基因应用说明-

1、医学实验室质量和能力认可准则医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明在基因扩增检验领域的应用说明解解 释释ISO15189 准则（准则（CL02）CNAS-GL26医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南的指南临床基因扩增检验实验室管理暂行办法临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发（卫医发200210号）号）医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发2010194号）号）临床基因扩增检验实验室基本设置标准临床基因扩增检验实验室基本设置标准临床基因扩增检验实验室

2、工作导则临床基因扩增检验实验室工作导则 医疗机构临床实验室管理办法医疗机构临床实验室管理办法（卫医发（卫医发 200673号）号）参考依据参考依据概概 述述 基因体外扩增检验通常称为基因体外扩增检验通常称为PCR检验；检验； 2002-2009年年:该检验项目是目前我国临床检验项目该检验项目是目前我国临床检验项目中唯一一项需要通过卫生部或省级临床检验中心中唯一一项需要通过卫生部或省级临床检验中心现场技术验收合格方可开展临床检验的技术准入现场技术验收合格方可开展临床检验的技术准入项目。项目。 2009年年5月月1日后：卫生部关于印发日后：卫生部关于印发医疗技术临医疗技术临床应用管理办法床应用管理

3、办法的通知（卫医政发的通知（卫医政发200918号）和医疗机构临床基因扩增检验实验室管理号）和医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发办法（卫办医政发2010194号）。号）。医疗技术分为三类：医疗技术分为三类：第一类：第一类：医疗技术是指安全性、有效性确切，医疗机构通医疗技术是指安全性、有效性确切，医疗机构通过常规管理在临床应用中能确保其安全性、有效性的技术。过常规管理在临床应用中能确保其安全性、有效性的技术。第二类：第二类：医疗技术是指安全性、有效性确切，涉及一定伦医疗技术是指安全性、有效性确切，涉及一定伦理问题或者风险较高，卫生行政部门应当加以控制管理的理问题或者风险较高，卫生

4、行政部门应当加以控制管理的医疗技术。医疗技术。（如（如PCR）第三类：第三类：医疗技术是指具有下列情形之一，需要卫生行政医疗技术是指具有下列情形之一，需要卫生行政部门加以严格控制管理的医疗技术：（部门加以严格控制管理的医疗技术：（1）涉及重大伦理）涉及重大伦理问题；（问题；（2）高风险；（）高风险；（3）安全性、有效性尚需经规范的）安全性、有效性尚需经规范的临床试验研究进一步验证；（临床试验研究进一步验证；（4）需要使用稀缺资源；（）需要使用稀缺资源；（5）卫生部规定的其他需要特殊管理的医疗技术。卫生部规定的其他需要特殊管理的医疗技术。（共（共19项，项，第第8项项基因芯片诊断技术，现划为第二

5、类基因芯片诊断技术，现划为第二类）卫生部负责第三类医疗技术的临床应用管理工作。卫生部负责第三类医疗技术的临床应用管理工作。第三类医疗技术目录由卫生部制定公布，并根据临床第三类医疗技术目录由卫生部制定公布，并根据临床应用实际情况，予以调整。应用实际情况，予以调整。省级卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用管理省级卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用管理工作。工作。第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门根据本辖区第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门根据本辖区情况制定并公布，报卫生部备案。情况制定并公布，报卫生部备案。医疗技术临床应用医疗技术临床应用 能力审核能力审核属于第三类的医疗技术首次应用于临

6、床前，必须经过卫生部组属于第三类的医疗技术首次应用于临床前，必须经过卫生部组织的安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查。织的安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查。第二类医疗技术和第三类医疗技术临床应用前实行第三方技术第二类医疗技术和第三类医疗技术临床应用前实行第三方技术审核制度。审核制度。对医务人员开展第一类医疗技术临床应用的能力技术审核，由对医务人员开展第一类医疗技术临床应用的能力技术审核，由医疗机构自行组织实施，也可以由省级卫生行政部门规定。医疗机构自行组织实施，也可以由省级卫生行政部门规定。卫生部指定或者组建的机构、组织（以下简称技术审核机构）卫生部指定或者组建的机构、组织（以

