生物饵料培养学课件：第三章 轮虫的培养

1、第三章 轮虫的培养第一节轮虫的生物学第二节轮虫的分离和培养第三节轮虫保种和休眠卵的保存轮虫的研究与开发利用历史1960年，日本Ito发现褶皱臂尾轮虫（ Brachionus plicatilis ）作为仔鱼饵料的价值，并进行大量培养技术的探索。1967年，Hirata和Mori发展面包酵母是轮虫的适合饵料，至70年代在轮虫培养占面包酵母被广泛使用。我国20世纪60年代，傅素宝等（1962）对壶状臂尾轮虫（Brachionus urceus）进行了研究。至70年代后期，解承林（1978）、郑严（1979）、何进金（1980）、何连金（1982）、张道南（1983）等发表大量有关轮虫的生物学和培养

2、方面的研究论文。第一节 轮虫的生物学一、作为生物饵料培养的主要轮虫种类二、轮虫的形态特征三、轮虫的变异四、轮虫生殖习性五、轮虫的发育六、轮虫的寿命七、轮虫的生态条件八、轮虫培养饵料一、作为生物饵料培养的主要轮虫种类目前，欧洲许多国家将轮虫归属于袋形动物门的轮虫纲。我国把轮虫独立为轮虫动物门，下分单巢纲和双巢纲。单巢纲分为游泳目和簇轮虫目。世界上90的轮虫，大于1600种属于单巢纲的种类。作为物饵料培养的轮虫，大多数属于游泳目，臂尾轮虫科，臂尾轮虫的种类。一、作为生物饵料培养的主要轮虫种类1、壶状臂尾轮虫（Brachionus urceus）：被甲长196-240m，宽152-202m。适应有机

3、质多的水体，常在池塘等环境大量繁殖形成优势种群，是淡水池塘培养的主要种类之一。2、萼花臂尾轮虫（ Brachionus calyciflorus）：被甲长全300-350m，宽180-195m，是淡水池塘培养的主要种类之一。3、褶皱臂尾轮虫（ Brachionus plicatilis ）：被甲长238m，宽171m。通常称为L型轮虫。是海水培养的主要种类，在鱼虾蟹育苗中应用最广泛。4、圆型臂尾轮虫（ Brachionus rotundi formis）：被甲长117-162m，宽100-121m。称为S型轮虫。是热带种类。一、作为生物饵料培养的主要轮虫种类5、角突臂尾轮虫（ Brachion

4、us angularis）：被甲长110-205m，宽85-165m。体形小，是鱼类良好的开口饵料，是淡水池塘培养的主要种类之一。6、裂足轮虫（Schizocerca diversicornis）：是典型的浅水池塘的浮游动物。被甲长（不包括前后突起）175-210m，宽90-170m；前端侧突起长35-60m，后端右突起长55-80m。一般在长江中下游冲积平原的中小型浅水湖泊内。二、轮虫的形态特征 (一)外部形态1、头部2、躯干部3、足（二）内部构造1、体壁2、假体腔3、消化系统4、排泄系统5、神经系统与感觉系统6、生殖系统(一)外部形态1、头部头部具有头冠，头冠的形状变化很大，常分为两叶或数

5、叶。头冠基本构造可比拟为“漏斗”，漏斗底部为口中，其边缘上生有两圈纤毛。2、躯干部头冠的下方即为躯干部，是身体最长最大的部分，一般腹面扁平或稍许凹入，背面隆起凸出的居多。3、足足位于身体的后端，大多成柄状，有时有假节，能自由伸缩。有的种类无足。足的末端通常具有左右对称的趾。（二）内部构造1、体壁：由一层表皮细胞和皮下肌肉及表皮细胞分泌的骨蛋白稍许硬化形成的皮层组成。2、假体腔：位于体壁下方，消化管及其他内部器官之间。3、消化系统：包括口、咽头、咀嚼囊、食道、胃和肠。肠直通泄殖腔，肛门开口于躯干部末端靠近足的基部。4、排泄系统：位于身体两侧的具有焰茎球的原肾管和一个膀胱组成。5、神经系统与感觉系

