第05章：核酸化学

1、第五章第五章 核酸化学核酸化学核酸概述核酸概述核酸的化学组成核酸的化学组成核酸的分子结构核酸的分子结构核酸的重要性质核酸的重要性质核酸研究技术核酸研究技术第一节第一节 核酸概述核酸概述一、核酸的研究历史一、核酸的研究历史1869 瑞士瑞士 F.Miescher从外科绷带脓细胞的从外科绷带脓细胞的细胞核中分离出一种细胞核中分离出一种有机物，称为有机物，称为核素核素，由于它有很强的酸性，由于它有很强的酸性，后改称为后改称为核酸核酸。肺炎球菌转化实验肺炎球菌转化实验 1944年年 纽约纽约 洛克菲勒研究所洛克菲勒研究所 Avery 加热杀死的加热杀死的S型肺炎球菌中有某种特殊的型肺炎球菌中有某种特殊

2、的生物分子生物分子，可以使可以使R型肺炎球菌转化为型肺炎球菌转化为S型肺炎球菌型肺炎球菌从加热杀死的从加热杀死的S型肺炎球菌将蛋白质、核酸、多糖、型肺炎球菌将蛋白质、核酸、多糖、脂类分离出来，分别加入到脂类分离出来，分别加入到R型肺炎球菌中型肺炎球菌中只有只有核酸核酸可以使可以使R型肺炎球菌转化为型肺炎球菌转化为S型肺炎球菌。型肺炎球菌。结论：结论：DNA是改变遗传性状的转化因子是改变遗传性状的转化因子 1952年，美国冷年，美国冷泉港（泉港（cold spring harbor） Hershey-Chase 噬菌体侵染细菌噬菌体侵染细菌的实验的实验DNA重组技术重组技术 70年代初建立的年代

3、初建立的DNA重组技术是基重组技术是基因工程的核心技术。因工程的核心技术。人类阔步迈进后基因组时代人类阔步迈进后基因组时代1990年年 美国美国 人类基因组计划人类基因组计划（Human Genome Project，HGP） 30 亿美元亿美元 “人体人体地图地图” 10 万基因万基因1999年年 中国加入中国加入HGP2001年年 Nature、Science共同发表共同发表后基因组时代后基因组时代（post-genome era）：研究各：研究各种基因的功能与调节。种基因的功能与调节。二、核酸的种类、分布和功能二、核酸的种类、分布和功能（一）（一）DNA脱氧核糖核酸（脱氧核糖核酸（deo

4、xyribonucleic acid）;功能功能：遗传信息的贮存；：遗传信息的贮存；分布分布： 真核生物：细胞核为主，细胞器为辅；真核生物：细胞核为主，细胞器为辅； 原核生物：类核区、质粒原核生物：类核区、质粒 病毒病毒（二）（二）RNA核糖核酸（核糖核酸（ribonucleic acid）；）；功能功能：多样，主要参与遗传信息的表达；：多样，主要参与遗传信息的表达；主要种类主要种类：rRNA（ribosomal RNA） mRNA（messenger RNA） tRNA（transfer RNA）分布分布：细胞质为主，细胞核为辅；病毒：细胞质为主，细胞核为辅；病毒第二节第二节 核酸的化学组成

5、核酸的化学组成一、核酸的元素组成一、核酸的元素组成基本元素：基本元素：C、H、O、N、P特点：特点：一般不含一般不含S；P含量恒定（含量恒定（DNA 9.9%，RNA 9.5%），），可用可用定磷法定磷法进行核酸的定量分析。进行核酸的定量分析。核酸核酸核苷酸核苷酸磷酸磷酸核苷核苷戊糖戊糖碱基碱基水水解解二、核酸的分子组成二、核酸的分子组成1、戊糖、戊糖核糖核糖（in RNA）2-脱氧核脱氧核糖糖（in DNA）2、碱基、碱基尿嘧啶尿嘧啶 U胸腺嘧啶胸腺嘧啶 T 嘌呤环嘌呤环9NNNN12346587NN654321嘧啶环嘧啶环 DNA RNA胞嘧啶胞嘧啶 C腺嘌呤腺嘌呤 A鸟嘌呤鸟嘌呤 G稀有