7、下简称技术审核机构）负责第三类医疗技术临床应用能力技术审核工作（负责第三类医疗技术临床应用能力技术审核工作（1.中国医学科中国医学科学院、学院、2.中华医学会、中华医学会、3.中国医院协会、中国医院协会、4.中华医师协会、中华医师协会、5.中中华口腔医学会）。华口腔医学会）。省级卫生行政部门指定或者组建的技术审核机构负责第二类医省级卫生行政部门指定或者组建的技术审核机构负责第二类医疗技术临床应用能力技术审核工作。疗技术临床应用能力技术审核工作。卫生部可以委托省级卫生行政部门组织对指定的第三类医疗技卫生部可以委托省级卫生行政部门组织对指定的第三类医疗技术进行临床应用能力技术审核工作。术进行临床应

8、用能力技术审核工作。概概 述述对实验室的要求：对实验室的要求： 人员上岗证书人员上岗证书 实验室的布局实验室的布局 仪器设备要求仪器设备要求 质量手册、管理程序文件、操作程序文质量手册、管理程序文件、操作程序文件、作业指导书、记录表格等件、作业指导书、记录表格等实验室验收合格证书实验室验收合格证书（审核合格）（审核合格）+登记登记关于制定关于制定CNAS-CL02医学实验室质量和能力认可准则医学实验室质量和能力认可准则在九个在九个专业领域应用说明网上征求意见的通知专业领域应用说明网上征求意见的通知 发布时间：发布时间：2011-11-07 13:33:35 为了提高认可质量，明确为了提高认可质

9、量，明确CNAS认可要求，中国合格评定国家认认可要求，中国合格评定国家认可委员会（可委员会（CNAS）组织制定了）组织制定了CNAS-CL02医学实验室质量和能医学实验室质量和能力认可准则力认可准则在在临床血液学、临床体液学、临床化学、临床免临床血液学、临床体液学、临床化学、临床免疫学、临床微生物学、输血医学、临床病理学、疫学、临床微生物学、输血医学、临床病理学、临床基因扩增临床基因扩增、实验室信息系统实验室信息系统等等9个专业领域的应用说明，当前已完成征求意个专业领域的应用说明，当前已完成征求意见稿，在此向社会各方征求意见。见稿，在此向社会各方征求意见。2012年年9月月13日发布，日发布，

10、2013年年4月月1日实施。日实施。管理要求 4 管理要求管理要求 4.1 组织和管理组织和管理 4.2 质量管理体系质量管理体系 4.3 文件控制文件控制 4.4 合同的评审合同的评审 4.5 委托实验室的检验委托实验室的检验 4.6 外部服务和供应外部服务和供应 4.7 咨询服务咨询服务管理要求 4.8 投诉的管理投诉的管理 4.9 不符合的识别和控制不符合的识别和控制 4.10 纠正措施纠正措施 4.11 预防措施预防措施 4.12 持续改进持续改进 4.13 质量和技术记录质量和技术记录 4.14 内部审核内部审核 4.15 管理评审管理评审技术要求 5 技术要求技术要求 5.1 人员

11、人员 5.2 设施和环境条件设施和环境条件 5.3 实验室的设备实验室的设备 5.4 检验前程序检验前程序 5.5 检验程序检验程序 5.6 检验程序的质量保证检验程序的质量保证 5.7 检验后程序检验后程序 5.8 结果报告结果报告1 1 范围范围本文件规定了本文件规定了CNAS对医学实验室基因扩增检验领域的认可要对医学实验室基因扩增检验领域的认可要求，包括求，包括病原体核酸病原体核酸和和人体基因人体基因等领域涉及的基因扩增检验。等领域涉及的基因扩增检验。2 2 规范性引用文件规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的

