化学发光免疫分析技术-(2)课件

1、一、化学发光免疫技术的概念二、化学发光免疫分析基本原理三、化学发光免疫分析的类型四、临床应用五、发展与展望一、化学发光免疫技术的概念 化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA） 是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度

2、、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。 是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面的体外诊断实验中。化学发光免疫分析的优势灵敏度高灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度可达 10-22 mol/

3、L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。发光强度在 4 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。 宽的线性动力学范围 光信号持续时间长辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式分析方法简便快速结果稳定、误差小样品系直接自己发光，不需要任何光源

4、照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。 安全性好及使用期长免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一年。 二、化学发光免疫分析基本原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器光

5、量子产率。化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊断。三、化学发光免疫分析的类型

6、 化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类,即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。 用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。 由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。3.1 直接化学发光免疫分析发光YYY磁微粒被测抗原+抗体+带吖啶酯标记物抗体YYYYYYYYYYY冲洗后- 夹心法（1）加入

7、H2O2（pH10）直接化学发光的机理磁微粒模式图YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY特点抗原和抗体结合与未结合部分的易分离磁微粒技术 化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计

8、算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。3.2、化学发光酶免疫分析该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图 该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。 碱性磷酸酶标记的化

9、学发光免疫分析碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 分析步骤分配样品,磁颗粒和试剂孵育使反应物结合在磁场中清洗去除未结合物质加入底物产生信号孵育,促使信号的产生信号检测电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。 3.3 电化学发光免疫分析在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生

10、免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。电化学发光免疫分析示意图电化学发光免疫测定示意图标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体

11、系之一，其核心性能达到了国际同类产品先进水平。该机采用高灵敏全球主流化学发光技术的CL-2000i 分析系统，拥有业内领先的高效处理能力，可实现240T/H检测；智能优化的测试流程，专利逻辑设计，提升测试通量，瀑布式真空气吸清洗技术降样本携带干扰至最低，涵盖甲状腺功能、激素、肿瘤标志物、传染病等50多个检测项目。目前我科开展肿瘤标志物，甲状腺功能检测，生殖内分泌激素检查项目，后续依临床需要酌情开展新的项目，更好的服务临床，服务患者 四、临床应用1.甲状腺激素 2.生殖激素3.肾上腺/垂体激素 4.贫血因子5.肿瘤标记物 6.感染性疾病7.糖尿病 8.心血管系统9.病毒标记物 10.骨代谢11.

12、过敏性疾病 12.治疗药物监测 甲状腺功能检测项目及临床意义 甲功五项是T3、T4、FT3、FT4和TSH的总称，它与甲状腺功能有密切关系，是诊断甲亢、甲减的重要依据 。检测甲状腺激素在甲亢和甲减病人的诊断中已得到广泛应用，并成为判断疗效、监测复发的重要手段 甲状腺素（T4）甲状腺素（T4）是由甲状腺合成、分泌的激素，在调节机体代谢中起着重要作用，被分泌到血液循环中的T4能对垂体的促甲状腺激素（TSH）的调节起反应；下丘脑、甲状腺、垂体所组成负反馈机制对T4的分泌起着调节作用。在血循环中，T4约60%与甲状腺结合球蛋白（thyroxine-binding globulin，TBG）结合，30%

13、与甲状腺激素转运蛋白（Transthyretin，TBPA）结合，其余约10%与白蛋白结合，仅0.03%-0.04%为游离状态游离的T4有活性，而结合的T4无活性，主要起备用作用。参考范围：5.014.5ug/dl（CENTAUR）临床意义：T4升高：见于甲状腺功能亢进的病人，但轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化未如T3明显； 凡引起TBG升高的因素均可使T4升高，如妊娠、应用雌激素、葡萄胎、淋巴瘤、血卟啉病等；药物如胺碘酮、含碘造影剂、受体阻断剂、奋乃近、海洛因等T4降低： 见于甲状腺功能减退的病人，轻型甲减、亚临床甲减的变化较T3明显； 缺碘性甲状腺肿可见T4降低或在正常低限，而T3正常

