液相色谱分析概论学习教案

1、会计学1液相色谱分析液相色谱分析(s p fn x)概论概论第一页，共90页。第1页/共90页第二页，共90页。第2页/共90页第三页，共90页。第3页/共90页第四页，共90页。第4页/共90页第五页，共90页。第5页/共90页第六页，共90页。第6页/共90页第七页，共90页。正相分配(fnpi)色谱反相分配(fnpi)色谱第7页/共90页第八页，共90页。第8页/共90页第九页，共90页。第9页/共90页第十页，共90页。第10页/共90页第十一页，共90页。第11页/共90页第十二页，共90页。第12页/共90页第十三页，共90页。第13页/共90页第十四页，共90页。第14页/共90

2、页第十五页，共90页。第15页/共90页第十六页，共90页。RtRR0ttt第16页/共90页第十七页，共90页。第17页/共90页第十八页，共90页。2121RRRR12122()()/2ttttRW WW W（一）分离度（resolution,R)1.分离度定义与含义第18页/共90页第十九页，共90页。221() ()41knRkabca柱效项b-柱选择项c柱容量项第19页/共90页第二十页，共90页。第20页/共90页第二十一页，共90页。smmkm第21页/共90页第二十二页，共90页。第22页/共90页第二十三页，共90页。第23页/共90页第二十四页，共90页。第24页/共90页

3、第二十五页，共90页。5mmDD10B/u又因为液相色谱的比气相色谱的约小倍，所以，纵向扩散项可以忽略不计。于是：2mBD因为mDT而msmsHAC uC uC umsmseHHHHH或第25页/共90页第二十六页，共90页。222222(1)230(1)(1)(1)ppfpmmsdddkkHdWuuquDkDkD2222ppfpmsmsmmsdddHdCuCuCuDDD简易表达式：emsmsHHHH涡流扩散项流动相传质阻抗项静态流动相传质阻抗项固定相传质阻抗项第26页/共90页第二十七页，共90页。()0.01 10mW C 与柱内径、形状、填料的性质有关，其值在之间，是一个无因次的常数。-

4、固定相的空隙度与固定相颗粒、孔道弯曲程度有关的系数第27页/共90页第二十八页，共90页。第28页/共90页第二十九页，共90页。第29页/共90页第三十页，共90页。2(/)mmpmCCdD流动相的传质阻抗系数：2(/)msmpmCCdD静止流动相传质阻抗系数：pmmsmdDCC减小 ，增大，则降低及以提高柱效。第30页/共90页第三十一页，共90页。第31页/共90页第三十二页，共90页。2222总柱内柱外其他2HL溶质分子通过色谱柱，所产生的离散程度与柱长成正比：第32页/共90页第三十三页，共90页。22222()/edmsmsHL速率理论方程式中的板高（柱内展宽的板高）：2. 柱外峰

5、展宽(zhn kun)（柱外效应，外）222222柱外进样器连接管接头检测池其他第33页/共90页第三十四页，共90页。第34页/共90页第三十五页，共90页。第35页/共90页第三十六页，共90页。3. 固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求离柱的制备是一项技术要求(yoqi)非常高的工作，一非常高的工作，一般很少自行制备。般很少自行制备。第36页/共90页第三十七页，共90页。第37页/共90

6、页第三十八页，共90页。第38页/共90页第三十九页，共90页。第39页/共90页第四十页，共90页。第40页/共90页第四十一页，共90页。第41页/共90页第四十二页，共90页。第42页/共90页第四十三页，共90页。第43页/共90页第四十四页，共90页。第44页/共90页第四十五页，共90页。第45页/共90页第四十六页，共90页。第46页/共90页第四十七页，共90页。使用手动进样器是要注意以下事项：进样针：应选用液相专用的平头针。进样量：要么小于定量环体积(tj)的一半，要么满刻度进样（需要推进35倍定量环体积(tj)的样品）进样动作：在Load状态下动作要平缓，以防样品冲出。进样

7、后先切换到Inject状态再拔针，以防倒吸或产生气泡。第47页/共90页第四十八页，共90页。v 清洗进样口：在Inject状态清洗进样口。v 废液口：废液管的出口应于进样口水平，以防样品倒流泄露或产生虹吸。v 自动进样器： 是由计算机自动控制定量阀，按预先编制的操作程序工作。取样、进样、复位、样品管路(un l)清洗和样品盘的转动，全按程序自动进行。第48页/共90页第四十九页，共90页。第49页/共90页第五十页，共90页。第50页/共90页第五十一页，共90页。第51页/共90页第五十二页，共90页。第52页/共90页第五十三页，共90页。第53页/共90页第五十四页，共90页。可变波长

8、(bchng)检测器示意图第54页/共90页第五十五页，共90页。第55页/共90页第五十六页，共90页。第56页/共90页第五十七页，共90页。第57页/共90页第五十八页，共90页。第58页/共90页第五十九页，共90页。第59页/共90页第六十页，共90页。第60页/共90页第六十一页，共90页。第61页/共90页第六十二页，共90页。第62页/共90页第六十三页，共90页。第63页/共90页第六十四页，共90页。第64页/共90页第六十五页，共90页。第65页/共90页第六十六页，共90页。第66页/共90页第六十七页，共90页。第67页/共90页第六十八页，共90页。第68页/共90

9、页第六十九页，共90页。第69页/共90页第七十页，共90页。第70页/共90页第七十一页，共90页。第71页/共90页第七十二页，共90页。4. 选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题 由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。（

10、2）溶剂与检测器匹配）溶剂与检测器匹配(ppi)。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长 要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于第72页/共90页第七十三页，共90页。第73页/共90页第七十四页，共90页。第74页/共90页第七十五页，共90页。第75页/共90页第七十六页，共90页。第76页/共90页第七十七页，共90页。第77页/共90页第七十八页，共90页。第78页/共90页第七十九页，共90页。2、利用紫外或荧光光谱定性 停泵做全波长光谱扫描3、收集柱后留出组分，再用

11、其他化学或物理方法(fngf)定性如：红外光谱、质谱、核磁共振等第79页/共90页第八十页，共90页。4.2定量分析1. 外标法(标准曲线法)用待测组分的纯样制标准曲线优点：快速简单, 只要待测组分出峰且完全分离即可缺点(qudin)：绝对法, 进样量,操作条件要不变 第80页/共90页第八十一页，共90页。2. 内标法(外加标准法)不能全出峰或只需测某几个组分时采用方法:准确称取样品,加入(jir)一定量内标物,根据重量及峰面积求出某组分的含量Ws 内标物重量 As 内标物峰面积 Ai 被测物峰面积 fs 内标物重量校正因子 fi 被测物重量校正因子 W 样品重 一般选内标物为基准，fs=1WfAWfAWWWsssiii%100%ssiiSifAfAWW第81页/共90页第八十二页，共90页。步骤:a.选内标物 b.测fw(i/s) (fi) c.称未知样W. 内标物Ws,测Ai,As内标法的关键是选择合适的内标物，它必须符合下列条件：(1) 是样品中原来不存在的纯物质，性质与被测物相近，能完全溶解于样品并且不与样品发生化学反应。（2）内标物的峰应尽量靠近被测组分的峰，或位于几个(j )被测物之峰的中间并与这些色谱峰完全分离。（3）内标物的质量应与被测物质的质量接近，能保持色谱峰大小差不多。第82页/共90页第八十三页，共90页。3.加入已知物增加峰高法 在