残留溶剂培训讲义——USP467 (2)

1、 USP467残留溶剂1绪 言 与国外的质控理念接轨逐渐采用先进的分析方法和分析理念专属的HPLC方法替代传统的容量法与生物法重视对组分、相关物质（包括光学异构体）的控制重视对残留溶剂的控制重视对粒度的控制重视对晶型的控制用细菌内毒素检查法替代热原检查法基本取消了异常毒性检查2简介ICH关于残留溶剂的定义药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产工艺中，以及在制剂制备过程中使用过或产生的有机挥发物。它们在实际的生产工艺中未能被完全去除。由于残留溶剂没有疗效，故所有的残留溶剂应尽可能除去，以符合产品规范、GMP或其它基本的质量要求。3残留溶剂的基本特征在药品生产过程中使用过；在药品生产过程中应当去

2、除而未除尽；特指有机挥发性化合物。4药品中残留溶剂的特点种类相对固定，ICH规定了69种；在具体样品中具有不确定性；残留量相对较低，一般在痕量或微量范围同一样品中不同溶剂的残留量相差较大5适用范围包括原料、辅料或制剂中所含残留溶剂，因此，当药品生产或纯化过程中会出现这些溶剂时，必须检测残留溶剂。但仅需检测原料药、辅料和制剂生产或精制过程中使用或产生的残留溶剂。适用于所有的剂型和给药途径。短期（30天或6 更短）使用或局部使用时，提高残留溶剂的水平可以接受，应根据具体情况具体分析的方式，提出使用这种残留溶剂水平的正当理由。不适用于临床研究阶段的可能的新原料药、辅料和在临床研究阶段研发的制剂，也不

3、适用于已存在的市售制剂。 7残留溶剂按风险评估的分类 “ 每日允许接触量”（PDE）用于定义药物中可接受的有机溶剂的最大摄入量。应采用多种灵敏度高、选择性好、线形范围宽的检测器按对人类健康的潜在危险分为如下三类一类应该避免使用公认的对人体有致癌作用非常可疑为对人体有致癌作用对环境有危害作用8二类应该限制使用对动物无遗传毒性，但可能存在其他不可逆的毒性，如神经毒性、致畸性。非常可疑存在其他潜在的严重的可逆毒性。三类 溶剂的潜在毒性较低（多数没有进行长期毒性或致癌研究） 残留溶剂种类及限量9确定接触限度的方法 方案一：以ppm为单位的浓度限度 ；方案二：制剂中每一种成分不必符合方法1给定的限度 环

4、氧乙烷的限度 注：环氧乙烷只有在各论中有规定时才需要测定。标准溶液参数和测定的操作方法在各论中都有规定。除另有规定外，限量是10g/g。 10 分析方法 残留溶剂通常使用代表性的色谱技术进行检测，如果可行，工厂应该使用任何描述在药典中，协调通过的检测残留溶剂含量的方法。另外，工厂也可针对特殊的用途自由选择更合适的、经验证的分析方法。若仅存在三类溶剂，可用非专属性的方法如干燥失重来检查。残留溶剂的方法验证应符合方法学的相关内容。11残留溶剂的报告水平 制剂生产商为了满足指南的标准，需要确定在辅料或原料药中残留溶剂含量的信息。以下阐述了辅料或原料药供应商应提供给制剂生产商的信息的一些例子。供应商应

5、适当选择以下的一项。仅可能存在三类溶剂，干燥失重小于0.5。仅可能存在二类溶剂X、Y，全部应低于方法一的限度（这里供应商应将二类溶剂用X、Y）仅可能存在二类溶剂X、Y和三类溶剂，残留的二类溶剂低于方法1的限度，残留的第三类溶剂低于0.5。12如果可能存在一类溶剂，应进行鉴别并界定。“可能存在”指用于工艺最后一步的溶剂和那些用于较前几步工艺的溶剂，经验证的工艺不能全部除去。如果第二类溶剂高于方法1的限度或三类溶剂高于0.5，应鉴别并界定。 13残留溶剂的鉴别、控制以及量化 参照ICH规定的药品中常见的残留溶剂为对象，建立的药品中残留溶剂测定知识库，利用这个知识库可以在未知药品生产工艺时快速、准确

