聚合酶20222022年年6 6月月1 1日日3838DNADNA聚合酶水解引物并填补空隙聚合酶水解引物并填补空隙20222022年年6 6月月1 1日日39394 4、DNADNA连接酶：连接酶：填补缺口、连接冈崎片段填补缺口、连接冈崎片段20222022年年6 6月月1 1日日404035535353HOP DNA ligaseNADATPNMNAMP+PPi+POHP5533+53DNAligaseOOHPOOO-OOHPOOOPP-PPi20222022年年6 6月月1 1日日414120222022年年6 6月月1 1日日4242（五）（五）DNADN

19、A复制的拓扑性质复制的拓扑性质（419419）1 1、解螺旋酶、解螺旋酶 领头链领头链 reprep蛋白蛋白 DnaDna B B 随从链随从链 解链酶解链酶35rep蛋白解链酶5353SSB领头链随从链20222022年年6 6月月1 1日日4343引物酶引物酶 RNARNA聚合酶聚合酶 DnaDna G G（RNARNA聚合酶）聚合酶）引发体引发体 DnaADnaA辨认复制启始点，再结合辨认复制启始点，再结合DnaB, DnaCDnaB, DnaC及其及其 他复制因子形成复合体他复制因子形成复合体2 2、DNADNA拓扑异构酶拓扑异构酶（解旋酶）（解旋酶）3 3、引物酶和引发体、引物酶和引

20、发体20222022年年6 6月月1 1日日4444DNADNA复制酶系复制酶系20222022年年6 6月月1 1日日4545（六）（六） DNA DNA 的半不连续复制的半不连续复制日本，冈崎（日本，冈崎（19681968）1 1、概念、概念DNADNA、RNARNA：合成方向：合成方向5353DNADNA双链沿复制叉移动时，子链合成方向相反双链沿复制叉移动时，子链合成方向相反一条链合成方向与复制叉同向，连续复制一条链合成方向与复制叉同向，连续复制前导链前导链另一条链合成方向与复制叉方向相反，不连续另一条链合成方向与复制叉方向相反，不连续 滞后链滞后链（随后链）（随后链）20222022年

21、年6 6月月1 1日日4646DNADNA复制，一条链连续，另一条链不连续复制，一条链连续，另一条链不连续前导链、滞后链；冈崎片段前导链、滞后链；冈崎片段冈崎片段的合成需要引物，冈崎片段的合成需要引物，“引物合成酶引物合成酶”冈崎片段：冈崎片段：DNADNA复制过程中出现不连续片段复制过程中出现不连续片段 2 2、DNADNA半不连续复制的过程半不连续复制的过程（请看（请看418418页）页）20222022年年6 6月月1 1日日4747（七）（七） DNADNA复制的过程复制的过程（421421页）页）1 1、复制的起始：、复制的起始：1 1）DNADNA解旋、解链，形成复制叉：解旋、解链

22、，形成复制叉：拓扑异构酶、解链酶、拓扑异构酶、解链酶、SSBSSB2 2）RNARNA引物合成：引物合成：依赖于单链模板，引物酶催化合成小段依赖于单链模板，引物酶催化合成小段RNARNA引物引物特点：特点：原核：环形原核：环形DNADNA，一个起点，双向复制，一个起点，双向复制真核：线形真核：线形DNADNA，多个起点，多复制叉，多个起点，多复制叉20222022年年6 6月月1 1日日48482 2、复制的延长：、复制的延长：1 1）子链延长：）子链延长：引物合成，引物合成，polpol（真核为（真核为DNADNA或或）催化）催化在引物在引物3-OH3-OH末端添加与模板链对应互补的末端添加

23、与模板链对应互补的dNTPdNTP2 2）半不连续合成：）半不连续合成：（1 1）领头链领头链：链的延长方向与解链方向相同：链的延长方向与解链方向相同 连续合成连续合成（2 2）随从链随从链：链的延长方向与解链方向相反：链的延长方向与解链方向相反 不连续合成（不连续合成（冈崎片段冈崎片段）20222022年年6 6月月1 1日日49493 3、复制的终止、复制的终止1 1）水解引物及填补空隙：）水解引物及填补空隙：冈崎片段合成后，冈崎片段合成后，polpol（真核可能是（真核可能是）水解去除）水解去除RNARNA填补留下的空隙填补留下的空隙2 2）连接酶连接冈崎片段形成完整双链）连接酶连接冈崎

