专题1122 目的基因的导入、检测与鉴定

1、1.2.2目的基因的导入、检测与鉴定学习目标1.理解目的基因导入受体细胞的方法。2.掌握检测与鉴定目的基因的方法。课堂导入方式一 通过前面的学习，我们了解了基因工程中目的基因的获取和基因表达载体的构建。 在目的基因与载体连接成重组DNA分子以后，下面的重要工作主要是将其导入受体细胞进 行扩增和筛选，获得大量的重组DNA分子，这就是外源基因的无性繁殖，即克隆(cloning)o 方式二 目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与 鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。在完成将目的基因导入受体细胞这一步骤后， 在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞

2、是很少的。因此，必须通过 一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种，例如，大肠 杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒， 并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了 目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目 的基因完成了表达过程。新知导学 启探究规律一、将目的基因导入受体细胞转化的含义目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。转化的方法导入植物细胞农杆菌转化法：将目的基因导入双子吐植物和裸子植物时最常用方法。目的最因拓中a. 土壤

3、农杆菌的特点：植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌侵染，其TL质粒上的T-DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细 胞的染色体的DNA上。b.方法步骤：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上一转入农杆菌一导入植物细胞一目的基因 插入植物细胞中的染色体DNA上一目的基因表达。基因枪法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。目的基因包裹在微小的金粉粒子或钨粉粒子表面一用基因枪高速射入受体细胞或组织中一目的基因表达。花粉管通道法在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，滴加目的基因，使目的基因借助 花粉管通道进入受体细胞。（2）导入动物细胞方法：显微

4、注射技术。常用受体细胞：受精卵。步骤：目的基因表达载体提纯一取卵（受精卵）一显微注射一受精卵发育一获得具有新性状的转基因动物（3）导入微生物细胞原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。常用的方法：用 B处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（这种细胞称 为感受态细胞）。感受态细胞和重组表达DNA分子在缓冲液中混合，细胞吸收重组表达载体DNA分子。【归纳总结上述方法中，在将目的基因导入受体细胞之前，都必须进行基因表达载体的构建，也就是说导入受体细胞的必须是重组DNA分子，而不是直接导入目的基因。对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因为植物细胞具有全能

5、性。对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能性高，而高度分化的动物体细胞的全能性受到抑制。大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大肠杆菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞（具有多种细胞器），所以酵母菌在用于生产需要加工和分泌的蛋 白质时比大肠杆菌有优势。【例1】农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。下图为农杆菌转化法的示意图，试回答下列问题:Ti质椅石囱福捕A目的基因 的染色体L）N AJr-_ Jl I|_凉0帝外空援 制唾植物蜿 在现晶 源基因号因的粒的辰杆幽性族的植株灿NA #散（1）一般情况下农杆

6、菌不能感染的植物是，利用农杆菌自然条件下感染植物的特点，能实现勺目的。 具体原理是在农杆菌的Ti质粒上存在T-DNA片段，它具有可转移至受体细胞并整合到受体 细胞 上的特点，因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到（部位）即可。（2）根据T-DNA这一转移特点，推测该DNA片段上可能含有控制酶合成的基因。（3）图中c过程中，能促进农杆菌向植物细胞转移的物质 类化合物。（4）植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还可采取（至少 写出两种）。答案（1）单子叶植物 将目的基因导入植物细胞 染色体的DNA T-DNA片段（内部）（2）DNA连接酶、限制（3）酚（4）基因枪法、花粉管通道法解析（1） 一般

7、农杆菌不能感染的植物是单子叶植物，可感染双子叶植物和裸子植物。利用其 感染性，可实现目的基因导入植物细胞的目的。真正可转移至受体细胞并整合到受体细胞染 色体的DNA上的是农杆菌T-DNA片段，因此目的基因必须插入到该部位才能成功。（2）根据 T-DNA这一转移特点，可以推测该DNA片段能控制合成DNA连接酶、限制酶以实现与双子 叶植物细胞染色体DNA的整合。（3）植物细胞受伤后可产生酚类物质，促进农杆菌向植物细 胞转移。（4）植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还有基因枪法和花粉管通道法等。【易错易混农杆菌转化法中两次拼接、两次导入的辨析第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA的中间部