6、、全面地鉴别和检测残留溶剂。测试时，样品应被溶解并释放残留溶剂，因为USP不仅涉及制剂、还包括活性成分和辅料，有些情况下，某些处方的组成不能完全溶解，这种情况下，制剂的残留溶剂应该被撵成粉末以便于释放残留溶剂，为了防止挥发性溶剂的损失，这一操作过程应该尽可能快，14 为避免给色谱系统带来干扰，下列操作过程要求使用“无有机物水”。一类和二类残留溶剂 水溶性物质 方法A 溶液制备 一类标准贮备液移取USP一类残留溶剂混合液RS1.0ml到100-ml容量瓶中，加入9ml二甲基亚砜，用水稀释到刻度，摇匀。移取1.0ml此溶液到另一100-ml容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀。移取1.0ml此溶液到10

7、-ml容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。 15一类标准溶液移取1.0ml一类标准贮备液到适宜的顶空瓶中，加入5ml水，加盖密封，摇匀 2类标准贮备液：移取1.0ml USP2类溶剂A到100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，此为2类标准贮备液A。移取1.0mlUSP2类溶剂B到100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，此为2类标准贮备液B。2类混合A标准溶液：移取1.0ml2类标准贮备液A到合适的顶空瓶中，加5.0ml水，密封，加盖 。2类混合B标准溶液：移取5.0ml2类标准贮备液B到合适的顶空瓶中，加1.0ml水，密封，加盖。 供试贮备液精密称取供试品约250mg到25-ml容量瓶，用水溶解并稀释到刻

8、度，摇匀。 16供试液移取5.0ml供试贮备液到适宜的顶空瓶中，加入1.0ml水，加盖密封，摇匀。一类系统适应性溶液移取1.0ml一类标准贮备液到合适的顶空瓶中，加入5.0ml供试贮备液，加盖密封，摇匀。 气相色谱系统（见色谱法） 色谱柱：0.32-mm 30-m的弹性石英色谱柱，液膜厚1.8-m 的G43，或0.53-mm 30-m的多孔性色谱柱，液膜厚3.0-m 的G43载气：氮气（或氦气）线速度约为35cm/s分流比为1：5 （为了优化灵敏度，可适当调节）柱温：先在40维持20分钟，再以10/min的升温速率升至240，并维持20分钟进样口温度： 140FID检测器温：25017测试步骤

9、系统适应性测试 进样一类标准溶液，一类系统适应性溶液，二类混合A标准溶液，并记录如下参数：一类标准溶液中1,1,1-三氯乙烷的S/N不得小于5；一类系统适应性溶液每个峰的S/N不得小于3；二类混合A标准溶液乙睛与二氯甲烷的分离度R不得小于1.0。 样品测试 选择表5中顶空进样操作参数中的一种，分别进样1.0ml一类标准溶液、二类混合A标准溶液、二类混合B标准溶液、供试液，记录色谱图，并测定主峰响应。若供试液除1,1,1-三氯乙烷的任一峰响应大于或等于一类标准溶液或二类标准溶液（包括混合A和混合B）相应的峰面积或1,1,1-三氯乙烷的峰响应大于或等于150倍1类标准溶液1,1,1-三氯乙烷的峰响

