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文档简介

1、1/15Palindrome, Restriction Enzyme, Sticky EndsGAATTCGAATTCGAATTCGAATTCSticky Ends(Cohesive Ends)EcoRI MadamGet An Apple To The ClassGAATTCGAATTC2/15Mice run faster through the forest than elephants“3/154/155/156/15带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象电电 泳泳 electrophoresis 带电粒子在电场中的迁移速度

2、叫迁移率，它同电场强度带电粒子在电场中的迁移速度叫迁移率，它同电场强度和本身所携带的净电荷数成正比，也与电泳分子的大小、构和本身所携带的净电荷数成正比，也与电泳分子的大小、构型、形状等因素有关。型、形状等因素有关。 DNA DNA分型、分型、DNADNA序列分析、限制酶切分析以及限制酶作图等序列分析、限制酶切分析以及限制酶作图等的技术基础。的技术基础。 凝胶电泳凝胶电泳 Gel electrophoresis7/15Hydrolysis of DNA by restriction enzymes produces a mixture of DNA fragments 8/15 生理条件下，核酸

3、分子中的磷酸基团是离子化的，生理条件下，核酸分子中的磷酸基团是离子化的，DNA和和RNA呈多聚阴离子状态（呈多聚阴离子状态（Polyanions）。）。 DNA、RNA放到电场中，由负极放到电场中，由负极正极移动。正极移动。大小、构型不同的核酸分子大小、构型不同的核酸分子迁移率不同，因而在电场中被分离。迁移率不同，因而在电场中被分离。9/15琼脂糖凝胶分辨琼脂糖凝胶分辨DNADNA片段的范围为片段的范围为o o2 2 50 kb 50 kb聚丙烯酰胺凝胶分辨范围为聚丙烯酰胺凝胶分辨范围为1 1个个-1000 bp-1000 bp凝胶浓度越高，介质孔隙越小，分辨力越强，反之。凝胶浓度越高，介质孔

4、隙越小，分辨力越强，反之。 凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关10/15凝胶电泳中加入溴化乙锭凝胶电泳中加入溴化乙锭（EB ethidium bromide ）染色，）染色，核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看DNA所形成的条带。所形成的条带。11/15 EB是一种核酸染料。当凝胶浸泡在含是一种核酸染料。当凝胶浸泡在含EB的溶液，或的溶液，或EB直直接加到凝胶中，接加到凝胶中，EB同同DNA分子结合，在紫外光照射下，只有分子结合，在紫外光照射下，只有DNA分子通过放射荧光而变成可见的谱带。荧光的强度是同分子通过放射荧光而变成可见的谱带。荧光的强度是同DNA片段的大小片段的大小(或数量或数量)成正比。成正比。12/1513/1514/1515

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