12、引用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。 GB/T 20468-2006 临床实验室定量测定室内质量控制指南临床实验室定量测定室内质量控制指南 CNAS-RL02 能力验证规则能力验证规则 CNSA-CL31 内部校准要求内部校准要求卫办医政发卫办医政发2010194号医疗机构临床基因扩增管理办法号医疗机构临床基因扩增管理办法3 3 术语和定义术语和定义 4 4 管理要求管理要求 4.1 4.1 组织和管理组织和管理 4.1.1实验室为独立法

13、人单位的，应有医疗机构实验室为独立法人单位的，应有医疗机构执业许可；实验室为非独立法人单位的，其所执业许可；实验室为非独立法人单位的，其所属医疗机构执业证书的诊疗科目中应有医学实属医疗机构执业证书的诊疗科目中应有医学实验室，验室，自获准执业之日起，开展医学检验工作自获准执业之日起，开展医学检验工作至少至少2年。年。 从事基于组织从事基于组织/细胞形态学基础项目检测的医细胞形态学基础项目检测的医学实验室，应具有病理学诊断资质。学实验室，应具有病理学诊断资质。 4.1.5 h) 应至少有应至少有1名具有副高以上专业技术职名具有副高以上专业技术职务任职资格，从事医学检验工作至少务任职资格，从事医学检

14、验工作至少5年以上年以上的人员负责技术管理工作。的人员负责技术管理工作。4.2 4.2 质量管理体系质量管理体系 4.3 4.3 文件控制文件控制 4.4 4.4 合同的评审合同的评审 4.5 4.5 委托实验室的检验委托实验室的检验 4.6 4.6 外部服务和供应外部服务和供应4.6.2 试剂耗材的质检记录至少应包括：试剂耗材的质检记录至少应包括：外观检查：肉眼可看出的，如包装完整性；外观检查：肉眼可看出的，如包装完整性；性能检测：通过实验才能判断的，如耗材的抑制性能检测：通过实验才能判断的，如耗材的抑制物、试剂批间的差异（应包括低浓度和高浓度，物、试剂批间的差异（应包括低浓度和高浓度，如安

15、排过去检测过的临界阳性的患者标本加上病如安排过去检测过的临界阳性的患者标本加上病理定性检查的部分）。理定性检查的部分）。对于试剂性能质检记录，应能反映该批试剂的核对于试剂性能质检记录，应能反映该批试剂的核酸酸提取效率提取效率和核酸和核酸扩增效率扩增效率。试剂质检试剂质检 强调采用强调采用患者患者标本进行试剂质检的意义：标本进行试剂质检的意义： PCR实验时两个关键步骤实验时两个关键步骤： （1）从标本中提取核酸；从标本中提取核酸； （2）提取核酸的扩增。）提取核酸的扩增。 商品化的质控品和标准曲线的结果良好，商品化的质控品和标准曲线的结果良好，并非能反映提取试剂的质量。并非能反映提取试剂的质量

16、。推荐的试剂质检方案推荐的试剂质检方案 标本选择：标本选择：一般选择已用老试剂测定过一般选择已用老试剂测定过的患者标本的患者标本5份，其中一份阴性，其余份，其中一份阴性，其余4份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓度差。等浓度差。 结果判断：结果判断：用新试剂重复测定上述用新试剂重复测定上述5份标份标本，计算偏差本，计算偏差(%)；判断标准；判断标准(根据实验根据实验室室内质控室室内质控RCV和能力验证允许总误差和能力验证允许总误差TEa)；关注临界值和高值！；关注临界值和高值！4.7 4.7 咨询服务咨询服务4.8 4.8 投诉的处理投诉的处理4.9 4.9

17、 不符合的识别和控制不符合的识别和控制4.10 4.10 纠正措施纠正措施4.11 4.11 预防措施预防措施4.12 4.12 持续改进持续改进4.13 4.13 质量和技术记录质量和技术记录4.14 4.14 内部审核内部审核4.15 4.15 管理评审管理评审 5 5 技术要求技术要求 5.1 人员人员5.1.2 基因扩增实验室（以下简称基因扩增实验室（以下简称“实验室实验室”）操作人员应经）操作人员应经过有资质的培训机构培训合格取得上岗证后方可上岗。过有资质的培训机构培训合格取得上岗证后方可上岗。5.1.4 实验室负责人至少应具有中级职称，医学相关专业背景实验室负责人至少应具有中级职称