6、统：脑位于咀嚼器的背面，由一背神经团节组成。轮虫具有相当发达的感觉器官和感觉细胞，主要集中在前端的头冠部分。如触手、眼点等。6、生殖系统：除双巢纲的种类外，雌性轮虫的生殖系统由单一的卵巢、卵黄腺和输卵管构成。雄性生殖系统，单巢纲雄体的生殖系统包括一个单独的精巢、输精管及可能和输精管相连接的交配器。四、生殖习性(二)、轮虫的繁殖方式1、单性生殖：又称孤雌生殖、非混交生殖。休眠卵发育成双倍体的雌性轮虫，称非混交雌体。非混交雌体经有丝分裂产生双倍体的非需精卵。非需精卵又称夏卵或非混交卵。褶皱臂尾轮虫初孵化的非混交雌体最适条件下，大体间隔4小时可以产卵1次，每尾雌体平均产21个卵，最高产24个卵。2、

7、两性生殖：当外界环境恶劣不适宜轮虫生存时，种群开始出现混交雌体，混交雌体经减数分裂产生单倍体需精卵。如果混交雌体在年轻不与雄体交配，不论以后有无交配混交卵均不受精，发育为单倍体的雄体。如果混交雌虫在年轻时交配，混交卵受精，精子和卵子结合为双倍体的受精卵，受精卵再形成厚壳的休眠卵。休眠卵又称冬卵。(三)生活史单巢类轮虫的生活史，分单性生殖世代和两性生殖世代，两世代交替循环。（四）休眠卵的生产及意义1、诱发两性生殖因子2、混交雌体的受精率3、受精的混交雌体的产卵量4、影响休眠卵形成率的因素（四）休眠卵的生产及意义1、诱发两性生殖因子（1）外源因素。生育酚：-生育酚(主要成份维生素E)可能直接作用于

8、轮虫胚胎发育的后期而诱导混交雌体的形成。食物：轮虫适口饵料会被其他种类代替，由此导致轮虫种群中雄体和混交雌体的产生。温度：温度的急剧下降可诱导混交雌体的形成。光照：长光照有诱导产生混交雌体作用；混交雌体产生百分率最大的波长425-475纳米。盐度：褶皱臂尾轮虫，在30和盐度38(100海水)无混交雌体，在50 或20 的海水中，有90-100个体产生混交雌体。pH:较高的pH培养轮虫时，其混交雌体产生的百分率相对较高。（四）休眠卵的生产及意义1、诱发两性生殖因子（2）内源性因素遗传因素：混交雌体的形成常因同种轮虫不同品系间的遗传差异而存在较大差异。如褶皱臂尾轮虫有的品系无性生殖到第25代仍无混

9、交个体产生，而另一些品系则几乎每代都有混交雌体产生。母体的年龄：母体的年龄与轮虫混交雌体的形成有密切的关系。母体的年龄的增大，混交雌体形成减少。轮虫孤雌生殖的累积世代数：轮虫孤雌生殖世代的积累对轮虫混交雌体的形成具有诱导作用。（四）休眠卵的生产及意义2、混交雌体的受精率（1）雌雄相遇及交配的可能性。同一品系雌雄交配的可能约占相遇概率的71，而不同品系之间交配可能性仅占20。（2）雄轮虫的受精力。雄体年龄、母体摄食和轮虫种群的生长阶段。年龄增大，受精能力下降。（3）雌体是否易于受精。雌体的吸引力、雌体的年龄有关。褶皱臂尾轮虫出生后9小时内可与雄体交配受精。3、受精的混交雌体的产卵量。温度、pH值

10、和食物有关。4、影响休眠卵形成效率的因素。遗传因素、温度、食物、盐度和pH值等五、轮虫的发育轮虫的个体发育划分为4个阶段：即胚胎发育期、生殖前期、生殖期和生殖后期。1、胚胎发育期：指卵的产出到幼体的孵出所经历的时间。2、生殖前期：指幼体孵出到其产出第一个卵所经历的时间。3、生殖期：指第一个卵产出到最后一个卵产出所经历的时间。4、生殖后期：又称衰老期，指从轮虫最后一个卵产出到其死亡所经历的时间。六、轮虫的寿命褶皱臂尾轮虫的寿命，大约为7-10天。在20-22，雌虫平均寿命10.5天；繁殖持续时间为6.7天；每个雌体平均产生后代21个。萼花臂尾轮虫在20、25和30 下培养时，其寿命为分别为168

