地中海贫血基因检测的临床应用

1、2 全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%） 中国南方高发地区人群携带率最高可达到24%3-地贫分布-地贫分布中国南方地贫基因携带率 地区地区携带率携带率(%)(%) 地贫地贫地贫地贫 合计合计 广东广东 8.532.54 11.07 广西广西 14.956.78 21.73 四川四川 1.922.18 4.1 台湾台湾 4.201.10 5.3 香港香港 5.023.41 8.43Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5. 在我国，地中海贫血主要在南方

2、广东、广西、海南、四川、重庆等省市发病率较高，以广西、广东最为严重。4地中海贫血地中海贫血 (地贫地贫)（Thalassemias ）异常血红蛋白病异常血红蛋白病珠蛋白结构异常，绝大部分没有或有轻度临床诊断珠蛋白结构异常，绝大部分没有或有轻度临床诊断遗传性持续性胎儿血红蛋白遗传性持续性胎儿血红蛋白珠蛋白的合成不随着胎儿的发育而发生改变，胎儿血珠蛋白的合成不随着胎儿的发育而发生改变，胎儿血红蛋白持续表达。红蛋白持续表达。地中海贫血（Thalassemia）简称地贫（Thal），是由于血红蛋白的珠蛋白肽链基因突变或缺失，使某种珠蛋白肽链合成障碍而致的一种遗传性慢性溶血性贫血。血红蛋白分子是由珠蛋白

3、+血红素组成，珠蛋白由两对（4条）肽链构成。根据珠蛋白肽链基因（简称基因或基因）缺失、缺陷或基因突变和珠蛋白肽链合成障碍的不同，可将地贫分为型、型、型和型四种，其中以型和型地贫较为常见。胚胎期胚胎期胎儿期胎儿期成人成人gower 1- 22gower 2- 22Portland- 22HbF- 22HbA- 22HbA- 22HbA2- 22 HbF- 22正常成人血红蛋白（Hb）有三种：HbA(22)( 2.53.5%)、HbA2(22)(96.5-97.5%)、HbF(22)(0-1.0%)。 2 1 2 1 2 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1血红蛋白正常轻型：2个基因缺失

4、或突变中间型（HbH 疾病）：3个 基因缺失或突变Hb Barts：3个 基因缺失或突变静止型：1个 缺失或突变 临床特点临床特点静止型静止型（地贫地贫2 2）轻型或标准型轻型或标准型（地贫地贫1 1）中间型（中间型（HbHHbH病病/CS /CS 型型HbHHbH病）病）重型重型HbBartsHbBarts胎儿水肿综合征）胎儿水肿综合征）发病年龄3个月儿童，成人儿童，成人胎儿贫血程度无无或轻度中度重度重度黄疸无无轻度中度无或轻度肝脾肿大无无或轻度轻度中度重度血片RBC：形态异常正常轻度中度重度重度血红蛋白电泳正常正常HbH带或伴HbBartsHbConstantSpring大量HbBarts

5、伴HbPortland少量HbHHbF正常正常正常或轻度减少无HbH包涵体无无或可有强阳性阳性/110.70.950.30.6基因诊断缺失1个或突变/-，T/缺失2个或突变/-或/T-缺失3个或突变-/-，T/-缺失4个-/-表型表型Hb AHb AHbHb Barts BartsHb HHb H正常人97-98%00静止型携带者96-98%0-2%(At birth)0轻型地贫症状85-95%2-8%(At birth)2%Hb H 疾病下降G)13HBBCD43CD43 GT2HBAQS125Codon 125(T-C)14HBB-29-29AG3HBACS142Codon 142(T-C

6、)15HBBInt起始密码子ATGAGG4HBA-SEASEA缺失16HBBCD14-15CD14-15(+G)5HBA-3.73.7缺失17HBBCD27-28CD27-28(+C)6HBA-4.24.2缺失18HBB-32-32CA7HBBCD41-42CD41-42 (-TCTT)19HBB-30-30TC8HBBIVS-2-654IVS-2-654 CT20HBBIVS-1-1IVS-1-1 GT9HBBCD17CD17 AT21HBBIVS-1-5IVS-1-5 GC10HBB-28-28AG22HBBCD31CD31(-C)11HBBCD26CD26 GA23HBBCapCAP +

7、40-+43(-AAAC)12HBBCD71-72CD71-72(+A)本试剂盒适用于人DNA样本的地中海贫血基因型（包含3种突变、3种缺失及17种突变）中国常见的突变基因型的检测，可用于人地中海贫血的辅助诊断及适用于大样本量的携带者筛查和产前基因诊断。26点突变与测序结果符合率高达100% 三家临床医院广东省妇幼保健院、广西省妇幼保健院及湖北省妇幼保健院结果汇总见下表： 阳性符合率（临床灵敏度）=711/（711+0）=100%； 阴性符合率（临床特异性）=709/（0+709）=100%； 总符合率 =（711+709）/（711+0+0+709）=100%；27检测方法检测方法阳性样品阳