6、碱基稀有碱基都是都是基本碱基的化学修饰型基本碱基的化学修饰型嘌呤嘌呤：如黄嘌呤（：如黄嘌呤（X） 、次黄嘌呤（、次黄嘌呤（I）等等嘧啶嘧啶：如二氢尿嘧啶（：如二氢尿嘧啶（D）、）、 5-甲基胞甲基胞嘧啶等嘧啶等NNNNONH2H鸟嘌呤鸟嘌呤NNNNOH次黄嘌呤次黄嘌呤3、核苷与核苷酸、核苷与核苷酸C1嘌呤嘌呤N9、嘧啶、嘧啶N1C5核苷酸命名：核苷酸命名： M-单（单（D-二、二、T-三）；三）；P-磷酸；磷酸；d-脱氧脱氧RNA中：某苷（单、二、三）磷酸中：某苷（单、二、三）磷酸DNA中：脱氧中：脱氧+某苷（单、二、三）磷酸某苷（单、二、三）磷酸稀有核苷酸命名与之类似稀有核苷酸命名与之类似腺

7、腺嘌嘌呤呤 A鸟鸟嘌嘌呤呤 G胞胞嘧嘧啶啶 C尿尿嘧嘧啶啶 U胸胸腺腺嘧嘧啶啶 TRNA AMPGMPCMPUMP未未发发现现DNAdAMPdGMPdCMP未未发发现现dTMP4、重要的核苷酸衍生物、重要的核苷酸衍生物1）ATP（腺腺嘌呤核糖核嘌呤核糖核苷三磷酸苷三磷酸）O-POO-NNNNNH2OHHOHHOHHOCH2O-POO-O-POO-三磷酸腺苷 (ATP)生物体内生物体内能量能量的通用货币的通用货币物物物物NAD+、NADP+、FAD、CoA2）辅酶核苷酸辅酶核苷酸结构中都含有结构中都含有腺苷酸腺苷酸组分组分3）环化核苷酸）环化核苷酸 cAMP、cGMP功能：功能：细胞之间传细胞之

8、间传递信息递信息（第二信使第二信使）环状磷酯键环状磷酯键是是高能高能键键。pH7.4水解能约水解能约为为43.9kJ/mol 4）糖基载体）糖基载体 ADPG、UDPG 第三节第三节 核酸的分子结构核酸的分子结构一、核酸的一级结构一、核酸的一级结构概念概念：各核苷酸残基沿核酸链的排列顺序：各核苷酸残基沿核酸链的排列顺序连接键连接键：3,5-磷酸二酯键磷酸二酯键方向方向：53 -H2O酯键相连酯键相连3,5-磷酸二磷酸二酯键酯键首首尾尾35戊糖戊糖3-OH5-磷磷酸酸PA核苷酸核苷酸PPPPPP A G C T G COH5 pApGpCpTpGpC-OH 35 AGCTGC 353 表示方法表

9、示方法：结构式：结构式、线条式、线条式、字母式字母式二、二、DNA的高级结构的高级结构（一）二级结构（一）二级结构 指的是指的是DNA的双螺旋结构的双螺旋结构。1953年，年，Watson和和Crick 根据根据DNA中碱中碱基的物化数据和酸碱滴定基的物化数据和酸碱滴定、DNA碱基组碱基组成的定量分析成的定量分析、DNA纤维的纤维的X-衍射图谱衍射图谱，提出了提出了DNA双螺旋结构模型。双螺旋结构模型。 Chargaff定则：定则：1）碱基组成有种属的特异性，但没有组织碱基组成有种属的特异性，但没有组织器官的特异性；器官的特异性；2）在）在DNA中，中，A=T，G=C；3）生物）生物DNA碱基

10、组成不会因为年龄、营养、碱基组成不会因为年龄、营养、环境的改变而改变。环境的改变而改变。DNA纤维的纤维的X-衍射图谱衍射图谱不同来源的不同来源的DNA具有相似的图谱具有相似的图谱-均匀均匀的的双双螺旋螺旋构造、构造、0.34nmF. Crick (35y)1951 J. Watson (23y)剑桥大学剑桥大学 Cavendish Lab.DNA分子由分子由两条两条多核多核苷酸苷酸单链单链组成。两条组成。两条链沿着同一根轴平行链沿着同一根轴平行盘绕，形成盘绕，形成右手双螺右手双螺旋旋。螺旋中的两条链。螺旋中的两条链方向相反方向相反，一条链的，一条链的方向为方向为53，而，而另 一 条 链 的