11、、118和60小时。壶状臂尾轮虫在15、20、25和30 下，其平均寿命分别为305、262、173和120小时。七、轮虫的生态条件1、温度：5-40 褶皱臂尾轮虫能生长繁殖，较适宜的繁殖温度为25-40 ，30-35 繁殖最快。2、盐度：褶皱臂尾轮虫在2-50范围生长繁殖，适宜繁殖盐度10-30，尤以15-20最适宜。3、光照：褶皱臂尾轮虫从全暗到200 mol/(m2s)范围内，轮虫都能正常繁殖，适宜光照范围88-200 mol/(m2s)。萼花臂尾轮虫光照强度在2-240 mol/(m2s)范围内，对轮虫生长的影响不显著。因此，光照强度对轮虫种群增长影响效果与种的属性有关。七、轮虫的生态

12、条件(续)4、pH：褶皱臂尾轮虫在pH5-10的范围内，均能正常生长繁殖。 pH7.5-8.0生长繁殖快。5、溶解氧：投喂饵料种类不同，要求溶解氧量也不同。一般要求保持1.5mg/L以上。溶解氧在5-7mg/L生长繁殖速度快。6、非离子氨：非离子氨水平是影响褶皱臂尾轮虫增长的限制因素。可容忍范围内6-10mg/L。但培养过程，非离子氨的浓度不宜超过1mg/L。八、轮虫培养饵料轮虫食性广泛，可食多种饵料：包括细菌、酵母、微藻、小型原生动物、有机碎屑、微生物团絮乃至微颗粒饲料。摄食最大直径22-30m，以10-12m为好，大小宜在25m以下。饵料中n3HUFA的含量，直接影响轮虫的营养价值。1、微

13、藻：各种大小适宜的微藻，大多数都是轮虫的良好饵料。绿藻优于金藻；金藻优于硅藻；绿藻中小球藻是轮虫较好饵料。2、酵母类 ：面包酵母、啤酒酵母、油脂酵母、活性干酵母。但培养的轮虫缺少EPA。3、微生物团絮：是人工制成的有机碎屑。团絮中主要的生物种为酵母和细菌。第二节轮虫的分离和培养一、轮虫种的分离 二、休眠卵的孵化三、轮虫培养方式四、一次性培养五、半连续培养 六、大面积土池培养七、池塘轮虫的增殖一、轮虫种的分离 1、采样：用网目为120 m浮游生物网采样。2、去除较大个体浮游生物：用300 m筛网去除较大动物与杂质。3、静止：使轮虫浮游水面，用纱布或滤纸吸取。4、解剖镜下分离：在解剖镜下用吸管吸取

14、。二、休眠卵的孵化 （一）休眠卵的萌发形式 零星萌发形式：指轮虫的休眠卵在较长的一段时间内或多或少地以有规律的时间隔离而零星地萌发。 同步萌发形式：大量的休眠卵在休眠期后的短时间内（如几天）同时萌发。 （二）休眠卵的孵化方法 使用的容器，经消毒，加入300目筛绢过滤海水，加淡水调节盐度。然后加入轮虫休眠卵。给予适当光照，每天搅拌1-2次。3-7天即可孵化。 （三）影响休眠卵萌发的因素（三）影响休眠卵萌发的因素1、保存方法和时间对休眠卵萌发率的影响2、萌发时的环境状况对休眠卵萌发率的影响3、休眠卵形成时的环境状况及其对萌发率的影响4、品系间的差异1、保存方法和时间对休眠卵萌发率的影响轮虫休眠保存

15、方法主要有冷冻和干燥两种。褶皱臂尾轮虫休眠卵至-10冷冻几周后休眠卵的萌发力没有丢失，冷冻至16周后休眠卵的活力降低了40；干燥保存休眠卵，如在萌发前进行低能量的超声波预处理后，其萌发率可达100。5下保存的褶皱臂尾轮虫的同步萌发率显著高于15-25 保存的休眠卵。2、萌发时的环境状况对休眠卵萌发率的影响温度：在5-35的范围内，褶皱臂尾轮虫休眠卵都能萌发，最适萌发温度是20-25 光照：光照对轮虫休眠卵萌发率的影响常因种而异。光对于红臂尾轮虫休眠卵的快速、批量萌发是绝对必要的，但对角突臂尾轮虫和蒲达臂尾轮虫却无影响。光照是角突臂尾轮虫、萼花臂尾轮虫、褶皱臂尾轮虫和晶囊轮虫新产休眠卵萌发的必要