14、； 肾病综合征、肝功能衰竭、遗传性TBG缺陷症、肢端肥大症、重症全身性疾病状态等；以及应用糖皮质激素、雄激素、生长激素、苯妥英钠等药物血清中的三碘甲状腺原氨酸（T3）血清中的三碘甲状腺原氨酸（T3），仅20%由甲状腺直接分泌而来，80%以上在外周组织通过T4脱碘而来。血液循环中的T3能对垂体的促甲状腺激素（TSH）的调节起反应，下丘脑、垂体、甲状腺所组成负反馈机制对T3的分泌起着调节作用。在血循环中，约99.5%的T3与TBG结合，但T3与TBG的亲和力明显低于T4；T3不与TBPA结合未结合的T3有活性；而结合的T3无活性，主要起备用作用。参考范围：0.581.62 ug/dL临床意义：T3

15、升高：见于甲状腺功能亢进的病人，轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化较T4明显，适合轻型甲亢、早期甲亢和亚临床甲亢以及甲亢治疗后复发的诊断；T3型甲亢仅有T3和FT3升高； 与T4一样，T3亦受TBG变化影响，但受影响程度不及T4。T3降低： 仅于较重甲状腺功能减退的病人，T3和T4均下降，轻型甲减T3不一定下降； 重症全身性疾病状态或慢性病变可导致T3下降，多见于慢性肾功能不全、慢性心功能不全、糖尿病、心梗等疾病的患者。游离甲状腺素（FT4）游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）FT3和FT4分别为T3和T4在血清中未与蛋白结合的部分，其不受血清中TBG的影响，直接反映甲状腺功能的状态，其敏感性和特

16、异性均高于T3和T4参考范围： FT3：2.34.0pg/mL FT4：0.61.2ng/dL临床意义：血清FT3和FT4升高：甲亢；低T3综合征，由于5脱碘酶受抑制，T4外周脱碘作用障碍使FT4升高；甲状腺素不敏感综合征， FT3和FT4升高，而无甲亢表现；某些药物，胺碘酮、肝素等可使FT4升高；FT3适合于甲亢和左旋甲状腺素治疗中药物是否过量的判断。血清FT3和FT4降低： 甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多以FT4下降为主；低T3综合征仅有FT3下降； 某些药物，如苯妥英钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。

17、T4升高，T3正常或下降：家族性白蛋白异常性高T4血症；胰高血糖素瘤；药物普萘洛尔、胺碘酮、胆囊造影剂；全身性疾病、精神性疾病；苯丙胺成瘾；T4型甲亢、甲亢伴T4转换T3障碍。T4正常，T3升高：T3型甲亢；甲减用T3或者其他甲状腺激素制剂替代治疗后T4正常，T3下降：患有全身性疾病时；5单脱碘酶活性下降；血皮质醇升高的各种情况；营养不良综合征。T4下降、T3升高：医源性甲亢；甲状腺功能正常病人服用甲状腺激素制剂。T4下降，T3正常：轻至中度甲减；碘缺乏；苯妥英钠、卡马西平。T3和T4均下降：中至重度甲减；重症全身性疾病；低TBG血症；大剂量使用水杨酸制剂促甲状腺激素（TSH）促甲状腺激素是由

18、、两亚单位非共价结合而成的糖蛋白，亚单位与LH、FSH的亚单位相似；而亚单位与上述垂体糖蛋白的相应部分完全不同，有自已独特的生化及免疫特性；TSH主要由垂体合成，主要针对FT3、FT4的负反馈起反应；下丘脑三肽、促甲状腺激素释放激素（TRH）都可直接刺激TSH的产生。TSH主要通过与甲状腺细胞膜受体作用发挥以下三种功能，一是促进甲状腺细胞产生与肥大；二是促进碘代谢；三是促进甲状腺合成T3、T4。参考范围：0.5-7.30mIU/ml（CENTAUR）促甲状腺激素（TSH）TSH降低正常升高FT3、FT4FT3、FT4降低正常升高升高正常或降低甲亢甲状腺自主调节功能继发性甲减垂体性甲亢原发性甲减

19、甲状腺功能正常不排除继发性甲减肿瘤标志物（tumor marker，TM）肿瘤标志物（tumor marker，TM）是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶（同工酶）、多胺等。可在肿瘤患者血液或体液中检测到肿瘤标志物。 肿瘤标志物临床应用 正常人群中的筛查 有症状者的辅助诊断 癌症的临床阶段的分期 疾病进程的预后指标 评估治疗方案 判断癌症是否复发 治疗应答的监测血清肿瘤标志物的检测是肿瘤诊断的常用方法之一，对于恶性肿瘤的诊断、疗效的观察、病情进展的判断和复发的监测等皆有一定的临床应用价值，并具