24、片段形成完整双链DNADNA：空隙填补后，空隙填补后，DNADNA片段间缺口由连接酶催化连接片段间缺口由连接酶催化连接产生完整的双链产生完整的双链DNADNA分子分子20222022年年6 6月月1 1日日505020222022年年6 6月月1 1日日515120222022年年6 6月月1 1日日5252DNADNA的复制导致端粒缩短的复制导致端粒缩短20222022年年6 6月月1 1日日5353逆转录：逆转录：以以RNARNA为模板合成为模板合成DNADNA 以病毒以病毒RNARNA为模板，以为模板，以dNTPdNTP为原料，由逆转录酶催化，按为原料，由逆转录酶催化，按碱基配对规律合成

25、碱基配对规律合成DNADNA的过程的过程逆转录酶：逆转录酶：依赖于依赖于RNARNA模板，才具有催化合成模板，才具有催化合成DNADNA的活性的活性 依赖依赖RNARNA的的DNADNA聚合酶聚合酶RNARNA单链单链DNADNA（cDNAcDNA）双链双链DNADNA插入寄主插入寄主DNADNA逆转录酶：逆转录酶：RNARNA病毒病毒潜在的致癌可能潜在的致癌可能20222022年年6 6月月1 1日日545420222022年年6 6月月1 1日日5555三、三、DNADNA的损伤与修复的损伤与修复（一）（一）DNADNA的损伤的损伤 某些理化因子（紫外线、电离辐射和化学诱变剂等）某些理化因

26、子（紫外线、电离辐射和化学诱变剂等）作用于作用于DNADNA，造成其结构和功能的破坏，从而引起生物突变，造成其结构和功能的破坏，从而引起生物突变和致死的效应和致死的效应DNADNA的损伤的损伤常见的常见的DNADNA损伤方式损伤方式嘧啶二聚体的形成嘧啶二聚体的形成20222022年年6 6月月1 1日日56561 1、DNADNA分子的分子的自发损伤自发损伤1 1）碱基错配：）碱基错配：尽管尽管DNADNA聚合酶具有校对修复功能聚合酶具有校对修复功能仍存在极少量的错配（仍存在极少量的错配（1010-10-10）2 2）自发性化学变化：）自发性化学变化： 碱基异构碱基异构 碱基脱氨基碱基脱氨基

27、脱嘌呤、脱嘧啶脱嘌呤、脱嘧啶 碱基修饰碱基修饰 链断裂链断裂2 2）物理因素）物理因素引发的损伤引发的损伤 紫外线紫外线 电离辐射电离辐射 DNADNA链断裂链断裂 交联交联3 3）化学因素）化学因素引发的损伤引发的损伤 烷化剂对烷化剂对DNADNA的损伤：的损伤： 碱基烷基化、碱基脱落碱基烷基化、碱基脱落 断链、交联断链、交联 碱基修饰剂、类似物对碱基修饰剂、类似物对DNADNA的损伤的损伤 人工促变剂、抗癌药物人工促变剂、抗癌药物 亚硝酸盐、黄曲霉毒素亚硝酸盐、黄曲霉毒素 20222022年年6 6月月1 1日日57572 2、DNADNA损伤的后果损伤的后果1 1）DNADNA分子的改变

28、：分子的改变：点突变、缺失、插入、倒位、易位、链断裂点突变、缺失、插入、倒位、易位、链断裂2 2）DNADNA损伤的结果：损伤的结果：（1 1）致死性）致死性（2 2）丧失某些功能）丧失某些功能（3 3）改变基因型而不改变表现型）改变基因型而不改变表现型（4 4）发生有利于物种生存的结果，生物进化）发生有利于物种生存的结果，生物进化20222022年年6 6月月1 1日日585820222022年年6 6月月1 1日日5959（二）（二）DNADNA的修复的修复 生物在长期进化过程中获得的一种能使生物在长期进化过程中获得的一种能使DNADNA的损伤得到的损伤得到恢复的保护功能恢复的保护功能20

29、222022年年6 6月月1 1日日6060DNADNA的修复机制的修复机制错配修复：错配修复：识别新链中的错配碱基，切除后重新合成子链片段识别新链中的错配碱基，切除后重新合成子链片段直接修复直接修复：不切除碱基，修复酶直接修复受损碱基，恢复正常：光复活修复：不切除碱基，修复酶直接修复受损碱基，恢复正常：光复活修复+ +暗修复暗修复切除修复：切除修复：复制前切除错误碱基，重新合成缺口片段复制前切除错误碱基，重新合成缺口片段重组修复：重组修复：复制后利用另一模板进行重组，互补合成缺口片段复制后利用另一模板进行重组，互补合成缺口片段SOSSOS修复：修复：大面积损伤时修复机制，会导致错误碱基，但可