11、 方 向 为另 一 条 链 的 方 向 为35，螺旋上有，螺旋上有一个一个大沟大沟和一个和一个小沟小沟。1、DNA双螺旋结构的要点双螺旋结构的要点碱基碱基位于螺旋位于螺旋内内侧侧，磷酸磷酸和和脱氧脱氧核糖核糖位于螺旋外位于螺旋外侧，形成侧，形成DNA分分子的子的骨架骨架。碱基。碱基平面与螺旋轴平面与螺旋轴垂垂直直，糖环平面与，糖环平面与螺旋轴螺旋轴平行平行。螺旋横截面的螺旋横截面的直直径约径约2 nm，相邻相邻两个碱基平面之两个碱基平面之间的距离为间的距离为0.34 nm，每每10bp形成形成一个螺旋一个螺旋，螺矩螺矩3.4 nm。螺旋内部螺旋内部碱基配碱基配对对存在，存在，AT之间之间形成两

12、个氢键，形成两个氢键，GC之间形成三之间形成三个氢键；个氢键；碱基在一条链上碱基在一条链上的排列不受限制。的排列不受限制。 2条单链，反向平行，右条单链，反向平行，右手螺旋，大沟小沟手螺旋，大沟小沟 骨架（磷酸、戊糖），骨架（磷酸、戊糖），内侧（碱基），垂直，平内侧（碱基），垂直，平行行 直径直径2nm，10bp/螺旋，螺旋，螺距螺距3.4nm 碱基配对存在碱基配对存在 碱基排列不受限制碱基排列不受限制小沟小沟大沟大沟53532、意义意义大大推动了分子生物学和分子遗传学的发展，大大推动了分子生物学和分子遗传学的发展，被誉为被誉为20世纪最伟大的发现之一。世纪最伟大的发现之一。第一次准确地阐述了

13、第一次准确地阐述了DNA作为遗传信息的作为遗传信息的结构基础结构基础和和遗传信息传递的基本方式遗传信息传递的基本方式；最主要的成就是最主要的成就是碱基互补配对碱基互补配对。3、稳定因素稳定因素DNA双螺旋结构在双螺旋结构在生理条件生理条件下很稳定。下很稳定。稳定因素：稳定因素： 氢键氢键 碱基堆积力碱基堆积力（以疏水作用力为主）（以疏水作用力为主） 离子键离子键4、DNA螺旋结构的多样性螺旋结构的多样性类型类型 碱基倾角碱基倾角 碱基间距碱基间距（nm） bp数数/圈圈螺距螺距（nm）螺旋直径螺旋直径（nm） B-DNA Z-DNA 1 19 9 0.34 0.23 0.3810.4 11 1

14、23.54 2.53 4.56 2.37 2.55 1.84A-DNAB-DNA：相对湿度为相对湿度为92%时的时的DNA钠盐钠盐A-DNA：相对湿度为相对湿度为75%以下时的以下时的DNA纤维纤维Z-DNA：左手螺旋左手螺旋B-DNAts-DNA三股螺旋三股螺旋（二）（二）DNA的再压缩及包装的再压缩及包装数据数据：人的体细胞：人的体细胞DNA长长2m，细胞核直径细胞核直径0.05mm。DNA双螺旋分子需要进一步扭曲和折叠以双螺旋分子需要进一步扭曲和折叠以压缩分子空间压缩分子空间。原核原核生物生物DNA、真核、真核生物生物细胞器细胞器DNA进一进一步形成步形成超螺旋超螺旋。真核真核生物生物染

15、色体染色体DNA则进则进一步形成一步形成核小体核小体。负负超螺旋超螺旋反之，则为反之，则为正正超螺旋超螺旋自然界通常为自然界通常为负负超螺旋超螺旋环状环状DNA原核拟核原核拟核DNA的包装的包装真核细胞核真核细胞核DNA的包装的包装真核生物染色质的基本单位是真核生物染色质的基本单位是核小体核小体。核小体由核小体由200bp DNA和组蛋白（和组蛋白（1:1）构成。）构成。组蛋白组蛋白H2A，H2B，H3和和H4各两分子构成各两分子构成组蛋组蛋白八聚体白八聚体，DNA双螺旋分子缠绕其上双螺旋分子缠绕其上1.75圈圈（146bp），形成核小体的核心颗粒。，形成核小体的核心颗粒。核心颗粒之间由核心颗