20、有简便无创、测定结果定量客观、可重复测定以便动态监测、费用相对低廉等优点。甲胎蛋白(AFP) 参考值：500g/L持续1个月或AFP200g/L持续2好个月，应高度怀疑肝癌，同时应有医学影像学好的证据参与诊断低浓度（50200g/L）持续时间超过2个月的好患者，应视为肝癌的高危人群当谷丙转氨酶（ALT）正常，用AFP来诊断肝癌，可取性可达100。若AFP及胆红素同时明显升高，病人存活期很短通常由非原发性肝癌引起的AFP升高，一般都不会高于400g/L3.65.2的胆管上皮癌、84以上的肝母细胞癌和70左右的生殖性畸胎瘤及较少比例的胰腺癌、肺癌、肾癌和白血病患者也可出现AFP低浓度的异常升高。良

21、性病变中的AFP升高，升高一般是散在的和暂时的。肝炎病人，10升高，水平50g/L；肝硬化病人，30升高，水平500g/L；癌胚抗原（CEA）参考值：4.5ng/ml是一种可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏。胃肠道恶性肿瘤时可见血清CEA升高，在乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤中也可出现表达，并分泌于体液中。CEA在中晚期肿瘤中的阳性率 胰腺癌 8891 肺癌 76 结肠癌 73 乳腺癌和卵巢癌 73 膀胱癌、宫颈癌和子宫内膜癌中也有升高 铁蛋白（SF）男:27-375ug/l 女:12-135ug/l铁蛋白升高可见于下列肿瘤：急性白血病、何杰金氏病、肺癌、结肠癌、肝癌和前列腺癌

22、。检测铁蛋白对肝脏转移性肿瘤有诊断价值，76%的肝转移病人铁蛋白含量高于400g/L，当肝癌时，AFP测定值较低的情况下，可用铁蛋白测定值补充，以提高诊断率。在色素沉着、炎症、肝炎时铁蛋白也会升高。升高的原因可能是由于细胞坏死，红细胞生成被阻断或肿瘤组织中合成增多。乳腺癌相关抗原（CA15-3）参考值：15U/mlCA15-3是乳腺癌的最重要的特异性标志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明显升高。CA15-3动态测定有助于II期和III期乳腺癌病人治疗后复发的早期发现；当CA15-3大于100U/ml时，可认为有转移性病变。肺癌、胃肠癌、卵巢癌及宫颈癌患者的血清CA15-3也可升高，

23、应予以鉴别，特别要排除部分妊娠引起的含量升高。卵巢癌相关抗原（CA125）:参考值：35U/ml的病人中有95%在第二次手术时仍有肿瘤存在早期复发的监测:75%的患者在肿瘤复发前一年左右时间CA125的水平就已升高CA125在子宫内膜异位症、1%的健康妇女、3%的患良性卵巢疾病妇女及其他非肿瘤患者也可见到升高。胰腺胃肠癌相关抗原（CA19-9）参考值：30U/mlCA19-9是胰腺癌，胃癌，结、直肠癌、胆囊癌的相关标志物，是对胰腺癌敏感性最高的标志物。胰腺癌患者85%-95%为阳性。当CA19-9小于1000U/ml时，有一定的手术意义，肿瘤切除后CA19-9浓度会下降，如再上升，则可表示复发

24、。对胰腺癌转移的诊断也有较高的阳性率，当血清CA19-9水平高于10000Uml时，几乎均存在外周转移。胃癌、结直肠癌、胆囊癌、胆管癌、肝癌的阳性率也会很高。胃肠道和肝的多种良性和炎症病变，如胰腺炎、轻微的胆汁郁积和黄疸，CA19-9浓度也可增高，但往往呈“一过性”，而且其浓度多低于120U/ml。总前列腺特异性抗原（TPSA）参考值：4.0ng/mlPSA是前列腺癌的特异性标志物，也是目前公认的唯一具有器官特异性肿瘤标志物。血清TPSA升高一般提示前列腺存在病变（前列腺炎、良性增生或癌症）。血清PSA是检测和早期发现前列腺癌最重要的指标之一，血清TPSA定量的阳性临界值为大于10g/L，前列