8、性样品阴性样品阴性样品点突变点突变现代现代高达试剂高达试剂盒盒260478573测序测序260478573共计共计738573检测方法检测方法阳性样品阳性样品阴性样品阴性样品现代高达试剂盒现代高达试剂盒428217Gap-PCRGap-PCR428217缺失突变与Gap-PCR结果符合率高达100% 阳性符合率（临床灵敏度）=428/（428+0）=100%； 阴性符合率（临床特异性）=217/（0+217）=100%； 总符合率 =（428+217）/（428+0+0+217）=100%；检测流程样本核酸提取20 min多重PCR扩增2.5hr液相杂交15 min结果检测与判读 1 min/

9、test29全新液相芯片技术简介二维数字编码磁珠30藻全新液相芯片技术简介 目前，国内地贫分子诊断方法主要有Gap-PCR、反向斑点杂交、导流杂交、测序等。其中Gap-PCR只能检测出地贫中的缺失型，反向斑点杂交需要两次检测才能完整的检出、-地贫；导流杂交技术不能做到基因位点的准确分型；而测序方法需要昂贵的仪器，复杂序列分析，人工经验要求高，不利于大规模筛查。-地中海贫血地中海贫血-地中海贫血地中海贫血亚能生物技术(深圳)有限公司-地中海贫血基因检测试剂盒(gap-PCR法) (国食药监械(准)字2012第3401088号 -地中海贫血基因检测试剂盒(反向点杂交法) (国食药监械(准)字201

10、3第3400676号中山大学达安基因股份有限公司-地中海贫血基因检测试剂盒(gap-PCR法) (国食药监械(准)字2011第3401628号-地中海贫血基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法) (国食药监械(准)字2012第3401665号珠海经济特区海泰生物制药有限公司东南亚型-地中海贫血Zeta链蛋白检测试剂盒(酶联免疫法) (国食药监械(准)字2011第3400228号深圳益生堂生物企业有限公司地中海贫血基因检测试剂盒(PCR探针法) (国食药监械(准)字2012第3400354号厦门致善生物科技有限公司-地中海贫血基因检测试剂盒(荧光PCR熔解曲线法) (国食药监械(准)字2013

11、第3401294号潮州凯普生物化学有限公司-和-地中海贫血基因检测试剂盒(PCR+膜杂交法) (国食药监械(准)字2012第3400399号北京现代高达生物技术有限责任公司-和-型地中海贫血基因检测试剂盒(PCR-杂交法) (国食药监械(准)字2013第3401572号现代高达现代高达同类产品同类产品（Gap-PCRGap-PCR、膜杂交）、膜杂交）样本收集样本收集基因组DNA获取基因组DNA获取缺失和突变分2管进行PCR扩增缺失，点突变和点突变分别进行PCR扩增多重微珠杂交（30min）Gap-PCR核酸电泳（1h）膜杂交（2-4h）自动化洗涤（5min）人工洗涤（膜杂交）电脑软件自动判读人

12、工判断，UV下观察缺失突变人工判读，2张膜条分别对和进行判读比较内容比较内容现代高达现代高达同类产品同类产品（Gap-PCRGap-PCR、膜杂交）、膜杂交）检测位点检测位点 同时对缺失、突变及突变检测分别对缺失、突变及突变检测基因分型基因分型可以准确区分杂合和纯合型只能区分少数位点结果分析结果分析仪器自动分析判断人工分析判读，耗时耗力报告时间报告时间 1天4-7天（96个样品）分析通量分析通量 96样本/次，适合大样本量检测单个样本分析自动化程度自动化程度高，样本转管无需再次标记，电脑自动化判读结果等低，样本标记繁多，易出错，结果检测靠手工操作等准确度准确度 高，自动化高，减少人工错误，较高

13、，但稳定性差，受经验、环境因素等影响耗材费用耗材费用低低环境污染环境污染 无使用EB，有致癌性 （Gap-PCR）自备试剂自备试剂只需纯水，用于显色液和洗液稀释需自己配制或购买杂交液、电泳液等通量高通量高采用自动化检测技术，每次可同时检测96个样本，分析样本通量高； 品质优品质优结果为数字信号，由软件自动判读，同时生成检测报告单，结果准确、稳定可靠，有效避免人为错误，阴、阳性符合率均为100%；判读易判读易采用电脑软件自动判读，减少人工误差，结果稳定性高；时间短时间短检测速度快，报告时间最短可至5小时；效率高效率高实验室需求人员少，2个人1套仪器一天可完成500人份样本检测；分型强分型强能在一次实验针对突变和缺失同时进行多个位点检测，突变、突变和缺失一次呈现；覆盖广覆盖广可覆盖中国人群地贫基因变异的95%以上，准确性高；种类多种类多样本种类包括外周血、羊水、绒毛、脐带血、足血片。产品应用实例广东省妇幼保健院广东省妇幼保健院院长张小庄发布发布了最新的广东地贫防控项目基线调查结果广东省妇幼保健院地贫基因实验室内，工作人员在使用液态芯片仪分析地贫基因 我公司与广东省妇保院合作对广东省21个地市的14332对户籍住院分娩