8、位，第二次拼接（非人工操作）指 被插入目的基因的T-DNA被拼接到受体细胞染色体的DNA上；第一次导入是将含目的基 因的Ti质粒重新导入农杆菌，第二次导入（非人工操作）是指含目的基因的T-DNA导入受体 细胞。【例2下列关于目的基因导入受体细胞的描述，不正确的是（）基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济和有效显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法大肠杆菌最常用的转化方法，是使细胞的生理状态发生改变农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法答案 A解析 不同受体细胞导入目的基因的方法不同，每种方法都有利弊。目的基因导入植物细胞 常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济和有效；目的基因导入动

9、物细胞常用的方法是 显微注射技术；目的基因导入大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞，使细 胞的生理状态发生改变，完成转化。二、目的基因的检测与鉴定分子水平的检测检测目的基因是否插入受体细胞的DNA中：DNA分子杂交技术。目的基因片段Y/rJJ WAEQCGTWCi AK、泞基因探呼非壮的基因! 3段ZVV冉yttlOGT放射性标MwxAaf目的基因片段、.JW TET典叩性料邳GCgy/Y/VJ奁 JJ 基”探针目的基因的检测示意图用放射性同位素标记的含有目的基因的单链DNA片段制成基因探针。将转基因生物的基因 组DNA提取出来，和基因探针进行杂交，如果出现杂交带，说明目的基因已插

10、入受体细胞 的DNA中。检测目的基因是否转录：分子杂交技术。将转基因生物提取出来的mRNA和基因探针进行杂交，如果出现杂交带，说明目的基因已 经转录。检测目的基因是否翻译:抗原一抗体杂交技术。从转基因生物提取出来的蛋白质和相应的抗体进行杂交，如果出现杂交带，说明目的基因已 经翻译。个体水平的鉴定抗虫或抗病的接种实验。有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较。【归纳总结1.目的基因的检测与鉴定归纳2.不同分子检测原理的异同目的基因是否转录时，用的探针都在DNA分子、mRNA分子上检测目的基因是否插入、是放射性同位素等标记的含有目的基因的DNA片段。检测原理都是碱基互补配对原则，只 是被检

11、测的物质不同，一个是转基因生物的基因组DNA，一个是转基因生物细胞内的mRNA。进行翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体特异性结合的原理。【例3目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和 检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是()检测受体细胞的染色体上是否有目的基因 检测受体细胞是否有致病基因 检测目 的基因是否转录出了 mRNA 检测目的基因是否翻译出了蛋白质 TOC o 1-5 h z 答案C【例4利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列选项中能说明目 的基因完成了在受体细胞中表达的是()棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因大肠杆菌中检测

12、到人胰岛素基因及其mRNAC-山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D.酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白答案 D解析 基因表达的产物是蛋白质，因此，只有在受体细胞中检测或提取到了相应蛋白质才能 证明目的基因在受体细胞中完成了表达，A、C项只能说明完成了目的基因的导入，B项只 能说明完成了目的基因的导入和目的基因的转录过程。名师点拨】关注基因工程操作过程的四个易误点限制酶剪切目的基因与质粒的次数不同：获取一个目的基因需限制酶剪切2次，共产生4 个黏性末端或平末端，切割质粒一般只需要限制酶剪切1次，产生2个黏性末端或平末端， 因为质粒是环状DNA分子，而目的基因在DNA分子链上。切割目的基因和载体

13、并非只能用同一种限制酶：如果用两种不同限制酶切割后形成的黏 性末端相同时，在DNA连接酶的作用下，目的基因与载体也可以连接起来。目的基因的插入点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应 插入到启动子与终止子之间的部位。基因工程操作过程中只有第三步“将目的基因导入受体细胞没有碱基互补配对现象。学习小结I目的某因的获取苫基因去达截体的构建.国人植物细胞房 将目的基因字人受怵细胞，:导人动物细胞昊：，导人微生物缅施耋尸乂分史技术，目的基因的分子水平检测分子恭交技术普枪删勺鉴定:抗原二抗体梁交i个隹水平的鉴定达标检测 粉测评怖达做美 将目的基因导入玉米茎尖分生区细胞和小鼠受精卵，应