25、腺癌的诊断特异性达90-97。TPSA也可用于高危人群前列腺癌的筛选与早期诊断，是第一个由美国癌症协会推荐用于筛查50岁以上男性前列腺癌的肿瘤标志物。TPSA测定还可用于监测前列腺癌患者或接受激素治疗患者的病情及疗效，90%前列腺癌术后患者的血清TPSA值可降至不能检出的痕量水平，若术后血清TPSA值升高，提示有残存肿瘤。放疗后疗效显著者，50以上患者在2个月内血清TPSA降至正常。游离前列腺特异性抗原（FPSA）参考值:1ng/ml单项的血清总PSA（TPSA）测定不能明确鉴别前列腺癌和良性的前列腺增生，主要是因为在浓度220ng/ml范围内，二组病人有交叉。而FPSA/TPSA不受此因素及

26、年龄的影响，通过FPSA/TPSA比值达到鉴别前列腺癌或良性的前列腺增生的目的。前列腺癌患者的FPSA/TPSA比值明显偏低，良性的前列腺增生患者的FPSA/TPSA比值显著增高。FPSA/TPSA界限指定为0.15，低于该值高度怀疑前列腺癌，其诊断敏感性为90.9%，特异性为87.5%，准确性为88.6%，明显优于TPSA单独测定。FPSA检测主要适用于未经治疗、TPSA值为220ng/ml病人，当TPSA值低于2ng/ml或高于20ng/ml时，FPSA/TPSA比值并不能用于鉴别前列腺癌和良性的前列腺增生。一种肿瘤可分泌多种肿瘤标志物，而不同的肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型可有相同的肿瘤标

27、志物，而且在不同的肿瘤患者体内，肿瘤标志物的质和量变化也较大。因此，单独检测一种肿瘤标志物，可能会因为测定方法的灵敏度不够而出现假阴性，联合检测多种肿瘤标志物有利于提高检出的阳性率。为此，选择一些特异性较高，可以互补的肿瘤标志物联合测定，对提高肿瘤的检出率是有价值的。肿瘤标志物的相关肿瘤肿瘤标志物主诊所预示的肿瘤CEA广谱结肠直肠癌，乳腺癌AFP肝脏睾丸癌，肝细胞癌CA125卵巢卵巢癌，胰腺癌，肺癌，乳腺癌CA19-9消化道胰腺癌，胆管癌，胃癌，肠癌CA72-4胃胃癌，卵巢癌CA15-3乳腺乳腺癌CA50广谱胰腺癌，肝癌，卵巢癌，肠癌，胃癌，肺癌PSA前列腺前列腺癌HCG子宫胚胎细胞癌，滋养层

28、肿瘤NSE肺小细胞肺癌，神经内分泌系统肿瘤SCC鳞癌鳞状细胞癌（肺、食道、上鄂、宫颈、皮肤）CYFRA 21-1肺非小细胞肺癌肿瘤标志物的联合应用肿瘤类型 肿瘤标志物（按检测的顺序排）肝AFPCEA结、直肠、胆道CEACA199CA50胰CEACA199CA242CA50胃CEACA724CA199食道CEA SCC肺NSECYFRA 21-1 CEA +CA50CA199/SCC乳腺CA153 CEA CA125卵巢 CA125 -HCG AFPCEA CA724宫颈CEA CA724子宫CEA SCCSF-HCG肾CEA -MG前列腺FPSA/TPSAPAP甲状腺CEA CA199 TBG

29、 T3,T4,FT3,FT4,TSH鼻咽CEA SCC EBV性激素检测系列下丘脑水平：促性腺激素释放激素（GnRH）脑垂体水平：促卵泡激素（FSH），促黄体生成素（LH），垂体催乳素（PRL）性腺水平（睾丸，卵巢分泌）：睾酮（T），雌二醇（E2），雌三醇（E3），孕酮（P）（胎盘分泌）：胎盘催乳素（HPL），人绒毛膜性腺激素（HCG）其它：性激素结合球蛋白（SHBG），硫酸去氢表酮（DHEA-SO4），妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）卵巢、子宫内膜与激素水平 雌二醇E2参考值;男性为2584pg/ml。女性卵泡期为25138 pg/ml；黄体期为31317 pg/ml；排卵期为100440

