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文档简介

1、实验二土壤中好气性细菌、真菌土壤中好气性细菌、真菌及放线菌的分离与计数及放线菌的分离与计数 一、目的与要求：1、了解微生物的分离与纯化原理。2、学习无菌操作技术。3、了解活菌计数法要点。 二、实验原理 微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 细菌数量大于放线菌，真菌量最少 三、操作步骤 1 样品稀释液的制备 准确称取待测土壤10g，放入装有90mL无菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手摇匀，使微生物细胞分散，静置约20-30s，

2、即10-1稀释液；再用移液枪吸取10-1稀释液1mL装入有9mL无菌水的试管中，依次类推，连续稀释，制成10-4 、10-5、 10-6 、10-7等一系列稀释度菌液，供平板接种用。10g 2 平板接种培养 （1）稀释倒平板法（pour plate method） 无菌吸管按无菌操作要求吸取不同稀释液1mL，与已熔化并冷却至50左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过的培养皿中。 （2）涂布平板法（spread plate method） 先将已熔化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃棒将菌液均匀分散至整个平板表面。（3）平板

3、划线分离法（streak plate method）用接种环沾取少许待分离的材料，在曲菌平板表面进行平行或者扇形连续划线分离。 （1）稀释倒平板法 （2）涂抹平板计数法 细菌培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基真菌培养基：马（Martin）孟加拉红-链霉素培养基1234（3）划线法无菌操作三要点无菌操作三要点 静静 使无菌操作室空气流动尽可降低 关好门窗关好门窗, 避避免空免空气流动过快气流动过快; 不宜不宜四四处走动处走动; 操作者不讲话操作者不讲话,他人也不要在他人也不要在操操作处讲话作处讲话. 快 操作熟炼, 动作快速, 使接种器具暴露在 空气中的时间缩短. 轻轻 打开或盖上瓶口的动作要轻; 接种操作动作要轻.稀释平板计数法稀释平板计数法 将实验

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