18、，医学相关专业背景，基因扩增工作至少，基因扩增工作至少3年。年。认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职务任职资认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职务任职资格，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少格，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3年以上。年以上。5.1.11 应制定员工能力评审的内容和方法，每年评审员工的工应制定员工能力评审的内容和方法，每年评审员工的工作能力；对新进员工在最初作能力；对新进员工在最初2个月内应至少进行个月内应至少进行2次能力评审次能力评审（间隔为（间隔为30天），保存评审记录天），保存评审记录。当职责变更时，或离岗。当职责变更时，或离岗6个个月后再

19、上岗时，应有政策规定对员工进行再培训和再评审。月后再上岗时，应有政策规定对员工进行再培训和再评审。没有通过评审的人员应经再培训和再评审，合格后才可继续没有通过评审的人员应经再培训和再评审，合格后才可继续上岗，并记录。上岗，并记录。5.1.13应提供工作人员对患者隐私及结果保密的声明及签字。应提供工作人员对患者隐私及结果保密的声明及签字。5.1 人 员 操作人员考核的主要内容：操作人员考核的主要内容： 标本接收与处理：流程和标本是否合格的要点标本接收与处理：流程和标本是否合格的要点 试剂耗材质检：为何要质检、如何做试剂耗材质检：为何要质检、如何做 核酸提取：原理和操作技术要领核酸提取：原理和操作

20、技术要领 防污染：措施和意识防污染：措施和意识 质量控制：程序和实际运行情况、失控的分析处理质量控制：程序和实际运行情况、失控的分析处理 结果分析与判断：结果审核、报告发放结果分析与判断：结果审核、报告发放5.1 人 员 在现场评审时要求安排人员比对：在现场评审时要求安排人员比对：临床基临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，酸提取步骤，这其中所涉及这其中所涉及的又主要是加的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，样器的使用，尽管操作简单，但由于均为但由于均为微量操作，最后扩增放大，因此要获得稳微量操作，最后扩增放大，因此要获得稳定可靠的测定结果，

21、操作人员需要一定的定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验专业技术知识和经验。5.1 人 员 在现场安排实验时应考虑到的问题：在现场安排实验时应考虑到的问题： 标本数量：一般标本数量：一般5个；个； 标本要求：一份阴性，其余标本要求：一份阴性，其余4份一般要份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓度尽可能涵盖高、中、低、临界等浓度差，尽可能涵盖测量区间。差，尽可能涵盖测量区间。 最低检出限最低检出限、线性区间线性区间、测量区间测量区间。5.2 5.2 设施和环境条件设施和环境条件(3-1)5.2.1实验室原则上分四个分隔开的工作区域：实验室原则上分四个分隔开的工作区域：（a）试剂贮

22、存和准备区；）试剂贮存和准备区；（b）标本制备区；）标本制备区；（c）扩增区；）扩增区；（d）扩增产物分析区。）扩增产物分析区。 如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），（如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），（c）和（）和（d）区可合并。上述每个区域应有充分空间以保证：区可合并。上述每个区域应有充分空间以保证：（a）样本处置符合分析前、后样本分区放置；）样本处置符合分析前、后样本分区放置；（b）仪器放置符合维修和操作要求；）仪器放置符合维修和操作要求；（c）标本制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备；）标本制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备；（d）打印检验报告时交叉污染的控制。

23、）打印检验报告时交叉污染的控制。5.2 5.2 设施和环境条件设施和环境条件(3-2) 5.2.2应实施安全风险评估，应针对各工作区制定针应实施安全风险评估，应针对各工作区制定针对性的防护措施及合适的警告。对性的防护措施及合适的警告。 5.2.4 实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波长为长为254nm，照射时离实验台的高度一般为，照射时离实验台的高度一般为6090cm。标本处理区应配置二级生物安全柜。标本处理区应配置二级生物安全柜。 5.2.5应依据所用分析设备和实验过程对环境温、湿应依据所用分析设备和实验过程对环境温、湿度的要求，制定实验室温、湿度