10、应，则需继续按照规程B鉴别该峰；反之，符合本次检测要求。18表5. 顶空进样操作参数19操作步骤B 溶液制备 一类标准贮备液、一类标准溶液、二类标准贮备液、二类混合A标准溶液、二类混合B标准溶液、供试贮备液、供试液、一类系统适应性溶液照操作方法A配制。气相色谱系统（见色谱法） 色谱柱：0.32-mm 30-m的弹性石英色谱柱，液膜厚0.25-m的G16，或0.53-mm 30-m的多孔性色谱柱，液膜厚0.25-m的G16 载气：氮气（或氦气）线速度约为35cm/s分流比为1：5 （为了优化灵敏度，可适当调节） 20柱温：先在50 维持20分钟，然后以6/min的速率升温至165 ，并维持20分

11、钟。进样口温度： 140FID检测器温：250测试步骤系统适应性测试 进样一类标准溶液、一类系统适应性溶液、二类混合A标准溶液，并按操作方法记录峰响应：一类标准溶液中苯的S/N不得小于5；一类系统适应性溶液每个峰的S/N不得小于3；二类混合A标准溶液中乙睛和1，2-二氯乙烯的分离度R不得小于1.0。 样品测试 选择表5中顶空进样操作参数中的一种，分别进样1.0ml一类标准溶液、二类混合A标准溶液，2类混合B标准溶液，测试溶液，记录主峰的响应，若测试溶液中在步骤A中被鉴别的溶剂的峰的响应大于或等于一类标准溶液或二类混合A或B标准溶液中相应的溶剂峰响应，则进行步骤C进行定量， 反之，该物质符合本次

12、检测要求 21操作步骤C 溶液制备1类标准贮备液，1类标准溶液，2类标准贮备液A，2类混合A标准溶液，测试贮备液，测试溶液和1类系统适应性溶液配制方法同步骤A.标准溶液：（分别单独配制通过步骤A和步骤B鉴别和确认的各峰对应的标准溶液。除1,1,1-三氯乙烷溶剂外，1类其它溶剂按照步骤A中的1类标准贮备液的第一步稀释制备第一步稀释溶液。）准确量取通过A步和B步鉴别和确认的各USP参比标准组分到合适的容器中，用水定量稀释浓度为表1或表2对应浓度限量的1/20，如有必要，可逐级稀释.移取1.0ml该溶液到合适的顶空瓶中，加5.0ml水，加盖，密封，摇匀。定位溶液：分别单独配制通过步骤A和B鉴别和确认

13、的定位测试溶液。移取5.0ml测试贮备液到合适的顶空瓶中，加1.0ml标准溶液，加盖，密封，摇匀。22气相色谱系统（见色谱法） 注若操作方法B得到的色谱图比操作方法A的色谱图好，则采用操作方法B的色谱系统。 色谱柱：0.32-mm 30-m的弹性石英色谱柱，液膜厚1.8-m 的G43，或0.53-mm 30-m的多孔性色谱柱，液膜厚3.0-m 的G43载气：氮气（或氦气）线速度约为35cm/s分流比为1：5 （为了优化灵敏度，可适当调节）柱温：先在40维持20分钟，再以10/min的升温速率升至240，并维持20分钟。进样口温度： 140FID检测器温：25023测试步骤系统适应性测试 进样一

14、类标准溶液，一类系统适应性溶液，二类混合A标准溶液，记录峰响应：一类标准溶液的1,1,1-三氯乙烷的S/N不得小于5；一类系统适应性溶液每个峰的S/N不得小于3；二类标准溶液乙睛和二氯甲烷的分离度R不得小于1.0。 样品测试 选择表5中顶空进样操作参数中的一种，分别进样1.0ml标准溶液、供试液，记录色谱图，并测定主峰响应。按以下公式计算供试品中每一种残留溶剂的量，以ppm计：5(C/W)rU /(rST -rU) 式中，C 标准溶液中相应的USP标准溶剂的浓度，ug/ml； W 供试品的称量值，g； rU、rST分别表示供试液和定位测试溶液中各溶剂峰响应。 24非水溶性物质 操作步骤A（下列