16、条件。pH:萼花臂尾轮虫和角突臂尾轮虫休眠卵在pH4.5-11.5的范围内可以萌发。pH8时休眠卵孵化时间最短。溶氧：萼花臂尾轮虫和角突臂尾轮虫休眠卵正常萌发的临界氧量0.3mg/L.3、休眠卵形成时的食物与环境状况及其对萌发率的影响休眠卵形成时的母体的生理状况、环境条件对轮虫休眠卵的萌发具有较大影响。受精的混交雌体的摄食也影响其所产休眠卵的萌发率。以衣藻为食物的褶皱臂尾轮虫形成的休眠卵，其萌发率远低于以扁藻为食时。通过改变休眠卵形成时的环境状况，可改变休眠卵萌发的最适温度以及在该温度下的最大萌发率。休眠卵形成时培养水体盐度影响萌发时所需的最适盐度。4、品系间的差异不同品系的褶皱臂尾轮虫在同样

17、条件下形成和保存的休眠卵的萌发率研究表明，休眠卵的萌发率因品系的不同而异。三、轮虫培养方式（一）依培养条件的人为控制程度分： 1、粗养 2、精养（二）依培养和收获的特点分： 1、一次性培养 2、半连续培养 3、连续培养。粗养和精养 1、 粗养 培养池为室外大型水泥池（一般50立方米以上）或土池（一般1-2亩或者更大）。对其环境条件难以人为控制。培养达到的密度低。每天或隔天采收部分轮虫。缺点是培养不够稳定。 2、精养 培养池为室内小型池，一般0.5-1立方米，大的5-10立方米。严格控制培养条件，培养达到的密度高，一般达500-1000个/ml。培养效率高、稳定。一次性培养，半连续培养和连续培养

18、 1、一次性培养 在轮虫培养池中，先培养单胞藻饵料，待浓度较大后，接种轮虫进去，补投酵母饵料，培养，经4-7天，繁殖达到一定的密度，一次全部采收。 2、半连续培养 半连续培养又称间收法培养。典型的半连续培养，除轮虫培养池外，还需要容量较大的专用单胞藻饵料培养池，培养大量藻类备用。 3、连续培养 连续培养装置为室内封闭式系统，培养条件严格控制，提供高质量饵料，采用 “恒化器”的原理自动控制采收。 四、一次性培养1、培养容器、培养池: 各种玻璃培养缸、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池，都可以用来培养轮虫。2、培养用水 : 需经砂滤器过滤或密筛绢网（300目）过滤以除去小型甲壳动物等敌害生物，并加入淡水调

19、节盐度至最适范围（15-20）。3、培养单胞藻饵料 : 室内小型培养，多用单胞藻为饵料，可先使用专门培养单胞藻的设备培养好单胞藻备用。生产性培养，一般先在轮虫培养池培养单胞藻，待其生长繁殖达到一定的浓度（小球藻或微绿球藻为1000-3000万个细胞/ml），即可接种。四、一次性培养（续）4、接种:如单纯以藻类为饵料培养，接种轮虫密度为0.1-0.5个/ml时，经7-10天培养，可达到收获的密度. 用面包酵母为饵料培养轮虫，接种量必须大。在25的条件下，轮虫的接种量以14-70个/ml适宜。5、投饵 一般每天投饵两次主要靠观察水色调整，投饵后水应呈现出淡的藻色。饵料被吃光时，水变清，呈淡褐色（轮

20、虫的本色），应及时补投饵料。生产性培养轮虫，多以单胞藻和面包酵母混合投喂，池中轮虫除消耗池中藻类饵料外，每天投喂面包酵母两次，日投饵量为每一百万个轮虫投1-1.2克酵母。四、一次性培养（续）6、搅拌或充气 小型培养，在每次投饵后需轻轻搅拌。生产性培养，水容量较大，必须充气。用油脂酵母为饵料，轮虫密度近乎1000个/ml时，必须提供60-100L/（min.m3）的充气量。7、生长情况的观察和检查 每天上午，用一个烧杯取池水对光观察。如果轮虫游泳活泼，分布均匀，密度加大，则为情况良好。如果活动力弱，多沉于论底层，或集成团块浮于水面上，密度不增加甚至减少，则表明情况异常。8、收获 一般经过3-7天

