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文档简介
1、植物根尖压片技术植物根尖压片技术有丝分裂观察有丝分裂观察尹若春尹若春问题?问题?n为了获得更多的有丝分裂细胞,一般在固定之为了获得更多的有丝分裂细胞,一般在固定之前对根尖进行前处理,通常用的化学物质是?前对根尖进行前处理,通常用的化学物质是?A A 秋水仙素;秋水仙素;B B 对二氯苯;对二氯苯;C 8-C 8-羟基喹啉;羟基喹啉;D D 二甲亚砜;二甲亚砜;E E 二甲苯二甲苯n有丝分裂实验中用于固定植物根尖的溶液的配有丝分裂实验中用于固定植物根尖的溶液的配方是?方是?A 3A 3份乙醇和份乙醇和1 1份冰醋酸;份冰醋酸;B 3B 3份冰醋酸和份冰醋酸和1 1份乙醇;份乙醇;C 3C 3份甲
2、醇和份甲醇和1 1份冰醋酸;份冰醋酸;D 3D 3份冰醋酸和份冰醋酸和1 1份甲醇;份甲醇;n在植物的根的结构中,用于有丝分裂观察实验在植物的根的结构中,用于有丝分裂观察实验的是?的是?A A 成熟区(根毛区);成熟区(根毛区);B B 伸长区;伸长区;C C 分生区;分生区;D D 根冠;根冠;问题?问题?n为了清晰地观察到分裂期细胞中染色体的形态,为了清晰地观察到分裂期细胞中染色体的形态,一般选用的物镜倍数是?一般选用的物镜倍数是? A 4A 4倍;倍;B 10B 10倍;倍;C 20C 20倍;倍;D 40D 40倍;倍;E 100E 100倍倍实验目的实验目的掌握根尖染色体压片技术掌握
3、根尖染色体压片技术掌握植物有丝分裂过程各期的特点掌握植物有丝分裂过程各期的特点及主要区别及主要区别实验原理实验原理细胞经过生长和分裂而完成增殖的全过细胞经过生长和分裂而完成增殖的全过程称为程称为细胞增殖周期细胞增殖周期。有丝分裂(又称。有丝分裂(又称间接分裂)是高等生物体细胞增殖的主间接分裂)是高等生物体细胞增殖的主要形式。要形式。根尖染色体压片法,是观察植物染色体根尖染色体压片法,是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型、最常用的方法,也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。体交换的基础。实验原理实验原理n每种生物的染色体
4、数目是恒定的,染色每种生物的染色体数目是恒定的,染色体的数目和形态特征是物种的特征。体的数目和形态特征是物种的特征。 葱属植物的染色体组型分析葱属植物的染色体组型分析实验原理实验原理细胞周期细胞周期间期间期G1期:期:RNA和蛋白质合成和蛋白质合成S期:期:DNA复制复制G2期:期:纺锤体微管形成,能量储积纺锤体微管形成,能量储积分裂期分裂期前期前期中期中期后期后期末期末期根尖的结构根尖的结构实验材料与试剂实验材料与试剂n蚕豆、大蒜、洋葱的根尖蚕豆、大蒜、洋葱的根尖n0.1%秋水仙碱秋水仙碱n卡诺固定液:无水乙醇卡诺固定液:无水乙醇3份,冰醋酸份,冰醋酸1份份n0.5%醋酸地衣红染液醋酸地衣红
5、染液n1MHCl实验操作实验操作n取材与前处理取材与前处理n将大蒜、洋葱的鳞基置于盛有水的培养皿中,将大蒜、洋葱的鳞基置于盛有水的培养皿中,20-25恒温箱中培养,当根长为恒温箱中培养,当根长为1-2cm左左右时取材,放入右时取材,放入0.1%秋水仙碱水溶液中浸秋水仙碱水溶液中浸泡处理泡处理4-5hr,自来水冲洗后固定。,自来水冲洗后固定。n固定:固定:n卡诺氏固定液卡诺氏固定液 固定固定24小时,转小时,转70%酒精中酒精中4冰箱保存冰箱保存固定的目的是用化学的方法把细胞迅速杀死,使蛋白质变性,固定的目的是用化学的方法把细胞迅速杀死,使蛋白质变性,并尽量保持原来的分裂状态,同时更易于着色。并
6、尽量保持原来的分裂状态,同时更易于着色。 改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤丝改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤丝的形成,促使染色体缩短和分散等。除的形成,促使染色体缩短和分散等。除了秋水仙素外,对二氯苯和了秋水仙素外,对二氯苯和 8-羟基喹羟基喹啉也是常用的。啉也是常用的。 实验操作实验操作n解离解离n酸解:酸解:蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗 0.1MHCl 60水浴解离水浴解离10-15min( 1MHCl 8-12min ) 蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗n酶解:酶解:2%纤维素酶纤维素酶+0.5%果胶酶果胶酶28 温箱中解离温箱中解离4-5hr实验操作实验操作n染色:染色:n截取延长区及分生组织区(截取延长
7、区及分生组织区( 0.5cm ),),0.5%醋醋酸地衣红染色酸地衣红染色5minn压片:压片:n截取分生组织区(截取分生组织区(1-3mm),),n大蒜根尖:盖上盖玻片,用镊子轻轻敲打盖玻片(用拇指大蒜根尖:盖上盖玻片,用镊子轻轻敲打盖玻片(用拇指垂直下压),使材料分散均匀成薄层垂直下压),使材料分散均匀成薄层n蚕豆根尖:用镊子将根尖组织夹碎(染液中),去除大的蚕豆根尖:用镊子将根尖组织夹碎(染液中),去除大的组织块后盖上盖玻片,压片观察组织块后盖上盖玻片,压片观察n显微观察显微观察n低倍镜找到处于分裂期的细胞,高倍镜下观察不同低倍镜找到处于分裂期的细胞,高倍镜下观察不同分裂相细胞。分裂相细
8、胞。实验说明实验说明n对于种子难以发芽的植物,可用茎尖做材料对于种子难以发芽的植物,可用茎尖做材料n前处理的目的是降低细胞质粘度,使染色体缩前处理的目的是降低细胞质粘度,使染色体缩短分散,防止纺锤体形成,让更多的细胞处于短分散,防止纺锤体形成,让更多的细胞处于分裂中期。秋水仙碱、对二氯苯、分裂中期。秋水仙碱、对二氯苯、8-羟基喹啉羟基喹啉n解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解,解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解,细胞壁软化或部分分解,使细胞和染色体容易细胞壁软化或部分分解,使细胞和染色体容易分散压平分散压平洋葱根尖的有丝分裂洋葱根尖的有丝分裂注意事项注意事项n压片材料要少,避免细胞紧贴在一起压片材料要少,避免细胞紧贴在一起n用镊子敲打盖玻片时,用力要均匀用镊子敲打盖玻片时,用力要均匀n40倍物镜就够倍物镜就够n解离时间和染色时间的摸索解离时间和染色
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