不规则抗体筛选

1、抗体筛选检查祁新华祁新华2012.09.28临床输血技术规范 明确规定部分病人应做“抗体筛选”检测，第四章第17条：“凡遇以下情况必须必须按全国临床检验操作规程有关规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不合的； 2、对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查 1、目前已知红细胞有目前已知红细胞有2626个抗原系统个抗原系统（确认21个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，检测抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血

2、型以外）而引发的溶血。2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。）3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。抗体筛选检查 一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以外的

3、所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选”阳性。抗体筛选技术要求n尽可能多的检测出有临床意义的抗体。 n尽可能少的检测出无临床意义的抗体。 n尽可能快的完成抗体检测方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况 n盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素冷凝集素抗I及抗IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。n低离子聚凝胺法（LIP

4、-IAT）：所需试验时间少（35分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。 n间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。 试剂试剂n抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#）试剂红细胞必须含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和JkbnLIM 液、Polybrene及重悬液n抗球蛋白血清n受检者血清n受检者5%红细胞悬液盐水法n原理：原理：盐水介质中的红细胞膜上的抗原与相应抗体结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集块。实验步骤n取4支小试管

5、，按表标记及加入相应试剂。 n 1# 2# 3# 自 身 n受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴n筛选用红细胞悬液1# 1滴n筛选用红细胞悬液2# 1滴n筛选用红细胞悬液3# 1滴n受检者5%红细胞悬液 1滴n混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前注意事项n标本编号清楚！n试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。n加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加，少加,以免引起前带和后带效应n转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。Polybrene法n原理：原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合

6、物，在溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而真正的凝集不消失。(见图). 实验步骤取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 n 1# 2# 3# 自 身 n受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴n筛选用红细胞悬液1# 1滴n筛选用红细胞悬液2# 1滴n筛选用红细胞悬液3# 1滴n受检者5%红细胞悬液 1滴nLIM液 （

7、12滴） 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6mln混匀后室温静置1分钟。然后各加入Polybrene试剂1滴，混匀后3400rpm 离心 15秒，轻扣观察有无凝集。n向试管中各加入重悬液 1滴，轻摇观察凝集是否散开。注意事项n标本尽可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝素是大分子的阴离子物质,可以中和凝聚胺的阳离子，导致假阴性。n在接收标本时，要询问抽血时是否正在输液或者刚输过液，如果有这种情况则要咨询临床医师液体中是否含有止血敏 ， KCLKCL，VitCVitC ，这些药品会干扰聚凝胺的作用导致假阴性，引起事故。n加血清量不能多加，否则会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏

8、效果。n加聚凝胺，只需加1滴，多加可能导致重悬液无法充分解散非特异性凝集，出现假凝集，导致假阳性。n看结果：阴性结果-红细胞迅速散开，并在1分钟内完全散开。可在镜下观察。 阳性结果-红细胞不完全散开，弱凝集可能在30分钟内明显减弱或消失，因此以立即看的结果为准。n转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。抗球蛋白试验抗球蛋白试验n原理：原理：抗体分子和补体成分都是球蛋白，用这些球蛋白免疫动物使之产生抗体即抗人球蛋白，抗球蛋白试剂可以和致敏在红细胞上的人球蛋白（抗体分子和补体分子）反应，通过架桥作用使致敏红细胞出现凝集。见图 抗球蛋白试验 抗球蛋白实验步骤 n 1# 2#

9、3# 自 身 n受检者血清受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴n筛选用红细胞悬液筛选用红细胞悬液1# 1滴n筛选用红细胞悬液筛选用红细胞悬液2# 1滴n筛选用红细胞悬液筛选用红细胞悬液3# 1滴n受检者受检者5%红细胞悬液红细胞悬液 1滴n混匀后置37水浴30分钟后，用生理盐水洗涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水，然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以3400rpm 离心15秒钟，轻摇，观察结果。结果意义筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的抗体+ 同种抗体+ + 自身抗体，或自身抗 体和同种抗体同时存 在 + 自身抗体注意事项n必须进行必须进行间接间接抗人球蛋白试验。抗人球蛋白试验。n

10、必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。n观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转速、。速、。n观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起事故。事故。n若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进一步进行抗体特异性的鉴定一步进行抗体特异性的鉴定.(.(以判断抗体的临床意义并给予以判断抗体的临床意义并给予配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生儿溶血病等疾病儿溶血病等疾病) )n建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法抗体特异性鉴定（了解）n使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞一般由8-16种含有不同抗原的O型红细胞配套组成，根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。n实验方法和抗体筛选实验相同二 实验原理n 血型就是红细胞膜上特