各种ELISA样本处理方法及步骤

1、各种ELISA样本处理方法及步骤可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清以及组 织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。适当的样本预处理是确保 ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的 处理方法。血清血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在 室温下放置2小时或4C过夜，分离出血清（建议倾斜试管或离心管以扩大液 面的横截面，使血清可以更大程度地分离出来）。4C下以1000 xg离心20分 钟，小心收集上清液（血清），立即进行测定。建议在-20C或-80C下将收集 的

2、血清分装保存，避免反复冻融。在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有 过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反 应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还应避免细菌污染， 因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。血浆使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，4C 下以1000 xg离心15分钟，小心收集上清液（血浆）。建议在-20C或-80C 下将收集的血浆分装保存，避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。常见的 抗凝剂包括EDTA，肝素钠，枸橼酸钠等。检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说 明书，查看该

3、试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。细胞培养上清将细胞培养上清液吸入离心管中并以1000 xg离心20分钟，除去细胞 碎片和杂质，收集上清液备用，样本保存在-20C或-80C，避免反复冻融。细胞反复冻融方法：(1)吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，然后加入适量的培养基将培养板上的细胞冲洗干净。悬浮细胞可以省略该步骤。 将细胞悬浮液收集到离心管中，以1000 xg离心10分钟，然后吸去培养 基，用预冷PBS洗涤细胞3次。加入适量的预冷PBS (建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂)重悬细 胞。在6孔培养板中，每个孔需要150-250的PBS来重悬细胞。使样本在-20OC或-80OC条件和室温条件

4、下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解 细胞。 4C下以10,000 xg离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20C或-80T保存，避免反复冻融。组织匀浆 用预冷的PBS（0.01M，PH7.4）冲洗组织以除去表面残留的血液或杂 质。（2） 将组织块称重，然后切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆。 加入适量的预冷PBS （体积取决于组织的重量，9 mL PBS适用于1 g组织，建议使用前立即在PBS中加入适量蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器在冰上 或冰浴中充分匀浆。 将匀浆液吸入离心管中，4C下以5000 xg离心510分钟，收集上清液，保存至-20C或-80C，避免反复冻融。尿液、唾液及其他生物体液以1000 xg离心20分钟，收集上清液，立即进行测定。一般来说，由于ELISA实验只能检测可溶性蛋白质的含量，因此要求样本应清晰透明并离心除去沉淀物或悬浮物质。为确保实验的准确性，-20C或-80C