30、 pg/ml；绝经期为2584 pg/ml。1.判断闭经原因 (1)激素水平符合正常的周期变化，表明卵泡发育正常，应考虑为子宫性闭经；(2)雌激素水平偏低，闭经原因可能因原发或继发性卵巢功能低下或受药物影响而抑制卵巢功能，也可见于下丘脑-垂体功能失调、高催乳激素血症等。2. 诊断无排卵：雌激素无周期性变化，常见于无排卵性功能失调性子宫出血、多囊卵巢综合征、某些绝经后子宫出血。3. 监测卵泡发育：应用药物诱导排卵时，测定血中E2作为监测卵泡发育、成熟的指标之一，用以指导HCG用药及确定取卵时间。4. 女性性早熟：临床多以8岁以前出现第二性征发育诊断性早熟，血E2水平升高为诊断性早熟的激素指标之一

31、。雌三醇E3 未孕妇女：(0.310.17) ng/ml。在妊娠妇女则随妊娠周龄而升高：21周，(0.2-5.8) ng/ml;35周，(4.9-15.7) ng/ml;41-42周，(8.2-24.2) ng/ml。男性：(0.240.17) ng/ml。(1) 糖尿病妊娠患者监测E3有助于了解胎盘功能和胎儿发育情况。凡胎儿发育正常者妊娠中期E3浓度逐渐缓慢上升，41-42周达到高峰。一般认为足月妊娠时血清E3应大于31nmol/L，6.9nmol/L、13.9nmol/L者示胎儿危急。24h尿10mg，亦提示胎儿胎盘功能低下。(2) 妊娠高血压综合征在无胎儿窘迫的情况下，早期由于子宫-胎盘

32、血流增加，E3可保持正常。中、重度妊高症由于肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性增强，致胎盘缺血，血清E3可明显下降。(3) 多胎妊娠、超重胎儿血清E3多升高。过期妊娠、胎儿宫内生长迟缓、胎儿肾上腺发育不全、死胎等血清E3下降。孕激素PROG 男：成人0.7-2.1 ng/ml 女： 卵泡期 0.21.6 ng/ml 排卵期 0.32.1 ng/ml 排卵后 1.822.5 ng/ml1. 监测排卵 血孕酮水平在黄体期范围内提示有排卵。若孕酮水平符合有排卵，而无其它原因的不孕患者，需配合B型超声检查观察卵泡发育及排卵过程，以除外黄素化未破裂卵泡综合征。原发性或继发性闭经、无排卵性月经或无排卵性功能

33、失调性子宫出血、多囊卵巢综合征、口服避孕药或长期使用GnRH激动剂，均可使孕酮水平下降。2.了解黄体功能 黄体期血孕酮水平低于生理值，提示黄体功能不足；月经来潮45日血孕酮仍高于生理水平，提示黄体萎缩不全。3. 观察胎盘功能 妊娠期胎盘功能减退时,血孕酮水平下降。异位妊娠时,孕酮水平较低如孕酮水平25ng/ml,基本可除外异位妊娠。单次血清孕酮水平低于黄体期孕酮正常范围，提示为死胎。先兆流产时，孕酮值若有下降趋势，有可能流产。4. 孕酮替代疗法的监测 孕早期切除黄体侧卵巢后,应用孕酮替代疗法时应监测血清孕酮水平。雄激素TESTO成人：男2.279.76 ng/ml 女0.11.23 ng/ml

34、睾酮增高：特发性男性性早熟，家族性男性性早熟，肾上腺皮质增生，肾上腺皮质肿瘤（腺癌显著增高，腺瘤亦常增高），睾丸肿瘤，睾丸女性化，多囊卵巢综合征，卵巢雄性化肿瘤，松果体瘤，特发性多毛症，甲减，雄激素，HCG和雌激素治疗中等。 降低：21三体综合征，尿毒症，肌强直营养不良征，肝功能不全，陷睾症，原发性或继发性性腺功能减退症（Klinefelter综合征，Kallman综合征等），雄激素治疗停药后等。睾酮降低：男性睾丸发育不全、类无睾综合征、下丘脑或垂体性性腺功能减低。此外，也见于甲状腺功能亢进、肝硬化、肾衰竭、严重创伤以及久病体弱患者。垂体催乳激素PRL 参考范围;男性：3.0-16.5 ng/

35、ml 女性：3.8-30.7 ng/ml非妊娠期女性：3.224.9 ng/ml1. 闭经、不孕及月经失调者,无论有无泌乳,均应测PRL,以除外高催乳激素血症。2. 垂体肿瘤患者伴PRL异常增高时，应考虑有垂体催乳激素瘤。3. PRL水平升高还见于性早熟、原发性甲状腺功能低下、卵巢早衰、黄体功能欠佳、长期哺乳、神经精神刺激、药物作用(如氯丙嗪、避孕药、大量雌激素、利血平等)因素等；PRL水平降低多见于垂体功能减退、单纯性催乳激素分泌缺乏症等。垂体促性腺激素（LH和FSH） 参考范围；LH在排卵前期为1.911.6mIU/ml，排卵期为12.9105.2mIU/ml，排卵后期为0.810.5mI

