生物化学与分子生物学：血清过氧化氢酶Km值测定_第1页
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实验三血清过氧化氢酶Km值测定一 实验原理1 Km酶促速度达到其最大速度Vm一半时的底物浓度特征性常数可以表示E与S之间的亲和能力。双倒数作图法（Lineweaver-Burk法） VmaxS Km+SV = （林贝氏方程）+ 1/V=KmVmax 1/Vmax 1/S 两边同取倒数-1/Km 1/Vmax 1/S1/VHanes作图法S/V=Km/Vmax + S/Vmax S S/V -Km Km/Vm 1/Vmax + 1/V=KmVmax 1/Vmax 1/S 2 过氧化氢酶 2H2O22H2O+O2 2KMnO45H2O23H2SO4 2MnSO4K2SO45O28H2OV反应速度=开始H2O2物质的量剩余H2O2物质的量H2O2物质的量浓度加入的体积KMnO4物质的量浓度消耗的KMnO4体积5/2 二 实验操作 （见书P132）1 H2O2浓度的标定： 同样操作，做二份，取二份数据平均值。2反应速度的测定： 表1 各反应管添加血清，硫酸时间 1 2 3 4 5加稀释血清0.5ml时间 0 1 2 3 4加H2SO4 2.0ml时间 5 6 7 8 9 3 KMnO4滴定各瓶至微红色。记录KMnO4消耗量(m1)，计算H2O2剩余量。三 实验结果与讨论1 实验结果 （1）书P132 表3-3 （2）作图：标题，制作时间，标注Km值 （3）实验结果（文字描述）2 结论

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