30、增加存活率大面积损伤时修复机制，会导致错误碱基，但可增加存活率光修复光修复暗修复暗修复20222022年年6 6月月1 1日日616120052005年，年，122122卷第卷第5 5期期DNADNA错配和修复（李国民）错配和修复（李国民）理学学士：武汉大学生物系理学学士：武汉大学生物系理学博士：美，韦恩州立大学理学博士：美，韦恩州立大学美国肯塔基大学，副教授美国肯塔基大学，副教授 1 1、错配修复、错配修复20222022年年6 6月月1 1日日6262DNADNA损伤损伤（1 1）外界环境影响外界环境影响（2 2）复制中出现错配）复制中出现错配 尽管出错几率十分微小尽管出错几率十分微小 生

31、命这台精密的仪器不允许任何差错生命这台精密的仪器不允许任何差错 即使一个碱基的错配也可能造成严重的疾病即使一个碱基的错配也可能造成严重的疾病 错配修复基因缺陷错配修复基因缺陷癌症癌症 遗传性非多发性息肉结肠癌遗传性非多发性息肉结肠癌（hereditary nonpolyposishereditary nonpolyposis colorectal cancer colorectal cancer）20222022年年6 6月月1 1日日6363 碱基错配、少量插入、缺失碱基错配、少量插入、缺失机体校正机体校正 DNADNA聚合酶聚合酶3535的校对功的校对功能能 DNA DNA聚合酶未发现错配

32、，聚合酶未发现错配，错配修复错配修复 （mismatch repair, MMRmismatch repair, MMR）20222022年年6 6月月1 1日日6464错配修复系统：错配修复系统：酶：酶：错配矫正酶错配矫正酶（mismatch correction enzymemismatch correction enzyme） DNADNA聚合酶聚合酶 DNA DNA连接酶等连接酶等1111种蛋白种蛋白步骤：步骤：启始、切除、修复启始、切除、修复20222022年年6 6月月1 1日日6565启始：启始：根据序列根据序列GATCGATC中腺嘌呤（中腺嘌呤（A A）的甲基化程）的甲基化程度

33、不同，错配矫正酶的度不同，错配矫正酶的MutSMutS部分识别错配部分识别错配区域，区域，MutHMutH、MutLMutL识别未甲基化的识别未甲基化的GATCGATC序序列，将新合成单链切出缺口（列，将新合成单链切出缺口（nicknick）切除：切除：核酸外切酶将核酸外切酶将GATCGATC到错配区域间的到错配区域间的DNADNA链链切除。为防止剩下的暴露单链降解，需单切除。为防止剩下的暴露单链降解，需单链结合蛋白（链结合蛋白（SSbSSb）保护）保护修复：修复：DNADNA聚合酶聚合酶合成，连接酶对缺口合成，连接酶对缺口进行连接进行连接 20222022年年6 6月月1 1日日666620

34、222022年年6 6月月1 1日日6767林氏综合症林氏综合症(Lynch Syndrome) (Lynch Syndrome) 卵巢癌综合症卵巢癌综合症 20222022年年6 6月月1 1日日68682 2、光修复、光修复（photoreactivationphotoreactivation） 直接修复直接修复 可见光激活光复活酶，消除由于紫外线照射而可见光激活光复活酶，消除由于紫外线照射而形成的嘧啶二聚体形成的嘧啶二聚体 （低等生物和鸟类）。（低等生物和鸟类）。20222022年年6 6月月1 1日日69699 紫外光照射可使相邻的两个紫外光照射可使相邻的两个T T 形成二聚体形成二聚

35、体9 光修复酶使二聚体解聚为单体状态，光修复酶使二聚体解聚为单体状态，DNADNA完全恢复正常完全恢复正常9 光修复酶的激活需光修复酶的激活需300300600m600m波长的光。波长的光。NNCH3OORHPHROOCH3NNNNCH3OORHHNNCH3OORPUVTT光修复酶20222022年年6 6月月1 1日日707020222022年年6 6月月1 1日日71713 3、暗修复、暗修复（dark repairdark repair）（1 1）切除修复：）切除修复：掌握概念和过程掌握概念和过程参与的酶：参与的酶：核酸内切酶，核酸内切酶，pol,DNApol,DNA连接酶连接酶特异核酸内切酶pol DNA连接酶20222022年年6 6月月1 1日日727220222022年年6 6月月1 1日日7373（2 2）重组修复：）重组修复：了解概念和过程了解概念和过程重组蛋白重组蛋白RecARecA，polpol，连接酶，连接酶损伤保留损伤保留20222022年年6 6月月1 1日日747420222022年年6 6月月1 1日日757520222022年年6 6月月1 1日日767