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1、(1 1)BradfordBradford显色法显色法 考马斯亮蓝考马斯亮蓝G250G250(CoomassieCoomassie brilliant blue brilliant blue)与蛋与蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合,使溶液呈白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合,使溶液呈蓝色蓝色。此时此时蛋白质蛋白质-色素结合物在色素结合物在595nm波长波长下有最大光吸收。下有最大光吸收。此法灵敏度比酚试此法灵敏度比酚试剂法高剂法高4 4倍,常用于快速定量分析。倍,常用于快速定量分析。 考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250(3 3)酚试剂呈色反应()酚试剂呈色反应(LowryLowry
2、法)法)蛋白质浓度降低蛋白质浓度降低如营养不良、肝脏疾患如营养不良、肝脏疾患 蛋白质浓度增高蛋白质浓度增高肾病综合症、严重脱水情况下肾病综合症、严重脱水情况下管管 号号0 01 12 23 34 4考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250 G-250 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 0.9% NaCl0.9% NaCl 100l 100l 对应加入倍比对应加入倍比稀释的稀释的蛋白标准液蛋白标准液 100l 100l 100l 100l 100l 100l 100l 100l 蛋白质终浓度蛋白质终浓度(gg) 0 012.512.525255050100100A A595nm595nm 取样后充分混合,取样后充分混合,放置放置2min2min后后, ,记录记录A A595nm595nm,并通过标准曲线,并通过标准曲
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