36、U/ml。一般在非排卵期的正常值是6.664.4mIU/ml。FSH在排卵前期为2.07.1mIU/ml，排卵期为2.712.3mIU/ml，排卵后期为14.4mIU/ml。一般以540mIU/ml作为正常值。1. 协助判断闭经原因 FSH及LH水平低于正常值，提示闭经原因在腺垂体或下丘脑。FSH及LH水平均高于正常，病变在卵巢。2. 测定LH峰值 可以估计排卵时间及了解排卵情况，有助于不孕症的治疗及研究避孕药物的作用机制。3. 测定LH/FSH比值 如LH/FSH3表明LH呈高值，FSH处于低水平，有助于诊断多囊卵巢综合征。4. 诊断性早熟 有助于区分真性和假性性早熟。真性性早熟由促性腺激素

37、分泌增多引起，FSH及LH呈周期性变化。假性性早熟的FSH及LH水平较低，且无周期性变化。人绒毛膜促性腺激素（HCG）1、诊断早孕：在受精卵着床后5-7天（未次月经后26天左右）即能测出HCG，以血清HCG值作为诊断早孕的指标，符合率达98-100%2、滋养层细胞肿瘤的诊断、疗效观察和预后判断：葡萄胎和绒毛膜上皮癌患者的血清HCG明显高于正常妊娠，且其分泌量与癌细胞总数以及病情严重程度呈正相关。在治疗过程中动态检测HCG浓度，实际上反映了癌细胞群生长或退化的状态。3、诊断宫外孕：对月经过期而无早孕症状，HCG较高而人工流产未见绒毛组织者，应考虑为宫外孕4、先兆流产的处理依据：临床上发现孕妇有先

38、兆流产的症状时，通过动态检测，观察HCG的变化，对HCG浓度下降不明显而仍接近正常者，可积极保胎，经治疗HCG浓度渐上升，并与妊娠月份相符，多能继续妊娠；而对HCG逐渐下降，且下降至一定程度者，孕妇流产已不可避免，宜人工流产以终止妊娠。5、不全流产的鉴别诊断：流产4周后HCG应转为正常，而不全流产者HCG仍会高于正常；若宫腔感染或产后子宫复旧不全，其HCG在正常范围6、诊断异位HCG肿瘤：作为肿瘤标志物，不同组织脏器肿瘤HCG的阳性检出率高低不一，依次分别为：绒毛细胞管细胞瘤66%，乳腺瘤60%，睾丸瘤51%，卵巢腺瘤36%，胰腺瘤33%，胃癌22%，肝癌17%，肠癌13%，肺癌9%。7、用于

39、生育研究：HCG可作为观察抗早孕药物效果的指标之一。表 妊娠期间血清HCG水平（从着床时间算起）妊娠周数 HCG（IU/L）0.21 55012 5050023 100500034 5001000045 10005000056 1000010000068 1500020000023月 10000100000甲状腺素与性激素甲状腺功能减退可导致闭经，性欲减退及阴毛脱落甲状腺功能亢进患者血清雌激素增加，卵泡期或黄体期LH较正常人高23倍甲亢时睾酮和雄烯二酮增加，睾酮代谢清除率下降五、发展与展望 化学发光免疫分析法具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、设备简单等优点，近年来在环境、临床、食品、药物检测

40、中得到了广泛运用。实际检测常常需要对大量、复杂、低丰度的样品进行测定，因而化学发光免疫分析法逐渐向快速、高通量、高灵敏检测的方向发展。近几年化学发光免疫分析法的研究方向主要涉及到降低温育时间，多组分检测，以及信号放大技术等。这些例子都证明了化学发光免疫分析法具有广泛的应用前景和可操作性。目前我科室开展的成熟项目简介最近两年我科室紧跟临床发展需要，相继开展了：全程CRP，心梗三联，肌钙蛋白定量，D-二聚体，糖化血红蛋白，胱抑素，同型半胱氨酸。这些项目开展一年多来运行成熟，因其敏感性，特异性，准确性及时为临床诊治提供了参考。现对其做一简要介绍。全程CRPC反应蛋白是一种由肝脏合成的急性时相反应蛋白