21、的培养，轮虫密度达到100-200个/ml（粗养）或400-600个/ml（精养），即可收获。五、半连续培养 1、培养池 分轮虫培养池和单胞藻饵料培养池两种，均为室外水泥池，两种池的容量大约以1：2的比例配套使用。轮虫培养池为30或40立方米，池深1.4米。单胞藻培养池的容量为100-200立方米。2、培养微藻饵料 把轮虫培养池和单胞藻饵料培养池清洗，消毒，灌水，施肥，培养单胞藻饵料。五、半连续培养 （续）3、接种 当藻类饵料繁殖达到较大浓度时，以每ml水体接入轮虫30-50个的数量。4、培养 接种轮虫后，充气培养。轮虫除摄食池内单胞藻饵料外，还投喂面包酵母，每天按每100万个轮虫投酵母1-1

22、.2克，分上、下午两次或多次投喂，5、采收 培养4-5天后，轮虫的密度超过100个/ml时，根据轮虫的繁殖率，每天采收水容量的1/5-1/3。 六、大面积土池培养1、培养池：小的1-2亩，大的10-15亩。2、清池：清池方法有两种。一为干水清池，把池水排干，在烈日下曝晒3-5天，即可达到清池目的。3、灌水：用250目或300目的密筛绢过滤灌水。4、施肥培养微藻饵料 ：灌水后即施肥培养微藻。采用有机肥和无机肥混合施肥方法，可使轮虫培养池在相当长时间维持肥效，以供应藻类大量繁殖的营养需要。（每亩施发酵鸡粪100-150）六、大面积土池培养（续）5、接种：轮虫接种量，一般以0.5-1个/ml较为适宜

23、。 6、维持微藻数量在适宜的范围： 土池培养轮虫，一般不投饵，轮虫主要摄食施肥培养的藻类饵料。7、采收：用200目筛绢制成的网箱，用一小型水泵，把池水抽入网箱过滤。七、池塘轮虫的增殖 1、池塘选择：池底轮虫休眠卵达100万个/m2者。 2、排水冻底：可促进休眠卵萌发，还可冻死敌害。 3、清塘晒底：用药物实施排水清塘，晾干5-7天。 4、注水搅底：初注水量以20-30cm，借助机械或人力搅动底泥。随轮虫密度增加逐渐加深水位。 5、水肥度调控：轮虫数量1000个/L时，不施肥，透明度30-40cm；当密度1000个/L时，施肥使透明度降至20-30cm。 6、投饵：轮虫繁殖进入指数增长期后，便考虑

24、补充饵料。饵料为：浮游植物、有机碎屑（粪肥、豆浆）和菌类（光合细菌、酵母）。七、池塘轮虫的增殖（续）7、增氧：利用增氧机增氧，保证池水溶解氧大于3mg/L。 8、敌害防治。（1）甲壳类：可用0.5-1.2g/m3晶体敌百虫全池泼洒。（2）多毛类：使用茶饼泼洒有一定效果。（3）大型原生动物：投酵母易繁殖。（4）丝状藻：尚无选择性杀伤药物。9、抽滤与换水。每天抽滤出部分轮虫，使收获量与繁殖量大体平衡。适当换水改善水质。10、保护卵资源。 投饵、施肥等措施强化一批轮虫，使其达到高密度并产大量休眠卵为下一生产周期奠定好基础。第三节轮虫的保种和休眠卵的保存一、休眠卵的诱发二、休眠卵的采集、分离和定量三、休眠卵的形态和鉴定四、休眠卵的保存一、休眠卵的诱发1、突然停饵、停气，出现两性生殖，产生大量休眠卵。2、改变盐度或温度，促进轮虫产生休眠卵。把低温条件下培养的轮虫放到加温至29-30的培养液中，每2天反复操作1次，可促使轮虫产生大量休