14、分别采用的方法是（）显微注射技术农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法农杆菌转化法显微注射技术基因枪法 显微注射技术答案D解析 玉米是单子叶植物，对单子叶植物来说，常用的方法是基因枪法;对于动物细胞来说， 常用的方法是显微注射技术。 （2017-福建厦门一中期中）下列关于目的基因导入微生物细胞的叙述中，不正确的是（）常用原核生物作为受体细胞，是因为原核生物繁殖快，且多为单细胞，遗传物质相对较 少等受体细胞所处的一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态感受态细胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度常用生理盐水处理细胞，使其处于感受态答案 D解析 因为原核生物繁殖快，且多为单细胞，遗传物质相对

15、较少，故常用原核生物作为受体 细胞；Ca2+处理后细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态，感受态细 胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度；常用Ca2+处理细胞，使其处于感受态。（2017-广东潮南实验学校高二月考）在基因诊断技术中，所用的探针DNA分子中必须存 在一定量的荧光分子或放射性同位素，后者的作用是（）为形成杂交DNA分子提供能量引起探针DNA产生不定向的基因突变作为探针DNA的示踪元素增加探针DNA的相对分子质量答案C解析 DNA探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子，放射性同位素的作 用是作为探针DNA的示踪元素，C项正确。 检测转基因生物染色体DNA

16、上是否插入了目的基因的常用方法是()DNA分子杂交技术B.荧光分子标记技术C放射性同位素标记技术D.显微注射技术答案 A解析 检测目的基因常采用DNA分子杂交技术，即在含有目的基因的DNA片段上用放射 性同位素进行标记，以此作为基因探针，并使基因探针与基因组DNA杂交，若显示出杂交 带，则表明目的基因已插入染色体DNA中。(2016海南，31)基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即 和从 中分离。利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比,cDNA 文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因。在基因表达载体中

17、，启动子是 识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是。将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时，常用的携带目的基因的金属颗粒有和 颗粒。答案(1)人工合成生物材料cDNA文库中只含有叶细胞已转录(或已表达)的基因，而基因组文库中含有该植物的全部 基因RNA聚合酶大肠杆菌(或细菌)金粉钨粉解析(1)获取目的基因主要有两大途径，即人工合成和从自然界已有的物种中分离。在植物的成熟叶片中基因选择性表达，因此由所有RNA反转录形成的cDNA文库中只含 有叶细胞已转录(或已表达)的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因。在基因表达载体中，启动子是RNA聚合酶识别并结合的

18、部位。采用原核生物作为基因表 达载体的受体细胞，由于易于培养，最常选用大肠杆菌(或细菌)。将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时，常用的携带目的基因的金属颗粒有金粉和钨 粉颗粒。课时对点练注重双基强化落实对点训练题组一将目的基因导入受体细胞（2017河南南阳新野一中高二下学期期中）1982年，世界上第一例体型比普通小鼠大1.8 倍的转基因“超级小鼠”培育成功。下列相关叙述正确的是（）将含有目的基因的DNA直接注入到小鼠体内该“超级小鼠”的培育利用到了显微注射技术采用的受体细胞是雌性动物的卵细胞。.目的基因导入受体细胞前不用提纯答案B解析 转基因“超级小鼠”的培育过程为：首先将含有目的基因的表达载

19、体提纯，然后利用 显微注射技术将含目的基因的表达载体导入受精卵，经胚胎早期培养一段时间后，再移植到 雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。 基因工程中因受体细胞不同，目的基因导入的方法也不同，下列叙述不正确的是（）将目的基因导入棉花细胞内常用花粉管通道法B-将目的基因导入老鼠细胞内常用显微注射技术将目的基因导入大肠杆菌内常用感受态细胞转化法将目的基因导入小麦细胞内常用农杆菌转化法答案 D解析小麦是单子叶植物，其受伤后不能分泌酚类物质，农杆菌对它没有感染能力。 在基因工程技术中，可能需要用到C aCl2处理的环节是（）A-目的基因的提取和导入B-目的基因与载体结合C-将目的基因