24、控制的目标，有效度的要求，制定实验室温、湿度控制的目标，有效地实施控制，并提供温、湿度监控记录。地实施控制，并提供温、湿度监控记录。 应依据用途（如：应依据用途（如：RNA检测用水），制定适宜的水检测用水），制定适宜的水质标准（如：应除质标准（如：应除RNase），并定期检测。），并定期检测。5.2 5.2 设施和环境条件设施和环境条件(3-3) 5.2.6 基因扩增检验各工作区域应有明确的标记，不同基因扩增检验各工作区域应有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不能混用。进入各工作区域应工作区域内的设备、物品不能混用。进入各工作区域应按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区按照单一方向进行，即试

25、剂贮存和准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区扩增产物分析区。扩增产物分析区。 不同的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）不同的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不能将工作服带出。工作人员离开各工作区域时，不能将工作服带出。 5.2.7应有限制进入的标志和措施。应有限制进入的标志和措施。 5.2.9应有足够的、温度适宜的储存空间（如冰箱），用应有足够的、温度适宜的储存空间（如冰箱），用以保存临床样品和试剂，设置目标温度和允许范围，并以保存临床样品和试剂，设置目标温度和允许范围，并记录。应有温度失控时的处理措施，并记录。记录。应有温度失控时的处理措施，并

26、记录。 5.2.10应有指定的内务管理人员（如保洁人员），应有应有指定的内务管理人员（如保洁人员），应有地面、台面的维护、清洁和消毒计划及相关的记录。地面、台面的维护、清洁和消毒计划及相关的记录。5.3 5.3 实验室设备实验室设备(3-1) 5.3.1如从事如从事RNA的检测，应配备高速冷冻离心机。的检测，应配备高速冷冻离心机。在使用在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，应配置洗板方法检测扩增产物时，应配置洗板机并使用洗板机洗板。一次性的加样器吸头应带有机并使用洗板机洗板。一次性的加样器吸头应带有滤芯。滤芯。 5.3.2 强检设备按国家相关要求执行，应进行外部校强检设备按国家相关要求执

27、行，应进行外部校准的设备，可按制造商校准程序进行。准的设备，可按制造商校准程序进行。 对分析设备校准的基本项目至少应对分析设备校准的基本项目至少应包括加样系统、包括加样系统、检测系统和温控系统检测系统和温控系统。应内部校准的辅助设备，实。应内部校准的辅助设备，实验室应制定内部校准程序。验室应制定内部校准程序。 应定期对应定期对PCR仪、加样器、温度计和恒温设备进行仪、加样器、温度计和恒温设备进行校准。校准。5.3 5.3 实验室设备实验室设备(3-2) 5.3.4应保存与检验质量有关的设备管理记录。应保存与检验质量有关的设备管理记录。应提供对试剂和耗材检查、接收或拒绝、贮存应提供对试剂和耗材检

28、查、接收或拒绝、贮存和使用的记录，包括批号、效期、实验室接收和使用的记录，包括批号、效期、实验室接收日期、接收人和使用日期等。日期、接收人和使用日期等。商品试剂记录包括：使用效期和启用日期。商品试剂记录包括：使用效期和启用日期。自配试剂记录包括：试剂名称或成分；规格；自配试剂记录包括：试剂名称或成分；规格；储存要求；制备或复融的日期；有效期；配制储存要求；制备或复融的日期；有效期；配制人。人。 5.3.6 PCR扩增仪应配备稳压电源。扩增仪应配备稳压电源。5.3 5.3 实验室设备实验室设备(3-3) 5.3.7 设设备故障修复后，应对该设备性能进行评价，备故障修复后，应对该设备性能进行评价，

