啤酒厂化验室设计

1、广西工业职业技术学院设计说明书课 题 名 称： 啤酒厂微生物实验室设计 姓 名： 廖国旭 专 业： 食品药品监督管理 班 级： 药监1031班 起 止 日 期： 指 导 教 师： 韦丽 前言设计化验室目的在于对啤酒原辅料及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量，维护消费者权利，为企业提供有力销售保障，使企业强有力的立足于世界市场。化验室基本任务是对啤酒原辅料、半成品及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量。化

2、验室功能是为啤酒的质量提供有效的保障，让啤酒达到消费者可接受水平，保证啤酒质量，通过工作人员运用精密的检测仪器设备对啤酒进行检验与验证，以合格的身份进入销售市场，让消费者买的放心喝得开心。 化验室主要由理化实验室、微生物室、值班室、办公室、仪器室、天平室、更衣室、洗涮室、缓冲间、无菌室、准备室。 摘要 对于啤酒生产来说，质量检验的重要性是不言而寓的。化验室应该摆脱仅仅进行化验的狭隘定义，而要为啤酒生产的各个工序提供指导，对啤酒质量进行有效的控制。为保证分析结果的准确性，就要从多个方面对化验室进行建造，建立合理完善的管理制度。 本分析化验室主要担任本厂所有原料、半成品及成品的检测,起到控制和管理

3、生产,保证和监督本厂生产的味精的质量和卫生指标的作用,也为开发新产品、制定合理的工艺参数提供数据依据.本分析化验室主要包括:办公室、仪器室、试剂室、理化实验室、准备室、微生物检验室.啤酒厂分析化验室的主要任务是对原材料分析、半成品化验分析、成品化验分析起到控制和管理生产，保证和监督食品质量和卫生指标作用。在成品成厂时，必须对出 厂的各规格啤酒，经过检验，各理化指标、技术质量均要符合卫生标准，以保证人民健康和商品信誉。 本分析化验室的整体目标是完成对原料、辅料、半成品及成品的检测和质量控制，保证产品的质量。并对新产品、新工艺的开发。目录1.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准41.2原料的检测

4、项目及标准41.3半成品检测项目及标准41.4成品检测项目及标准52.啤酒原料、半成品及成品的检测方法62.1啤酒原料的检测方法6 2.2啤酒半成品的检测方法 7 2.3啤酒成品的检测方法7-233.试剂和仪器清单243.1试剂清单253.2 玻璃仪器清单263.3 设备清单27 3.4化验室的月试剂消耗量274.化验室的平面布置图及设计说明284.1化验室设置294.2化验室的平面布置图30 4.3设计说明（包括水、电、平面布置说1明）315.化验室人员配制和组织管理32 6.化验室的岗位责任制34 7.参考文献36 8.谢辞361.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准1.1啤酒半成品检测

5、项目及标准序号微生物检验检测标准1致病菌、厌氧菌不得检出2乳酸菌数 1106cfu/mL1.2啤酒成品检测项目及标准序号微生物检测项目检测标准1菌落总数502大肠菌群33致病菌不得检出2.啤酒半成品及成品的检测方法2.1半成品2.1.1酵母死活细胞（死亡率）的测定活的菌体，由于新陈代谢不停的进行着，细胞内氧化还原值（rH）较小，而还原力强。这时如有像美蓝那样的无毒染料进入活的细胞内，即被还原脱色：而死的细胞代谢停止，无还原力，即被染成蓝色。美蓝无毒，且能为活细胞还原成无色故多用于区别细胞的死活。但美蓝浓度、作用时间等都用影响，因此以制片后五分钟内计算的死细胞数为据。 检查方法：取0.1%美蓝一

6、滴，置载玻片中央，然后去酒母液少许和入美蓝液中，搅拌均匀，加盖玻片，在显微镜下检查数已变蓝的细胞及未变蓝的细胞（可数56个视野的细胞数），计算死细胞占总细胞数的百分率。 死亡率的计算：酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞数的百分数，在显微镜下数一定的细胞数，并记录死活细胞数，按下式计算死亡率 死亡率=b/a%2.2成品2.2.1志贺氏菌检验2.2.1.1范围 本标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella) 的检验方法。 本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。 2.2.1.2设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a 恒温培养箱：36 1 ； b 冰箱：2 5