16、粒之间由DNA和组蛋白和组蛋白H1连接。连接。三、三、RNA的结构的结构戊糖是核糖，碱基中有戊糖是核糖，碱基中有U，而没有而没有T；大多数大多数RNA分子是单链，分子是单链，不遵守碱基种类不遵守碱基种类的数量比例关系的数量比例关系；局部的碱基互补配对（局部的碱基互补配对（A-U、C-G），不能不能配对的部分，形成突环配对的部分，形成突环-发夹发夹/ /茎环结构茎环结构；总结：总结：RNA分子是含短的不完全螺旋区的分子是含短的不完全螺旋区的多核苷酸链。多核苷酸链。 （一）（一）tRNA的结构与功能的结构与功能1、一级结构特点与功能、一级结构特点与功能功能功能：转运活化：转运活化aa到核糖体，与到

17、核糖体，与mRNA配配对。对。每一个每一个aa至少有一个相应的至少有一个相应的tRNA（如如tRNAAla）。）。3端为端为CCA-OH，5端多为端多为G，也有也有C。大小相似，大小相似，7090Nts，平均平均沉降系数沉降系数4S。分子量最小，修饰碱基最多，约占分子量最小，修饰碱基最多，约占RNA总量的总量的10%15%。反密码子环反密码子环 反密码子反密码子运载活化氨基酸运载活化氨基酸四臂四臂稀有碱基稀有碱基三叶草型三叶草型（cloverleaf）2、二级结构、二级结构1 12 23 34 4四环四环氨基酸接受区氨基酸接受区包含有包含有3-端和端和5-端端3-端端是是CCA功能功能：携带活

18、化：携带活化Aa反密码区反密码区环正中的环正中的3个核苷酸残个核苷酸残基基组成组成反密码子反密码子功能功能：通过反密码子：通过反密码子与与mRNA配对，决定配对，决定Aa的正确位置的正确位置二氢尿嘧啶区（二氢尿嘧啶区（D区区）功能功能：氨酰：氨酰-tRNA合合酶的结合位点酶的结合位点T C区区 此环基本含有此环基本含有T C功能功能：结合核糖体结合核糖体可变区可变区（额外环额外环）变化较大，变化较大，是不同是不同tRNA的区别之处的区别之处3、三级结构、三级结构在二级结构的基础在二级结构的基础上，突环上未配对上，突环上未配对的碱基通过整个分的碱基通过整个分子的扭曲而配对子的扭曲而配对已知已知t

19、RNA的三级结的三级结构均为构均为倒倒L形形。功能功能：从：从DNA接受遗传信息，并传递到接受遗传信息，并传递到核糖体，核糖体，作为模板指导蛋白质合成作为模板指导蛋白质合成。不同不同mRNA的碱基组成和分子量差异很的碱基组成和分子量差异很大。大。种类最多，寿命最短，比例最低，约占种类最多，寿命最短，比例最低，约占RNA总量的总量的3%5%。（二）（二）mRNA的结构与功能的结构与功能原核原核细胞细胞mRNA： 多多顺反子顺反子 5端端无无帽子结构帽子结构 3端端无无polyA尾尾巴巴真核真核细胞细胞mRNA： 单单顺反子顺反子 5端端有有帽子结构帽子结构 3端端有有polyA尾尾巴巴 顺反子顺

20、反子：能够合成一条多肽链的核苷酸片段。：能够合成一条多肽链的核苷酸片段。polyA片段片段：指：指20250个多聚腺苷酸。个多聚腺苷酸。“帽子帽子”结构结构：甲基化（甲基化（ 碱基）的鸟苷酸，与碱基）的鸟苷酸，与mRNA的的5端端核苷酸以核苷酸以5, 5-三磷酸相连。三磷酸相连。目前已发现三种类型：目前已发现三种类型：O型、型、I型、型、II型。型。/54321HOHCH2OPOOOPOOPOO-OO19876542N+NNHNCH3OH2NOOHHNHOCH2HH12345/OHO-PO-OO-AAAAAAA_OHI型帽子结构：型帽子结构：G甲基化甲基化OCH3甲基化甲基化H任意碱基任意碱基