20、导入受体细胞。.目的基因的检测与鉴定答案 C解析将目的基因导入原核生物受体细胞时，首先用Ca2T处理细胞，使细胞处于一种能吸 收周围环境中DNA分子的生理状态，然后在一定条件下促进感受态细胞吸收DNA分子， 完成转化。题组二目的基因的检测与鉴定常用DNA进行亲子鉴定。其原理是从被测试者的血液或口腔上皮细胞中提取DNA，用 限制性核酸内切酶将DNA样本切成特定的小片段，放进凝胶内，用电泳推动DNA小片段 分离，再使用特别的DNA探针去寻找特定的目的基因。DNA探针与相应的基因凝聚在一 起，然后，利用特别的染料在X光下，便会显示由DNA探针凝聚在一起的黑色条码。被测 试者这种肉眼可见的条码很特别，

21、一半与母亲的吻合，一半与父亲的吻合。反复几次该过程， 每一种探针用于寻找DNA的不同部位形成独特的条码，用几组不同的探针，可得到超过99.9% 的父系分辨率。请问，DNA探针是指（）某一个完整的目的基因B-目的基因片段的特定DNAC-与目的基因相同的特定双链DNA。.与目的基因互补的特定单链DNA答案D解析 根据题干信息“用限制性核酸内切酶将DNA样本切成特定的小片段，放进凝胶内， 用电泳推动DNA小片段分离，再使用特别的DNA探针去寻找特定的目的基因”可知，DNA 探针不是一个完整的目的基因，A项错误；DNA探针不是目的基因片段的特定DNA，B项 错误；“每一种探针用于寻找DNA的不同部位形

22、成独特的条码”，指的是根据碱基互补配 对原则形成的杂交带，所以DNA探针是与目的基因互补的特定单链DNA，C项错误，D项 正确。 在检测抗虫基因是否成功转入棉花基因组的方法中，不属于分子水平的是（）观察害虫吃棉叶是否死亡检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带答案 A解析 A项属于个体生物学水平的鉴定；B、C两项为分子水平的检测，分别利用DNA分 子杂交技术、分子杂交技术，观察目的基因及目的基因转录形成的mRNA能否与DNA探 针进行杂交形成杂交带；D项也为分子水平检测内容，利用抗原一抗

23、体杂交的原理，检测基 因表达产物能否与特定抗体形成杂交带。题组三基因工程基本程序整体分析下图表示一项重要生物技术的关键步骤，X是获得外源基因并能够表达的细胞。下列有 关说法不正确的是（）X是能合成胰岛素的细菌细胞质粒是细胞核或拟核外能自主复制的小型环状DNAC-目的基因与质粒的重组只需要DNA连接酶该细菌的性状被定向改造答案C解析分析题意和图示可知：重组质粒导入的是细菌细胞，所以X是能合成胰岛素的细菌 细胞，A正确；质粒是一种常用载体，是在细胞核或拟核外能自主复制的小型环状DNA， B正确；基因与载体的重组需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶，C错误；基因工程的特 点是能够定向改造生物的性状，D

24、正确。 下列有关基因工程的叙述，正确的是（）基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA聚合酶所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快只要目的基因进入了受体细胞就能成功地实现表达答案 C解析 基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，A错误；限制酶能够识别某种特定 的核苷酸序列，并在特定位点切割磷酸二酯键，B错误；细菌作为受体细胞原因有多个，如 细胞体积小、繁殖周期短、遗传物质少等，C正确；目的基因进入受体细胞中，由于操作失 误和不可预测的干扰等，并不是所有受体细胞都能按照预先设计的方案进行重组和表达，真 正能有效表达的只是一小部分，D错误。基因工程

25、是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，无需进行 碱基互补配对的步骤是（）人工合成目的基因基因表达载体的构建C-将目的基因导入受体细胞。.目的基因的检测与鉴定答案 C解析 将目的基因导入受体细胞过程中没有进行碱基互补配对。综合强化番茄叶片受害虫的损伤后，叶肉细胞迅速合成蛋白酶抑制剂，抑制害虫的消化作用。人 们尝试将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米，以对付猖獗的玉米螟。下图为培育转基因抗虫 玉米的流程图，下列描述正确的是（）目J H 强件11 - Q 星米受体细胞.，转基因玉米国7 甫组Ti质粒用限制性核酸内切酶切割番茄的DNA得到的产物就是蛋白酶抑制剂基因用氯化钙处理玉米受体