29、确认其可以使用。应首先分析故障原因，如果设备确认其可以使用。应首先分析故障原因，如果设备故障影响了方法学性能，可通过以下合适的方式进故障影响了方法学性能，可通过以下合适的方式进行相关的检测、验证（适用于定量项目）：行相关的检测、验证（适用于定量项目）： 可校准的项目结果超出允许范围时，实施校准；可校准的项目结果超出允许范围时，实施校准； 质控品检测结果应在质控范围内；质控品检测结果应在质控范围内； 与其他仪器的检测结果比较，偏差符合附录与其他仪器的检测结果比较，偏差符合附录A.3的的要求；要求； 使用留样再测结果进行判别，偏差符合附录使用留样再测结果进行判别，偏差符合附录A.5的的要求，并评价

30、故障对之前检验结果的影响。要求，并评价故障对之前检验结果的影响。5.4 5.4 检验前程序检验前程序 5.4.2样品采集手册中应规定基因扩增检验标本样品采集手册中应规定基因扩增检验标本留取的具体要求：如高压或留取的具体要求：如高压或Rnase灭活的洁净灭活的洁净试管、抗凝管正确使用等。一般全血和骨髓标试管、抗凝管正确使用等。一般全血和骨髓标本应进行抗凝处理，本应进行抗凝处理，EDTA和枸橼酸盐为首选抗和枸橼酸盐为首选抗凝剂，不使用肝素抗凝凝剂，不使用肝素抗凝（核酸提取采用吸附法（核酸提取采用吸附法而不受肝素干扰时除外）而不受肝素干扰时除外）；用于；用于RNA（如（如HCV RNA）扩增检测的血

31、标本宜进行抗凝处理，并）扩增检测的血标本宜进行抗凝处理，并尽快（尽快（3小时内）分离血浆，以避免小时内）分离血浆，以避免RNA的降的降解；如未作抗凝处理，则宜在抽血后解；如未作抗凝处理，则宜在抽血后1小时内小时内分离血清；分泌物、拭子、肿瘤组织等标本留分离血清；分泌物、拭子、肿瘤组织等标本留取的注意事项等。取的注意事项等。5.4.10 基于组织基于组织/细胞学形态基础的细胞学形态基础的检测项目应由具有病理诊断资质的检测项目应由具有病理诊断资质的医师确认标本是否满足检测要求。医师确认标本是否满足检测要求。5.4 5.4 检验前程序检验前程序5.5 5.5 检验程序检验程序 5.5.1 如果使用内

32、部程序，如自建检测系统，如果使用内部程序，如自建检测系统，应有程序评估并确认分析性能符合预期用途。应有程序评估并确认分析性能符合预期用途。对于定量检测项目内容至少应包括正确度、精对于定量检测项目内容至少应包括正确度、精密度、可报告范围、生物参考区间等。密度、可报告范围、生物参考区间等。 5.5.2应在应用于医学检验之前验证所使用的检应在应用于医学检验之前验证所使用的检验方法和程序的分析性能，定量检测项目验证验方法和程序的分析性能，定量检测项目验证内容至少应包括内容至少应包括正确度、精密度、可报告（或正确度、精密度、可报告（或线性）范围等。定性检测项目验证内容至少应线性）范围等。定性检测项目验证

33、内容至少应包括检出限、重复性及符合率。包括检出限、重复性及符合率。5.6 5.6 检验程序的质量保证检验程序的质量保证(5-1) 5.6.1 应制定室内质量控制程序，可参照应制定室内质量控制程序，可参照GB/T 20468 -2006临床实验室定量测定室内质量控制指南。质量控制程临床实验室定量测定室内质量控制指南。质量控制程序中应有针对核酸检测中防污染的具体措施。序中应有针对核酸检测中防污染的具体措施。 质控图应包括：质控结果、质控品名称、浓度、批号和有质控图应包括：质控结果、质控品名称、浓度、批号和有效期、质控图的中心线和控制界线、分析仪器名称和唯一效期、质控图的中心线和控制界线、分析仪器名