21、m7G 5ppp5 NmpNp（三（三）rRNA的结构与功能的结构与功能功能功能：是核糖体的主要组成部分。与：是核糖体的主要组成部分。与蛋白质生物合成相关，可能催化肽键蛋白质生物合成相关，可能催化肽键的形成的形成。比例最大，分子量最大，约占比例最大，分子量最大，约占RNA总总量的量的80%。常见甲基化修饰。常见甲基化修饰。小亚基小亚基大亚基大亚基核糖体的组成核糖体的组成原核生物原核生物真核生物真核生物核糖体核糖体70S80S小亚基小亚基30S40S 1、rRNA16S18S 2、蛋白质、蛋白质21种种33种种大亚基大亚基50S60S 1、rRNA5S、23S5S、5.8S、28S 2、蛋白质、

22、蛋白质34种种49种种mRNArRNAtRNA一、核酸的水解一、核酸的水解1、酸水解：嘌呤糖苷键、酸水解：嘌呤糖苷键嘧啶糖苷键嘧啶糖苷键 磷酸酯磷酸酯键键；2、碱水解：、碱水解：DNA比比RNA耐碱（耐碱（RNA常温碱解）常温碱解）3、酶水解：切开核酸链中的、酶水解：切开核酸链中的磷酸二酯键磷酸二酯键。第四节第四节 核酸的重要性质核酸的重要性质根据作用方式分：外切酶和内切酶根据作用方式分：外切酶和内切酶 外切酶：从核酸链的外切酶：从核酸链的3-端或端或5-端开始，端开始，依次逐个水解核苷酸；依次逐个水解核苷酸； 内切酶：从核酸链中间某个位点切断磷酸二内切酶：从核酸链中间某个位点切断磷酸二酯键。

23、其中酯键。其中限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶能识别并水解能识别并水解核酸中某些特定碱基顺序。核酸中某些特定碱基顺序。二、核酸的酸碱性质二、核酸的酸碱性质核酸具有两性性质；核酸具有两性性质；磷酸（中强酸）磷酸（中强酸）+ 碱基（弱碱）碱基（弱碱）核酸核酸pI比较低比较低DNA的的pI为为44.5，RNA的的pI为为22.5；原因原因：RNA分子中核糖分子中核糖2-OH通过氢键通过氢键促进磷酸基团中质子的解离。促进磷酸基团中质子的解离。三、核酸的紫外吸收特性三、核酸的紫外吸收特性碱基具有碱基具有共轭双键共轭双键体系体系核酸具有独核酸具有独特的紫外吸收光谱特的紫外吸收光谱max = 260nm核酸

24、及其组分定性核酸及其组分定性定量测定的依据定量测定的依据纯纯DNA：OD260 / OD280= 1.8纯纯RNA：OD260 / OD280= 2.0若含有杂蛋白及苯酚，则比值明显降低若含有杂蛋白及苯酚，则比值明显降低 OD260 = 1.0 = 50g/mL双链双链DNA = 40g/mL单链单链DNA/RNA = 33g/mL (d)NTP四、核酸的颜色反应四、核酸的颜色反应DNA（2-脱氧核糖）脱氧核糖）+二苯胺二苯胺在酸性条在酸性条件下形成件下形成蓝紫色蓝紫色化合物；化合物；RNA（核糖）核糖）+苔黑酚苔黑酚在浓盐酸和加热在浓盐酸和加热条件下形成条件下形成绿色绿色化合物。化合物。五、

25、核酸的变性、复性和分子杂交五、核酸的变性、复性和分子杂交（一）变性（一）变性（denaturation）1、定义：某些理化因素、定义：某些理化因素破坏破坏核酸中的核酸中的氢键氢键，使双螺旋结构变成单链使双螺旋结构变成单链 “线团线团”的过程。的过程。2、变性因素：温度升高、变性因素：温度升高、pH改变、甲醛、改变、甲醛、尿素等。尿素等。3、DNA变性的特征：变性的特征：生物活性丧失；生物活性丧失；260nm紫外吸收值紫外吸收值增加（增加（增色效应增色效应）；）；粘度下降，比旋下降，浮力密度增加；粘度下降，比旋下降，浮力密度增加；结构松散，容易被酶解；结构松散，容易被酶解；分子量不变分子量不变4

