氧化应激与消化道功能的关系学习教案

1、会计学1氧化应激与消化道功能氧化应激与消化道功能(gngnng)的关的关系系第一页，共40页。第1页/共40页第二页，共40页。氧化(ynghu)应激肠炎(chngyn)肠蠕动紊乱(wnlun)急性炎症心血管疾病代谢疾病神经紊乱第2页/共40页第三页，共40页。第3页/共40页第四页，共40页。NO自由基自由基辐射高氧高温应激应激第4页/共40页第五页，共40页。第5页/共40页第六页，共40页。第6页/共40页第七页，共40页。第7页/共40页第八页，共40页。机械屏障机械屏障 机械屏障主要由紧密连接的机械屏障主要由紧密连接的粘膜粘膜(zhn m)上皮细胞以及上皮细胞以及鞘液凝胶层组成。鞘液

2、凝胶层组成。化学屏障化学屏障 主要是胃酸主要是胃酸(wi sun)、胆汁酸、粘液、溶菌酶、乳铁蛋白和各、胆汁酸、粘液、溶菌酶、乳铁蛋白和各种消化酶等对阻止致病因子入侵，维护肠粘膜屏障具有重要作用。种消化酶等对阻止致病因子入侵，维护肠粘膜屏障具有重要作用。第8页/共40页第九页，共40页。生物屏障生物屏障 在生理状态下机体的肠在生理状态下机体的肠道存在大量共生细菌，它们道存在大量共生细菌，它们通过分泌细菌毒素、产生短通过分泌细菌毒素、产生短链脂肪酸、促进肠蠕动、占链脂肪酸、促进肠蠕动、占据致病菌粘附据致病菌粘附(zhn f)位点位点以及争夺营养素等多个环节以及争夺营养素等多个环节防止有害细菌的侵

3、入，维护防止有害细菌的侵入，维护动物体健康。而保持菌群间动物体健康。而保持菌群间合适的数量与比例，对于维合适的数量与比例，对于维护肠粘膜屏障的完整性至关护肠粘膜屏障的完整性至关重要。重要。 免疫屏障免疫屏障 肠道相关淋巴组织肠道相关淋巴组织包括肠集合淋巴小节，包括肠集合淋巴小节，固有膜淋巴细胞和上皮固有膜淋巴细胞和上皮内淋巴细胞，是机体内内淋巴细胞，是机体内最大的免疫器官，在肠最大的免疫器官，在肠道执行局部免疫功能，道执行局部免疫功能，并与其它并与其它(qt)因素协因素协同作用，维护肠粘膜屏同作用，维护肠粘膜屏障功能。障功能。第9页/共40页第十页，共40页。第10页/共40页第十一页，共40

4、页。氧化应激对消化道功能(gngnng)的影响第11页/共40页第十二页，共40页。第12页/共40页第十三页，共40页。n仔猪断奶后，摄入的豆仔猪断奶后，摄入的豆类蛋白种胰蛋白酶抑制因子会类蛋白种胰蛋白酶抑制因子会引起胰腺炎症，导致与消化功引起胰腺炎症，导致与消化功能紊乱。能紊乱。第13页/共40页第十四页，共40页。马可，马可，20062006静脉注射静脉注射(jn mi zh sh)LPS后肠道病理变化后肠道病理变化第14页/共40页第十五页，共40页。对照组 诱导(yudo)组 修复组对照组、LPS诱导(yudo)组和复合抗氧化剂修复组空肠光镜照片(4)赵珂立，待发表赵珂立，待发表(f

5、bio)(fbio)第15页/共40页第十六页，共40页。n胃癌胃癌n结肠疾结肠疾病病自由基与胃肠道疾病(jbng)氧自由基学说认为：幽门螺旋杆菌氧自由基学说认为：幽门螺旋杆菌(Hp)(Hp)致慢性胃炎的主致慢性胃炎的主要因素之一，而其诱发机制可能要因素之一，而其诱发机制可能(knng)(knng)同氧自由基同氧自由基有关。有关。与自由基有关，其中主要与与自由基有关，其中主要与NONO及及O O2 2- -有关，氧自由基能直接有关，氧自由基能直接作用于细胞的大分子，同时可作为细胞内信息转导信号引作用于细胞的大分子，同时可作为细胞内信息转导信号引起细胞浆内核转录因子起细胞浆内核转录因子( (如如