7、 ； c 膜过滤系统； d 厌氧培养装置：41.5 1 ； e 电子天平：感量0.1 g； f 显微镜：10100； g 均质器； h 振荡器； i 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头； j 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500 mL； k 无菌培养皿：直径90 mm； l pH计或pH比色管或精密pH试纸； m全自动微生物生化鉴定系统。 2.2.1.3培养基和试剂 a 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素。 b 麦康凯（MAC）琼脂。 c 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂。 d 志贺氏菌显色培养基。 e 三糖铁（TSI）琼脂。 f 营养琼脂斜

8、面。 g 半固体琼脂。 h 葡萄糖铵培养基。 i 尿素琼脂。 j -半乳糖苷酶培养基。 k 氨基酸脱羧酶试验培养基。 l 糖发酵管。 m 西蒙氏柠檬酸盐培养基。 n 粘液酸盐培养基。 o 蛋白胨水、靛基质试剂。 p 志贺氏菌属诊断血清。 q 生化鉴定试剂盒。2.2.1.4操作步骤 2.2.1.5增菌 以无菌操作取检样25 g（mL），加入装有灭菌225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8 000 r/min10 000 r/min均质；或加入装有225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1 min2 min，液体样品振荡混匀即可。于41.5 ，厌氧培养16

9、 h20 h。 2.2.1.6分离 取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36 1 培养20 h24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。 表 1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培

10、养基的说明进行判定2.2.1.7初步生化试验 2.2.1.8 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36 1 培养20 h24 h，分别观察结果。 2.2.1.9凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其2.2.1.6中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。 2.2.1.10生化试验及附加生化试验 2.2.1.11生化试验 用2.2.1.8中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即-半乳糖苷酶、尿

11、素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2。 表2 志贺氏菌属四个群的生化特征 生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C

12、群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌-半乳糖苷酶a-a+尿素赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶b+水杨苷七叶苷靛基质/()/甘露醇c+棉子糖甘油()()d注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性；（+）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。2.2.1.12附加生化实验 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生

13、化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36 培养24 h48 h)。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。 表3 志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别 生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌大肠埃希氏菌A-D菌葡萄糖铵西蒙氏柠檬酸盐dd粘液酸盐dd注1：+表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。注2：在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D（碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。2.2.1.13如选择生化

14、鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据表3的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。 2.2.1.14结果报告 综合以上生化试验的结果，报告25 g（mL）样品中检出或未检出志贺氏菌。2.2.3沙门氏菌检验2.2.3.1 范围 本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella ）的检验方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。 2.2.3.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1）冰箱：2 5 。 2）恒温培养箱：36 1 ，42 1 。 3）均质器。 4）振荡器。 5）电子天

15、平：感量 0.1 g 。 6）无菌锥形瓶: 容量500 mL，250 mL。 7）无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 8）无菌培养皿：直径 90 mm 。 9）无菌试管：3 mm50 mm 、10 mm75 mm。 10）无菌毛细管。 11）pH计或pH比色管或精密 pH试纸。 12）全自动微生物生化鉴定系统。 2.2.3.3培养基和试剂 1）缓冲蛋白胨水（BPW）。 2）四硫磺酸钠煌绿（TTB ）增菌液。 3）亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。 4）亚硫酸铋（BS）琼脂。 5）HE琼脂。 6）木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。

16、7）沙门氏菌属显色培养基。 8）三糖铁（TSI）琼脂。 9）蛋白胨水、靛基质试剂。 10）尿素琼脂（pH 7.2 ）。 11）氰化钾 （KCN） 培养基。 12）赖氨酸脱羧酶试验培养基。 13）糖发酵管。 14）邻硝基酚 -D半乳糖苷（ONG）培养基。 15）半固体琼脂。 16）丙二酸钠培养基。 17）沙门氏菌 O 和H 诊断血清。 18）生化鉴定试剂盒。2.3.3.4操作步骤 2.3.3.4.1前增菌 称取25 g （mL）样品放入盛有 225 mL BPW 的无菌均质杯中，以 8 000 r/min 10 000 r/min均质1 min2 min，或置于盛有 225 mL BPW 的无菌

