医院检验中心ENA多肽抗体谱操作规程

1、医院检验中心ENA多肽抗体谱操作规程原理本试剂盒采用国际先进的生物技术-免疫印迹技术（Immunoblotting）,将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原（ENA,经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维膜上，可一次检测8-10种自身抗体，用于系统工斑狼疮（SLE）、混合性结缔组织病（MCTD健皮病（PSS）,干燥综合症（SS）和多发性肌炎/皮肌炎（PD/DM）、类风湿性关节炎等六种不同风湿性疾病的诊断和鉴别诊断。试剂1.浓缩洗涤液25mlX24.显色液B25mlX12.酶标抗体0.6mlX25.终止液25mlXI3.显色液A25mlx16.膜条8条X5步骤1.将浓缩洗涤液用蒸储水作1:10稀释。

2、2.每槽各加0.5ml洗涤液，然后加待测血清10ul，充分混匀,置37c孵育30分钟.3,取由反应槽，弃去槽中液体，在吸水纸拍干，用洗涤液洗涤4次，每次1ml,摇动，每次1分钟,4,每槽加入洗涤液0.5ml,再加酶标抗体20ul,混匀后置37c孵育30分钟.5.同(3)洗涤6,加入显色剂A0,5ml+显色剂B0.5ml,室温反应10分钟.7.待阳性带显色清晰，即加终止液0.5ml,终止反应1分钟后弃去液体，用自来水洗涤后取由薄膜，待干后即可判定结果,结果观察检测膜上显色区带与自身抗体检测判断“色K带立置代口检测抗体说明29KDB'抗Sm主要看D,D总与B一起由现单独由现B'/B

3、无D,不能判断抗Sm阳性28KDB13.5KDD73KD抗U1RNP73KD（即国外报道的70KD）,和A可同时由现，也可分别由现,C常伴上述二区起由现，单独由现少见，抗U1RNPT时也可与B'.B反应由现显色区带32KDA17.5KDC52KD抗SSA本试剂盒用兔胸腺为抗原来源，因此缺60KD蛋白多肽48KD抗SSB二区带不仅同时由现，也与52KD区带同时由现，但48/47KD后时很弱，不易分辨47KD45KD86KD抗两区带同时由现，在两区带间后时可见到两Scl-70条较弱的区带，它们都是100KD的降解产物70KD55KD抗Jo-1确定55KD需慎重,因临床意义不明的54.56K

4、D和55KD在位置上相差和U138KD抗核糖体三区带同时由现，但有时16.5,15KD区带较弱16.5KD15KD注意事项1 .结果判断请参看标准谱带图，零位线（兰线）下约2mmt的第一条显色带为试剂质控线，此显色带若不由现，说明试剂失效。4c保2 .本试剂盒放4c保存。酶标抗体勿放一20c保存。取膜条时。剪开铝塑外包装，剩余的膜条须放入自封袋中，仔细封好自封袋口，以防膜条被潮湿，并将其置存。3 .浓缩洗涤液需临用前稀释，整个操作中，洗涤液用量大约为每人份1伽l,可参照此量稀释。未用完的洗涤液弃之，不可留作下次用。4 .全部操作最好在生化摇摆平台上摆动进行，改用手工问隙晃动也可检测，但敏感性会有所下降。5 .显色液A、B需恢复至室温方可使用。显色液有棕色颗粒时，不影响检测结果。6 .标准带谱为根据相应标准血清定位后，用电脑制作，每个试剂盒对应一张标准带谱，进行结果判断时，不同试剂盒间的标准带谱不能混用，要注意膜条铝塑袋上批号与标准带谱下方批号一致。7 .判断结果时，要注意将谱带定位与带型结合起来。带型指一种抗体有多条区带时，区带间相对不变的位置关系构成的图型。如抗Scl-70常由现4条；抗SSB常由现2条，且总是与抗SSA同时由现；抗Sm常由现2-3条;抗D'E（抗Ijl4）常由现56条等等。谱带定位时与标准带相差1mmrt属允许范围。8 .本试剂盒也可作抗D