6、NF-kB)NF-kB)激活，引起核内有关激活，引起核内有关的基因转录增加。是很多急性、慢性炎症及免疫失调的基因转录增加。是很多急性、慢性炎症及免疫失调等疾病发生发展的分子生物学基础。等疾病发生发展的分子生物学基础。人和动物研究中发现，病变肠黏膜中人和动物研究中发现，病变肠黏膜中ROSROS产生明产生明显增多，显增多，ROSROS同疾病活动性相关。同疾病活动性相关。在临床试验中发现给予自由基清除剂可以预防在临床试验中发现给予自由基清除剂可以预防难治性溃疡复发，促进其愈合。难治性溃疡复发，促进其愈合。 流行病学调查揭示，抗氧化剂如维生素流行病学调查揭示，抗氧化剂如维生素C C和维和维生素生素E

7、E的缺乏与胃癌发生有关。补充维生素的缺乏与胃癌发生有关。补充维生素C C可减少胃可减少胃粘膜中的粘膜中的DNADNA损害。损害。第16页/共40页第十七页，共40页。大多数的自由基。大多数的自由基。缺点：自旋波谱仪价格昂贵缺点：自旋波谱仪价格昂贵,操作复杂操作复杂, 在普通实验室中难以在普通实验室中难以(nny)推广。推广。第17页/共40页第十八页，共40页。第18页/共40页第十九页，共40页。第19页/共40页第二十页，共40页。第20页/共40页第二十一页，共40页。蛋白质氧化损伤的检测蛋白质氧化损伤的检测 其传统其传统(chuntng)的检测技术是使用二硝基苯肼的比色法的检测技术是使

8、用二硝基苯肼的比色法,使用分光光度法或者酶联免疫吸附法测定使用分光光度法或者酶联免疫吸附法测定2, 4-二硝基苯肼与蛋白质羰基反应生成的腙二硝基苯肼与蛋白质羰基反应生成的腙,来衡量蛋白质的损伤情况。来衡量蛋白质的损伤情况。第21页/共40页第二十二页，共40页。第22页/共40页第二十三页，共40页。过氧化氢酶的测定 过氧化氢酶是一种酶类清除剂，其机制(jzh)实质上是过氧化氢的歧化,必须有两个过氢化氢先后与过氧化氢酶相遇且碰撞在活性中心上,才能发生反应。过氧化氢浓度越高,分解速度越快。一般也采用紫外分光光度法对其进行检测。第23页/共40页第二十四页，共40页。氧化应激导致细胞凋亡氧化应激导

9、致细胞凋亡(dio wn)的检测方法的检测方法氧化应激导致细胞凋亡氧化应激导致细胞凋亡(dio wn)的形态学检测主要通过光镜伊红染色或吉姆萨染色和电镜对凋亡的形态学检测主要通过光镜伊红染色或吉姆萨染色和电镜对凋亡(dio wn)的细胞进行形态观察的细胞进行形态观察,可观察到染色质浓缩可观察到染色质浓缩,核膜起皱破裂核膜起皱破裂,凋亡凋亡(dio wn)小体形成等小体形成等,以判别细胞凋亡以判别细胞凋亡(dio wn)。第24页/共40页第二十五页，共40页。细胞进行双染色,即可区别(qbi)凋亡细胞与坏死细胞。第25页/共40页第二十六页，共40页。第26页/共40页第二十七页，共40页。陈