17、均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH 至6.80.2。 无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 1 培养8 h18h。 如为冷冻产品, 应在45 以下不超过 15 min,或2 5 不超过 18 h 解冻。 2.3.3.4.2增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 42 1 培养 18 h 24 h 。同时，另取 1 mL，转种于10 mL SC内，于36 1 培养18 h 24 h 。 2.3

18、.3.4.2分离 分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个 BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于 36 1 分别培养18 h 24 h （XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或40 h 48 h （BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1 。 表 1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中

19、心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。 2.3.3.4.3生化试验 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌, 直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36 1 培养18 h 24 h ，必要时可延长至 48 h 。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2 。 表2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结

20、果 三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢K A （） （） 可疑沙门氏菌属 K A （） （） 可疑沙门氏菌属 A A （） （） 可疑沙门氏菌属 A A / /非沙门氏菌 K K / /非沙门氏菌 注：K：产碱，A：产酸；：阳性，：阴性；（）：多数阳性，少数阴性；/：阳性或阴性。 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时 , 可直接接种蛋白胨水 （供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于 36 1 培养18 h 24 h ，必要时可延长至 48 h ，按表 3 判定结果。将已挑

21、菌落的平板储存于2 5 或室温至少保留24 h ，以备必要时复查。 表3 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 反应序号硫化氢（H2S）靛基质pH 7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶A1A2A3/注：阳性；阴性；/阳性或阴性。 反应序号 A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3 项中有1项异常，按表4 可判定为沙门氏菌。如有2 项异常为非沙门氏菌。 表4 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 pH 7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸 脱羧酶判定结果甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）沙门氏菌或（要求符合本群生化特性）沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：表示阳性；表示阴性。 反

22、应序号 A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 反应序号 A3：补做ONG 。ONG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性, 甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。 必要时按表 5 进行沙门氏菌生化群的鉴别。 表5 沙门氏菌属各生化群的鉴别 项目卫矛醇山梨醇水杨苷ONG丙二酸盐KCN注：表示阳性;表示阴性。 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据 5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。 2.3.3.5结果

23、与报告 综合以上生化试验的结果，报告25 g （mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。2.2.4金黄色葡萄球菌检验 2.2.4.1设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：36 1 。 、冰箱：2 5 、恒温水浴箱：37 65 、天平：感量 0.1 g 、均质器 、振荡器。 无菌吸管：1 mL （具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 无菌锥形瓶：容量 100 mL、500 mL 。 无菌培养皿：直径 90 mm 。 注射器：0.5 mL 。 pH 计或 pH 比色管或精密pH 试纸。 2.2.4.2培养基和试剂

24、10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤。 7.5 %氯化钠肉汤。 血琼脂平板。 Baird-Parker 琼脂平板 脑心浸出液肉汤(BHI) 。 兔血浆。 稀释液：磷酸盐缓冲液。 营养琼脂小斜面。 革兰氏染色液。 无菌生理盐水2.2.4.3操作步骤 2.2.4.3.1样品的处理 称取 25 g 样品至盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min ，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min2 min 。若样品为液

25、态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，振荡混匀。 2.2.4.3.2增菌和分离培养 将上述样品匀液于 36 1 培养 18 h24 h 。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板，血平板 36 1 培养 18 h24 h 。Baird-Parker 平板 36 1 培养 18 h24 h 或 45 h48 h 。 金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker

26、 平板上，菌落直径为 2 mm3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇 到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌 落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。2.2.4.3.3鉴定 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 m1 m 。 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-

27、Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到 5 mL BHI 和营养琼脂小斜面，36 1 培养 18 h24 h 。 取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物 0.2 mL0.3 mL，振荡摇匀，置 36 1 温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝 块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 1 培养 18 h4

28、8 h ，重复试验。 葡萄球菌肠毒素的检验：未检出金黄色可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素。 2.2.4.3.4结果与报告 结果判定：符合 5.2.3、5.3，可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告：在 25 g（mL ）样品中检出或葡萄球菌。 2.2.4菌落总数2.2.4.1样品的稀释 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min 10000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:

29、10 的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。 2.2.4.2检 样 25 g(mL) 样品+225 mL 稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL分别加入无菌培养皿内培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 每皿中加入15 mL 20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀 报 告 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振

30、摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 按上述操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL无菌吸管或吸头。 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取 1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 2.2.4.3培养 琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48 h2 h 。水产品 30 1培养72 h3 h 。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂

31、表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。 2.2.4.4菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units ，CFU ）表示。 选取菌落数在30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一

32、半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2 ，代表一个平板菌落数。 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 2.2.4.5结果与报告 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g （mL）样品中菌落总数结果。 计算： （1） 式中： N 样品中菌落数； C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d 稀释因子（第一稀释度）。 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数

33、，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU300 CFU 之间，其中一部分小于 30 CFU 或大于 300 CFU 时，则以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 2.2.4.6菌落总数的报告 菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 7.2.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时

34、，第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。2.2.5大肠菌群测定2.2.5.1范围木标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。2.2.5.2仪器和试剂 冰箱:0-4。 恒温培养箱:36士1。 恒温水浴锅:46士1. 显微镜:10X100X。 均质器或灭菌乳钵。 架盘药物天平:

35、0 g-500 g,精确至0. 5 g. 灭菌吸管1 mL(具0.01 mL刻度),10 mL(具0. 1 mL刻度)。 灭菌锥形瓶:500 mL. 灭苗玻璃珠:直径约5 mm. 灭菌培养皿:直径90 mm. 灭苗试管:16 mm 160 mm. 灭菌刀.剪子、摄子等。2.2.5.3培养基和试剂 乳糖胆盐发酵管。 伊红美蓝琼脂平板。 乳糖发酵管。 EC肉汤。 磷酸盐缓冲液. 0.85%灭菌生理盐水. 革兰氏染色液。2.2.5.4操作步骤2.2.5.4.1检样稀释 以无菌操作将检样25g（mL)放于含有225 ml，灭菌生理盐水或其他稀释液的灭茵玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，

36、经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8 000 r/min10 000 r/min的速度处理1 min，做成1：10的均匀稀释液。 用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注人含有9 ML灭菌内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。 另取1 mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递一次，换用1支1ml灭菌吸管。 根据食品卫生标准要求或对检样污染情汉的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种三管。2.2.5.4.2乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1 mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1 mL以及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发

37、酵管。每一稀释度接种三管，置36士1温箱内，培养24 h士2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为人肠菌群阴性，如有产气省，则按下列程序进行。2.2.5.4.3分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36士1温箱内，培养18 h-24 h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。2.2.5.4.4证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36士1培养箱内培养24 h士2 h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。2.2.5.4.5报告 根据证实为大 肠菌群阳性的管数，查M

38、PN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值. 2.2.5.4.6粪大肠菌群(Faecal coliform ) 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见4.2)转种于EC肉汤管内，置44.5士0. 2水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24 h士2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置培养18 h-24 h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。2.2.5.5结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100 mL（g）粪大肠菌群的MPN值（见表1）。表

39、1 大肠菌群最可能数（MPN）检索表阳性管数MPN 100 mL（g）95%可信限1mL（g）30.1 mL（g）30.01 mL（g）3下限上限00000000012330306090590000011110123306090120513000002222012360901201600000333301239013016019011110000012340701101505102002101111111101237011015019010302303601111222201231101502002403036011113333012316020024019022220000012390140

40、2002601030360370222222220123210280350420401004701500222233330123290360440530333300000123230390640950407015012001300380033332222012343075012001600701403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000240003607101500130002400048000注1：本表采用3个稀释度1mL(g) 、0.1mL(g)和0.0

41、1mL(g)，每稀释度三管。注2：表内所列检样量如改用10mL(g) 、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1mL、0.01mL（g）和0.001mL(g)时，其余可类推。3.试剂和仪器清单3.1试剂清单试剂名称规格数量蔗糖500g2葡萄糖500g2D果糖25g2乳糖500g2淀粉酶250g2胰蛋白酶250g2 琼脂粉100g2牛肉膏500ml2 酵母膏 500ml2 大豆蛋白胨500ml2蛋白胨500ml2胰蛋白胨500ml2胰酪胨500g2植物蛋白胨500g2多胨500g2氢氧化钠500g2品红25g4异戊醇500ml2乙醇500ml2石蕊25g3乙醚50