34、称和唯一标识、方法学名称、检验项目名称、试剂和校准品批号、标识、方法学名称、检验项目名称、试剂和校准品批号、每个数据点的日期和时间、干扰行为的记录、质控人员及每个数据点的日期和时间、干扰行为的记录、质控人员及审核人员的签字、失控时的分析处理程序和纠正措施等。审核人员的签字、失控时的分析处理程序和纠正措施等。 定性检测项目，定性检测项目，每次实验应设置阴性、弱阳性和阳性质控每次实验应设置阴性、弱阳性和阳性质控。质控规则应确保试验的稳定性和检验结果的可靠性。质控规则应确保试验的稳定性和检验结果的可靠性。 应制定程序对失控进行分析并采取相应的措施，应检查失应制定程序对失控进行分析并采取相应的措施，应

35、检查失控对之前患者样品检测结果的影响。控对之前患者样品检测结果的影响。5.6 5.6 检验程序的质量保证检验程序的质量保证(5-2) 5.6.3 定量检测项目，使用配套分析系统时，实验定量检测项目，使用配套分析系统时，实验室可使用制造商提供的溯源性文件。室可使用制造商提供的溯源性文件。 使用非配套分析系统时，使用非配套分析系统时，实验室应采用有证参考实验室应采用有证参考物质、正确度控制品等进行正确度验证或与经确物质、正确度控制品等进行正确度验证或与经确认的参考方法进行结果比对以证明实验室检验结认的参考方法进行结果比对以证明实验室检验结果的正确度。果的正确度。 如以上无法实现，则通过如下方式提供

36、结果可信如以上无法实现，则通过如下方式提供结果可信度的证明：度的证明：参加适宜的能力验证参加适宜的能力验证/室间质评，且在室间质评，且在近期一个完整的周期内成绩合格，或与已获认可近期一个完整的周期内成绩合格，或与已获认可的实验室或其它使用相同检测方法的配套系统的的实验室或其它使用相同检测方法的配套系统的同级别或高级别医疗机构实验室进行比对。同级别或高级别医疗机构实验室进行比对。5.6 5.6 检验程序的质量保证检验程序的质量保证(5-3) 5.6.4 应按照应按照CNAS-RL02能力验证规则的要求参能力验证规则的要求参加相应的能力验证加相应的能力验证/室间质评。室间质评。应使用相同的检测系统

37、检测质控样本与患者样本；应使用相同的检测系统检测质控样本与患者样本；应由从事常规检验工作的人员实施能力验证应由从事常规检验工作的人员实施能力验证/室间室间质评样品的检测；应有禁止与其他实验室之间核对质评样品的检测；应有禁止与其他实验室之间核对上报能力验证上报能力验证/室间质评结果的规定；应能提供参室间质评结果的规定；应能提供参加能力验证加能力验证/室间质评的结果和证书。实验室应对室间质评的结果和证书。实验室应对“不满意不满意”和和“不合格不合格”的能力验证的能力验证/室间质评结室间质评结果进行分析并采取纠正措施，并记录。果进行分析并采取纠正措施，并记录。 实验室负责人或指定负责人应监控室间质量

38、评价活实验室负责人或指定负责人应监控室间质量评价活动的结果，并在结果报告上签字。动的结果，并在结果报告上签字。5.6 5.6 检验程序的质量保证检验程序的质量保证(5-4) 5.6.5 对没有开展能力验证对没有开展能力验证/室间质评的检测项目，室间质评的检测项目，应通应通过与其他实验室（如已获认可的实验室或其它使用相同过与其他实验室（如已获认可的实验室或其它使用相同检测方法的配套系统的同级别或高级别实验室）比对的检测方法的配套系统的同级别或高级别实验室）比对的方式，判断检验结果的可接受性，并应满足如下要求方式，判断检验结果的可接受性，并应满足如下要求： （a）规定比对实验室的选择原则；）规定比