41、，在正常情况下健康人的CRP值非常低，机体在感染，炎症，组织损伤后CRP浓度显著升高，CRP感染后4h6h开始增高，24h48h达到高峰，峰值可为正常值的1001000倍，在感染消除后其含量急剧下降,一周内可恢复正常，CRP的浓度与疾病情况正相关，且不受机体，日间差，药物治疗，放化疗影响。全程CRP可广泛适用于发热待查及疑似感染的患者的感染诊断与诊断，感染监控，治疗指导，疾病预后等。全程CRP临床应用1,CRP与常用感染指标对比，更灵敏，特异性更好。2、更快更准确的鉴别细菌感染和病毒感染，及时快速帮助医生对病人病情做出判断、治疗。3,监控病情变化及术后感染术前CRP值大于25mg/l的患者,手

42、术发生感染的概率明显高于术前CRP值小于25mg/l的患者,建议:对术前CRP值大于25mg/l的患者,加强消炎治疗,手术时间调整到患者CRP水平降到25mg/l.以下。对术前CRP值小于25mg/l的患者必须立即进行手术时,术后应加强护理,并视情况预防性使用抗生素。当外科，骨伤科，妇科手术后伴有细菌感染，高CRP会持续存在，连续定量测定CRP有重要的临床意义。4、观察抗生素治疗疗效5、心血管疾病hsCRP是心血管炎症病变的生物标志物。个体hsCRP基础水平和未来心血管病的发病关系密切（其水平升高同健康人群未来发生CAD、脑血管病、周围动脉疾病等事件的危险成正相关心梗三联心梗三项快速诊断实验指

43、：肌钙蛋白（CTnI）、肌酸激酶同工酶（CKMB）、肌红蛋白（Myo）。在进行心肌损伤标志物检测时应该同步检测相关标志物。三种标志物Myo、cTnI、CK-MB释放的时间是不同的，同时快速测定三种标志物，较单独测定更方便,更快速，时间上同步更利于对结果的分析和判断，从而更能够做到快速、准确诊断。心梗三联临床应用 肌红蛋白（Myoglobin，Myo）：是目前心肌受损后最早发生异常增加的心肌蛋白标志物,急性心梗（AMI）发作2h后的血清Myo即开始升高，4-6h达高峰。由于Myo无心肌特异性，肌红蛋白的阴性有助于排除AMI的诊断；使用该标志物的最佳战略是利用它的高阴性预测值和灵敏度以排除心肌梗死

44、。 肌钙蛋白I(CTn I)：是目前公认的、特异性最高且持续时间最长的诊断心梗的可靠指标。心肌肌钙蛋白一般在心肌损伤后4-8小时在外周血中逐渐增高，最高值在12-24小时出现。在心肌损伤后7-10天外周血中仍可探测到增高的心肌肌钙蛋白。急性心梗病人的血中cTnI浓度可高达100-300ngml。主要用于对心肌损伤-特别是微小损伤的诊断，还可用于心脏手术时心肌缺血的可靠指标，可用于评价心肌的保护性措施。急性心梗后溶栓治疗的指示物；判断再灌注效果。 CK-MB:是目前临床医生最信赖的AMI检测“金标准”，特异性较高。肌钙蛋白定量肌钙蛋白（cTn）被认为是目前用于ACS诊断最特异的生化marker，

45、它们出现早，最早可在症状发作后2h出现；具有较宽的诊断窗：cTnT（514天），cTnI（410天）。在它们的诊断窗中，cTn增高的幅度要比CK-MB高510倍。由于在无心肌损伤时cTn在血液中含量很低，因此也可用于minor mycardial damage（MMD，微小心肌损伤）的诊断，这是以前酶学指标所难以做到的。cTn还具有判断预后的价值，对任何冠状动脉疾患病人，即便ECG或其他检查（如运动试验）阴性，只要cTn增高，应视为具有高危险性。 肌钙蛋白定量临床应用1.是早期诊断AMI最好的标志物2.对于ST段抬高的AMI病人，迅速地再血管化已成为临床标准的治疗方案。3.估计梗塞面积和心功能4.其他如钝性心肌外伤、心肌挫伤、甲状腺机能减退病人的心肌损伤、药物的心肌毒性、严重脓毒血症和脓