26、细胞，有利于含目的基因的重组质粒导入重组Ti质粒应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以启动蛋白酶抑制剂基因的转录若将目的基因导入玉米花粉细胞，通过花药离体培养可获得稳定遗传的转基因玉米 答案C解析 目的基因是用限制性核酸内切酶将DNA酶切后得到的，需筛选；氯化钙用于处理细 菌细胞；基因成功表达的前提是能转录和翻译，转录时需RNA聚合酶识别转录的起点才能 启动；花药离体培养得到的是玉米的单倍体，需再用秋水仙素处理单倍体，使染色体加倍才 能得到稳定遗传的转基因玉米。下图表示细胞膜上乙酰胆碱（一种神经递质）受体基因的克隆技术操作过程，下列相关分 析正确的是（）组炽细胞mRNA-cDNATTjLnLT复

27、合体妃所氏j融座牌秘魏体，I推收细茵、崖立文库分离相关凿落萩很cDNA获得该mRNA的最佳材料是受精卵构建基因表达载体最可能使用的载体是大肠杆菌完成过程必不可少的酶分别是反转录酶、DNA聚合酶探针筛选的目的是淘汰被感染的细菌，获得未被感染的细菌答案 C解析该受体基因在神经细胞中表达，获得该mRNA的最佳材料是神经细胞；构建基因表 达载体最可能使用的载体是质粒；探针筛选的目的是检测是否存在cDNA。蓝藻拟核DNA上有控制叶绿素合成的chlL基因。某科学家通过构建该种生物缺失chlL 基因的变异株细胞，以研究chlL基因对叶绿素合成的控制，技术路线如下图所示，下列相 关叙述错误的是（）ChlL基因

28、红阳庭航;性里闵ChlL基因车蛆基因鹏物咐物W腰基音潸过程应使用不同的限制性核酸内切酶过程都要使用DNA连接酶终止密码子是基因表达载体的重要组成部分若操作成功，可用含红霉素的培养基筛选出该变异株答案C 解析 限制性核酸内切酶有特异性，过程要切割的DNA序列不同，故应使用不同的限 制性核酸内切酶；DNA连接酶的作用是连接被切开的磷酸二酯键，使chlL基因、红霉素抗 性基因与质粒结合；基因表达载体由目的基因、启动子、终止子、标记基因组成，终止密码 子是mRNA上密码子的一种，表示一次翻译的结束；变异株中chlL基因被重组基因替换， 重组基因中有红霉素抗性基因，故可用含红霉素的培养基筛选出该变异株。

29、(2015全国I，40节选)HIV属于反转录病毒，是艾滋病的病原体。回答下列问题：用基因工程方法制备HIV的某蛋白(目的蛋白)时，可先提取HIV中的，以其作为模板，在 的作用下合成,获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与 此蛋白结合的相应分泌蛋白是，该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测 的原理是。答案(1)RNA反转录酶cDNA(或DNA) (2)抗体抗原抗体特异性结合解析(1)HIV是RNA病毒，其核酸是单链RNA，而在基因工程中构建目的基因表达载体 时，载体一般用的是质粒，为双链DNA

30、，故先用反转录酶催化HIV的RNA反转录为DNA 分子再进行基因工程操作。(2)本题涉及到了免疫学方面知识，抗原进入机体后可以产生特 异性免疫反应，产生相应的抗体，抗体与抗原特异性结合。如图是获得转基因抗虫棉的技术流程示意图。A冷却到 H萌A St?暨请回答:A-B利用的技术称为，其中过程需要热稳定的酶才能完成。图中将目的基因导入棉花细胞需要经过过程，该过程为构建，其目的 是使目的基因在受体细胞中稳定存在且可以遗传给下一代，并能表达。上述流程示意图中，将目的基因导入棉花细胞所采用的方法是 法，该方法一般(填“适宜”或“不适宜”)用于将目的基因导入单子叶植物。欲确定抗虫基因在G体内是否表达，在个体水平上需要做 验。如果抗虫基 因导入成功，且与某条染色体的DNA整合起来，该转基因抗虫棉可视为杂合子，将该转基 因抗虫棉自交一代，预计后代中抗虫植株占。答案(1)PCR DNA聚合(Taq