15、DMSO可以作为DMF的替代溶剂 ） 溶液制备1类标准储备液：移1.0mlUSP一类溶剂到盛有80mlDMF100ml容量瓶中，用DMF定容。移取1.0ml该溶液到盛有80mlDMF100ml容量瓶中，用DMF定容，保留一部分该溶液作为一类系统适应性溶液。移取1.0ml该溶液到10ml容量瓶中，用DMF定容。1类标准溶液：移取1.0ml1类标准贮备液到合适的盛有5.0ml水的顶空瓶中，加盖密封。 2类混合A标准贮备液：移取1.0mlUSP2类混合A溶剂到盛有80mlDMF100ml容量瓶中，用DMF定容。2类混合A标准溶液：移取1.0ml2类混合A标准贮备液到合适的盛有5.0ml水的顶空瓶中，

16、加盖密封252类混合B标准贮备液：移取0.5mlUSP2类混合B溶剂到10ml容量瓶中，用DMF定容。2类混合B标准溶液：移取1.0ml2类混合B标准贮备液到合适的盛有5.0ml水的顶空瓶中，加盖密封供试贮备液：取500mg样品，精密称定，置10ml容量瓶中，用DMF溶解并定容。 供试液：移取1.0ml测试贮备液到合适的盛有5.0ml水的顶空瓶中，加盖密封。 1类系统适应性溶液：混合5ml测试贮备液和0.5ml储存的1类标准贮备液，移取1.0ml该溶液到合适的盛有5.0ml水的顶空瓶中，加盖密封 气相色谱系统（见色谱法） 色谱柱：0.53-mm 30-m硅胶柱，膜厚3.0-m，G43或0.53

17、-mm 30-m膜厚3.0-m，G43。 26载气：氮气线速度约为35cm/s分流比为1：3（为了优化灵敏度，可适当调节）柱温：40 保持20min，然后以10 /min的速度升到240保持20min 。进样口温度： 140FID检测器温：250测试步骤系统适应性测试 进样一类标准溶液，一类系统适应性溶液，2类混合A标准溶液，记录色谱图：1类标准溶液中1,1,1-三氯乙烷的信噪比不得小于5；1类系统适应性溶液中各色谱峰的信噪比不得小于3，2类混合A标准溶液中乙睛与二氯甲烷的分离度不得小于1.0 。 27供试品测试 选择表5中顶空操作参数3 with a vial pressure of 10p

18、si,进大约1ml1类标准溶液，2类混合A标准溶液，二类混合B标准溶液和测试溶液，记录色谱图：测试溶液中除1,1,1-三氯乙烷外其他色谱峰的响应大于或相当于1类标准溶液或2类混合标准溶液A或B中相应溶剂响应，或测试溶液中1,1,1-三氯乙烷大于或等于150倍1类标准溶液中1,1,1-三氯乙烷的响应；进行步骤B确认鉴别色谱峰，反之，该物质符合本次检测要求。 操作步骤B 溶液制备 1类标准贮备液，1类标准溶液，1类系统适应性溶液，2类标准贮备液，2类混合A标准溶液，2类混合B标准溶液，测试贮备液，测试溶液制备方法同步骤A 。气相色谱系统（见色谱法） 色谱系统同水溶性步骤B，分流比为1：3，为了优化

19、灵敏度度，可调节分流比 28测试步骤 按照表5的顶空进样操作参数3 with a vial pressure of 10psi ，进大约1.0ml1类标准溶液，2类混合A标准溶液，2类混合B标准溶液，测试溶液，记录色谱图，记录主峰响应，若测试溶液中在步骤A中鉴别的色谱峰大于或等于一类标准溶液或2类混合标准溶液A或B，进行步骤C，反之，该物质符合本次检测要求。操作步骤C 溶液制备一类标准贮备液，一类标准溶液，一类系统适应性溶液，二类标准贮备液A，二类混合A标准溶液制备方法同步骤A。标准贮备液：分别单独制备在步骤A和步骤B鉴别和确认的溶剂对应的标准溶液。精密量取按照步骤A和B鉴别和确认的溶剂一定量