42、0ml2浓硫酸500ml2甲基红25g4硫酸铜、500g4硫酸钾500g4硼酸250ml4溴甲酚绿25ml2酚酞25ml3盐酸500ml3磷酸500ml23.2玻璃仪器清单仪器名称规格（ml）需要量（个）烧杯100104004锥形瓶250105005漏斗2分液漏斗2镊子4吸管110210510105205 255玻璃棒5灭菌刀或剪子5橡胶管5试管18*18010烧瓶5003酸、碱式滴定管50各3量筒102502100525055002温度计1005酒精灯5表面皿中号5平皿90cm100容量瓶10450510010250550023.3设备清单仪器名称型号数量双数显振荡培养箱BS-1E型3烘箱S

43、X2-2.5-10型5高压蒸汽灭菌锅MLS-3750型3干热灭菌器MOV-112S 90L / AT型5自动菌落计数仪迅数AS1型5微生物采样器JWL-I型5卧式超低温保存箱MDF-293型5冰箱西门子KG23E6710C-4C生化培养箱SPX-250B 型 205L40141C，25C60C生物显微镜XS2-3G401600X2004140143干燥消毒箱GRX202PH计33.4化验室的月试剂消耗量 例 ：以金黄色葡萄球菌检验中的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量计算，每次实验所消耗的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为225ml, 每周做一次检测项目的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为

44、225ml,则每月使用的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为量为900ml，规格为1000ml瓶，折合得使用10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤为0.9瓶.4.化验室的平面布置图及设计说明4.1化验室设置 设计的化验室包括：微生物化验室、办公室、缓冲间、无菌室、天平室、设备室、更衣室。4.2化验室平面图4.3设计说明4.3.1微生物化验室布局微生物化验室是按2：1的比例尺来进行设计的。整个微生物化验室总面积为（长3000cm宽2000cm），化验室操作台坐落在微生物化验室的西南角，操作台（长1234cm宽276cm），操作台两边各设2个水槽，操作台上配有均质器、水浴锅、通风橱（长334cm宽276cm

45、），有毒或刺激性药物的取用在通风橱内操作，操作台旁电源开关一组，电插座2个。整个化验室的所有门都是防火防腐蚀的,门统一规格为141cm,向内推开式，化验室内各功能室采用隔板做墙隔开，以减小占地面积,隔板也为防火防腐蚀的，采用耐火或不易燃材料建筑；电路电线埋入墙体内，以免遭氧化及腐蚀。4.3.1.1操作区4.3.1.1.1整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方,为了减少粉尘流动,防止交叉污染,操作区应与外界分开。操作区地面用专用拖把每天拖1次,每周用消毒剂擦洗一次。每天早上工作前,用紫外线照射30min，或每天工作后,用紫外线照射60min，对整个操作区进行消毒,下午工作结束后用消毒液消毒

46、工作台面,以保证工作环境的安全清洁。4.3.1.1.2光线：细菌培养的细小菌落及血清试验凝聚颗粒的观察,都需要有充足的光线。操作区除设置常规照明灯外，还必须安装操作台灯,以保证试验结果的正确判断。4.3.1.1.3温度和湿度：由于无菌操作的要求,实验过程中经常使用酒精灯，因此,微生物学实验室不能安装吊扇。为了达到实验所需的适宜温度,尤其是满足某些仪器对温度湿度的要求,实验室应安装空调。4.3.1.1.4污染物处理：操作区备有消毒缸,用于处理沾有活菌的玻片等污染物品。检验剩余的标本及使用过的带菌平板、试管均须集中地点安全防止，经消毒灭菌处理后再洗涤或丢弃。4.3.1.2无菌室布局 无菌室面积为（

47、长782cm宽925cm）， 无菌室温度控制在1725；温度波动小于0.5/h；湿度5075%，无菌室完全封闭，进出无菌室至少要经两道门,中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开的窗口，用于传递器具。第一缓冲间面积为(长782cm宽545cm)，第二缓冲间面积为（长782cm宽230cm）,最后才进到无菌操作室,无菌操作室内还设有无菌操作台（长782cm宽275cm）,位于室中间，台面材料为具有耐酸，耐碱以及刚度好的塑料材料，地板为防滑地被砖、洁净、干燥，室内还应设有空调,灭火器。4.3.1.2.1无菌室必须保持整洁，无菌室为10000级（局部100级）清洁区，采用紫外灯配合臭氧灭菌，工作人员进入无菌室应换专用鞋、专用衣。无菌室使用前必须用紫外线消毒30min，操作结束后清洁台面，再用紫外线消