26、、核酸的热变性和解链温度（、核酸的热变性和解链温度（Tm）DNA的热变性达到的热变性达到50%时的温度时的温度-DNA的解链温度的解链温度（melting temperature，Tm）, 也称熔解温度或也称熔解温度或DNA的熔点。的熔点。Tm是是DNA的特征常数。的特征常数。影响影响Tm值的因素：值的因素：GC的比例：的比例：GC含含量高，量高，Tm值高值高。 （G+C）%=（Tm-69.3）2.44DNA的均一性：的均一性：均一性较好，均一性较好，则则DNA变性温变性温度度范围较小；范围较小；介质的离子强度：介质的离子强度：离子强度越高，离子强度越高，Tm越高越高（二）复性（二）复性（re

27、naturation）1、定义：变性、定义：变性DNA在在适当的条件适当的条件（缓慢降缓慢降温温、一定浓度盐溶液一定浓度盐溶液）下，两条分开的单）下，两条分开的单链可以通过碱基配对重新形成双螺旋结构，链可以通过碱基配对重新形成双螺旋结构，又称为又称为退火（退火（annealing） 。 2、复性、复性DNA的特征的特征减色效应减色效应，比旋上升，粘度上升，浮力密，比旋上升，粘度上升，浮力密度下降；生物学活性恢复度下降；生物学活性恢复3、影响复性的因素、影响复性的因素温度控制：逐步降低比快速降温度控制：逐步降低比快速降低低好好盐离子浓度：浓度大有利于复性盐离子浓度：浓度大有利于复性DNA浓度：越

28、高越有利浓度：越高越有利DNA片段大小：片段越大，越不容易片段大小：片段越大，越不容易（三）分子杂交（三）分子杂交（hybridization）定义定义：不同来源的：不同来源的核酸单链（核酸单链（DNA、RNA）通过碱基配通过碱基配对形成杂合分子的对形成杂合分子的过程。过程。特点特点：灵敏度高、：灵敏度高、专一性强专一性强应用：应用：Southern blot-DNA杂交杂交Northern blot-RNA杂交杂交Northern blot（RNA杂交）杂交）操作基本与操作基本与Southern blot相同。相同。主要区别：主要区别： 电泳前无需酶切；电泳前无需酶切； 转印前无需变性；转印

29、前无需变性； 探针为探针为RNA。第五节第五节 核酸研究技术核酸研究技术一、核酸分离提取的一般原则一、核酸分离提取的一般原则1、DNA的分离提取的分离提取：要求：防止污染，操作温和，杂质除尽要求：防止污染，操作温和，杂质除尽方法：方法：1）少量：盐溶液抽提，苯酚）少量：盐溶液抽提，苯酚-氯仿除蛋白；氯仿除蛋白；2）大量：氯化铯密度梯度离心；）大量：氯化铯密度梯度离心；2、RNA的分离提取的分离提取：注意：注意：1）用）用0.1%焦碳酸二乙酯（焦碳酸二乙酯（DEPC）处理处理12h后后高压灭菌；高压灭菌；2）提取过程中加入）提取过程中加入RNase抑制剂。抑制剂。方法：方法：1）少量：异硫氰酸胍

30、）少量：异硫氰酸胍 + 苯酚苯酚-氯仿；氯仿；2）大量：胍盐）大量：胍盐/氯化铯密度梯度离心氯化铯密度梯度离心 蛋白质蛋白质 DNA RNA 密度：密度： 1.89g/cm3二、核酸电泳二、核酸电泳-琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳以以琼脂糖琼脂糖作支持介质的水平电泳。作支持介质的水平电泳。制备容易，分离范围广，尤其适用于制备容易，分离范围广，尤其适用于分分子量较大子量较大样品（大分子核酸、病毒等）样品（大分子核酸、病毒等）的分离；但分辨率的分离；但分辨率（100bp）比比PAGE（1bp）低低。样品易回收，可用于制备。样品易回收，可用于制备。影响迁移率的因素影响迁移率的因素电压：成正比；电压：成正比；凝胶浓度：成反比；凝胶浓度：成反比；核酸分子大小：成反比；核酸分子大小：成反比；质粒质粒DNA构象：超螺旋构象：超螺旋 线性线性 闭环闭环 1985年，美国的年，美国的Mullis发明发明了聚合酶链式反应了聚合酶链式反应（pol