20、到合适的容器中，并用水定量稀释，如有必要，可逐级稀释，得到最终浓度为表1或表2浓度限度的1/20 标准溶液：移取1.0ml标准贮备液到合适的盛有5.0ml水的顶空瓶中，加盖密封。 29供试贮备液制备方法同步骤A供试液移取1.0ml测试 贮备液到盛有5.0ml水的合适顶空瓶中，加盖密封 定位测试溶液分别单独制备步骤A和B鉴别和确认的溶剂的定位测试溶液。移取1.0ml测试贮备液到到合适的顶空瓶中，加入1.0ml标准贮备液和4.0ml水，加盖密封。 气相色谱系统（见色谱法） 色谱系统同水溶性步骤C测试步骤 选择表5中顶空参数3 with a vial pressure of 10psi ，分别进大约

21、1.0ml标准溶液，测试溶液，定位测试溶液，记录色谱图：记录主峰响应，按照下式计算各残留溶剂量，ppm10(C/W)rU /(rST- rU)式中， C为标准溶液的浓度 g / mL， W为测试贮备液制备时样品的称量值，rU 和 rST分别代表测试溶液和定位测试溶液中各溶剂峰响应 30三类残留溶剂 如果存在溶剂为3类，当专论中有干失项目或其它特定的溶剂测试方法也是可以的，如果专论中没有干失项目，或者专论中3类溶剂大于50mg /天，则须进行鉴别和定量,程序同上，标准溶液可做适当调整，采用以上的操作方法。反之则需要适当的验证程序。需要时应该使用USP标准品。表1是残留溶剂测定试验应用的流程图。其

22、它分析操作方法 (已被终止使用) 下面的测试程序在具体专论中应用时，可能会做必要的改动。 31 方法 以下操作方法需要具有程序升温功能的气相色谱仪，多孔涂层的开口柱，FID检测器。 溶液制备标准溶液：用无有机物水或各论规定的溶剂配制溶液，使每ml溶液中含有12.0g二氯甲烷，7.6g1,4-二氧六环，1.6 g1，1，2-三氯乙烯，1.2 g氯仿。注每日新鲜配制。供试液精密称取一定量的供试品，用无有机物水或各论规定的溶剂溶解并稀释，使得到的溶液中每ml含有20mg供试品。 32气相色谱系统（见色谱法） 色谱柱：0.53-mm 30-m的弹性石英分析柱，液膜为厚5-m 的化学交联G27固定相，和

23、0.53-mm 5-m的石英保护柱，去活化苯甲基硅氧烷 载气：氦气，线速度约为35cm/s（注：如有尾吹气体，可选用氮气 ）分流比为1：3（为了优化灵敏度，可适当调节）柱温：在35维持5分钟，然后以8/min的速率升至175，接着以35/min的速率升温至260，并在260至少维持16分钟。进样口温度： 70FID检测器温：260测试步骤 33系统适应性测试 取标准溶液进样，记录峰响应：合适的系统应该能使标准溶液中所有成分都能在色谱图上体现出来；任何两种成分的分离度R不得少于1.0；重复进样后各峰响应的相对标准偏差不得大于15。供试品测试 取约1L标准溶液、供试液分别进样，记录色谱图，并测定峰响应。 定性 测试溶液中溶剂峰的鉴别是基于保留时间，色谱图中鉴别的色谱峰可能是下表中列出的有机挥发性杂质，或与之有相同保留的其他挥发性杂质，可以通过质谱检测确定的色谱峰或通过更换固定相的另一支色谱柱。 34 除另有规定外，原料中每种有机挥发性杂质的含量不得超过下表给定的限量。 有机挥发性杂质 限量 (g/g) 氯仿 60