39、对实验室的选择原则； （b）样品数量：至少）样品数量：至少5份，包括正常和异常水平；份，包括正常和异常水平； （c）频率：至少每年）频率：至少每年2次；次； （d）判定标准：应有）判定标准：应有80%的结果满足要求。的结果满足要求。 当实验室间比对不适用时，应建立评估检测结果与临床当实验室间比对不适用时，应建立评估检测结果与临床诊断的一致性的程序，判断检验结果的可接受性。每年诊断的一致性的程序，判断检验结果的可接受性。每年评价不少于评价不少于2次，并记录。次，并记录。5.6 5.6 检验程序的质量保证检验程序的质量保证(5-5) 5.6.6 实验室用两套及以上检测系统检测同一实验室用两套及以上

40、检测系统检测同一项目时，应有比对数据表明其检测结果的一项目时，应有比对数据表明其检测结果的一致性，比对频次每年至少致性，比对频次每年至少2次，每次不少于次，每次不少于20份样本，浓度水平覆盖测量范围；份样本，浓度水平覆盖测量范围；比对结比对结果的系统偏倚应符合附录果的系统偏倚应符合附录A.4的要求。的要求。 使用不同生物参考区间的检测系统间不宜进使用不同生物参考区间的检测系统间不宜进行比对。行比对。 5.6.7 比对记录应由实验室负责人审核并签比对记录应由实验室负责人审核并签字，并应保留至少字，并应保留至少2年年。5.6 检验程序的质量保证n一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内一般核酸提取试剂促

41、使靶核酸从细胞内释出的原理释出的原理n核酸的分离纯化核酸的分离纯化n靶核酸提取的质量靶核酸提取的质量 n临床标本及核酸提取中可能存在的抑制临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质和干扰物质 n核酸样本制备及扩增检测的质控核酸样本制备及扩增检测的质控 n产物检测的质控产物检测的质控 5.6 检验程序的质量保证一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫

42、或真菌则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂细胞内，如果上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在则靶核酸亦可存在于细胞外。于细胞外。 一般均使用去垢剂一般均使用去垢剂(如如Triton-100)裂解细胞，用裂解细胞，用一种蛋白裂解酶一种蛋白裂解酶(如蛋白酶如蛋白酶K)消化结合于核酸的消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。5.6 检验程序的质量保证核酸的分离纯化核酸的分离纯化核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增的物质去除。扰核酸扩增的物质去除。 经典方法经典方法硅吸附法硅吸附法对于商品

43、核酸提取试剂盒，临床实验室在对于商品核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。行评价。5.6 检验程序的质量保证靶核酸提取的质量靶核酸提取的质量纯化的靶核酸的完整性：纯化的靶核酸的完整性：可使用凝胶电泳将样可使用凝胶电泳将样本的核酸提取物与一核酸标准比较测定。本的核酸提取物与一核酸标准比较测定。 核酸提取的产率：核酸提取的产率：可在可在A260读数测定。读数测定。核酸纯度：核酸纯度：可通过提取物可通过提取物A260/A280比率判定比率判定血清或血浆中病原体核酸纯化纯度：血清或血浆中病原体核酸纯化纯度：采用一种采用一种间接的方法

44、，即使用已知病原体含量的溶血和间接的方法，即使用已知病原体含量的溶血和/或脂血标本用待评价试剂提取，然后进行扩增或脂血标本用待评价试剂提取，然后进行扩增检测，比较所得到的结果。检测，比较所得到的结果。5.6 检验程序的质量保证临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质临床标本中：临床标本中：血清或血浆中的血红素及其代谢血清或血浆中的血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶、降解靶核酸的核酸酶等。核酸的核酸酶等。核酸提取中：核酸提取中：许多试剂如乙二胺四乙酸许多试剂如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢剂如十二烷基硫酸盐去垢剂如十二烷基硫酸盐(SDS)和和chaotrope试试剂如异硫氰酸胍和盐酸胍等、酚、氯仿、乙醇剂如异硫氰酸胍和盐酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有机溶剂等有机溶剂 。 5.6