10、群，2007应激应激24h24h细胞细胞(xbo)DNA(xbo)DNA琼脂糖琼脂糖电泳图电泳图第27页/共40页第二十八页，共40页。氧化损伤致细胞凋亡相关基因的检测氧化损伤致细胞凋亡相关基因的检测Bcl-2基因的检测：基因的检测： Bcl-2的过度表达能阻抑多种凋亡相关基因的表达的过度表达能阻抑多种凋亡相关基因的表达,如如caspase23 的表达。测定方法主要有印迹杂交和实时荧光定量法。的表达。测定方法主要有印迹杂交和实时荧光定量法。p53基因的检测；是细胞生长周期中负调节基因的检测；是细胞生长周期中负调节(tioji)因子，氧化应激导致细胞因子，氧化应激导致细胞DNA损伤的过程必须有损

11、伤的过程必须有p53参与。常采用免疫组织化学、原位杂交等方法来检测。参与。常采用免疫组织化学、原位杂交等方法来检测。核因子核因子kB基因的检测（基因的检测（NF-kB）：在正常情况下是复合物，氧化应激状态下）：在正常情况下是复合物，氧化应激状态下,NF-kB从复合体中解离并向核内移动从复合体中解离并向核内移动,与位于核内的基因序列上特异性调控区结合与位于核内的基因序列上特异性调控区结合,从而激活受调控的基因表达。免疫化学染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、原位杂交法。从而激活受调控的基因表达。免疫化学染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、原位杂交法。第28页/共40页第二十九页，共40页。抗氧化物质主要的作

12、用机制：抗氧化物质主要的作用机制：通过提供通过提供(tgng)活性基团，作为供氢体与自由基反应，使之形成相应的离子或分子，灭活自由基，终止自由基的链式反应；活性基团，作为供氢体与自由基反应，使之形成相应的离子或分子，灭活自由基，终止自由基的链式反应；提高抗氧化酶活性，降低膜的流动性，从而降低自由基反应，达到抑制脂质过氧化作用。提高抗氧化酶活性，降低膜的流动性，从而降低自由基反应，达到抑制脂质过氧化作用。 第29页/共40页第三十页，共40页。第30页/共40页第三十一页，共40页。CATGSH-Px第31页/共40页第三十二页，共40页。不同不同(b tn)抗氧化剂对应激小鼠增重的影响抗氧化剂

13、对应激小鼠增重的影响第32页/共40页第三十三页，共40页。不同不同(b tn)抗氧化剂对力竭游泳后小鼠血清中抗氧化剂对力竭游泳后小鼠血清中SOD活性的影响活性的影响第33页/共40页第三十四页，共40页。不同抗氧化剂对力竭游泳后小鼠血清不同抗氧化剂对力竭游泳后小鼠血清(xuqng)中中MDA含量的影响含量的影响第34页/共40页第三十五页，共40页。不同不同(b tn)抗氧化剂对力竭游泳后小鼠肝脏中抗氧化剂对力竭游泳后小鼠肝脏中CAT活性的影响活性的影响韩雪，韩雪，2010第35页/共40页第三十六页，共40页。项目项目对照组对照组诱导组诱导组修复组修复组第第1日体重日体重雌雌200.001

14、0.10200.501.64203.503.94雄雄208.335.92210.674.46205.674.27第第7日体重日体重雌雌238.509.05232.835.71226.674.41雄雄278.5014.36273.6710.56262.005.90第第15日体重日体重雌雌255.338.48256.6720.27259.0010.66雄雄332.5014.67305.674.46294.8314.20第第22天体重天体重雌雌260.006.87 252.005.33 255.6714.62 雄雄355.0013.63a321.006.95b340.8314.16b日增重日增重 (

15、g)雌雌2.480.232.150.032.350.70雄雄6.150.14b5.480.18a5.700.44a复合复合(fh)(fh)抗氧化剂对抗氧化剂对LPSLPS损伤大鼠体重的影响损伤大鼠体重的影响赵珂立，赵珂立，20102010未发表未发表(fbio)(fbio)第36页/共40页第三十七页，共40页。项目项目对照组对照组诱导组诱导组修复组修复组肝脏指数肝脏指数(mg/g)34.4024.38a30.5710.11b40.1910.89bMDA(nmol/ml)4.510.29a5.070.10b2.570.10cSOD(U/ml)80.712.93a67.054.60b93.911.64aGSH-Px( (酶活力单酶活力单位位) )449.906.31a393