实验十五胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素

1、重庆医科大学生物化学实验报告年级系班组姓名胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素实验目的：1、学习和掌握影响酶作用的因素。2、熟悉酶的催化作用。实验原理：蛋白质或者多种肽物质在蛋白水解酶的作用下，水解肽键，生成小分子肽或者 氨基酸。蛋白水解酶对肽键具有一定的选择性，在消化道中，几种蛋白水解酶共同作用才能 使蛋白质彻底水解为氨基酸。本实验随着白明胶的不断水解，以还原的银颗粒逐渐脱落下来， 底片逐渐变透明，根据底片是否透明以及透明的程度来判断胰酶的活性的高低。酶是一种生 物催化剂，酶的活性受到多种因素的影响，这些包括酶浓度，底物浓度、温度、pH、抑制 剂和激活剂。实验材料和器材：1、器材曝光定影底片

2、、试管与试管架、吸量管、恒温水浴箱、电热水 浴锅、冰浴。2、试剂 胰酶溶液、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH=5）、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH=7）、 0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH=10）、0.2mol/L HgCl2 溶液（剧毒）、0.2mol/L NaCl。实验步骤:1、酶浓度对酶活性的影响试剂试剂编号1234胰酶溶液（ml）1.51.00.5-蒸馏水（ml）-0.51.01.5磷酸缓冲液（ph=7）3.03.03.03.0放入相同大小曝光底片1张，记录时间，40r水域加热。2、温度对酶活性的影响试剂试管编号1234胰酶溶液（ml）1.01.01.01.0磷酸缓冲液（ph=7）

3、3.03.03.03.0加曝光片前100C水浴40C水浴冰浴冰浴保温观察40C水浴40C水浴40C水浴冰浴放入相同大小曝光底片1张，记录时间，40r水浴，反应溶液应该完全浸没底片。3、pH对酶活性的影响。试剂试管编号123胰酶溶液（ml）111磷酸缓冲液（ph=5）3-磷酸缓冲液（ph=7）-3-磷酸缓冲液（ph=10）-3放入相同大小曝光底片1张，记录时间，40r水浴。4、抑制剂对酶活性的影响试剂试管编号123胰酶溶液（ml）1.01.01.0磷酸缓冲液（ph=7）3.03.03.0Nacl溶液（滴）-3-Hgcl2 溶液（滴）-3放入相同大小曝光底片1张，记录时间，40r水浴。【实验结果】

4、：1、酶浓度对酶活性的影响（表1）2、温度对酶活性的影响（表2）3、pH对酶活性的影响（表3）、抑制剂对酶活性的影响（表4）实验结论：在酶触反应系统中，当底物浓度远远超过酶浓度时，酶触反应速度与酶浓度成正比关系。酶 触反应速度随着酶浓度的增加而加快，随着酶浓度的降低而减慢。温度对酶活性有显著影响。 低温时酶反应速度缓慢。当温度逐渐回升时候，酶触反应速度加快。低温时酶活性虽然很低， 但酶很稳定，不容易发生变形，温度回升后，酶可以恢复活性。达到某一温度时酶触反应速 度最大，酶活性最高，此温度成为酶的最适温度，胰酶的最适温度在40摄氏度左右。胰酶 的最适pH在7左右。Hg离子能抑制胰酶的活性。酶浓度

5、，底物浓度、温度、pH、抑制剂 和激活剂等多种因素，都影响酶的活性。注意事项：1、在研究一种因素对酶的活性的时，需要严格的控制反应中其他因素保持不变， 只能改变要研究的某一种因素。2、掌握好水解程度是本实验的关键之一。3、HgCl2有毒， 操作时要格外小心，严防中毒。思考题：1、除了本试验中观察的因素以外，影响酶活性的因素还有哪些？答：底物浓度等。2、酶反应的最适温度是一个常数吗？它和哪些因素有关？高温和低温对酶活性的影响有何 不同？答：酶的最适温度对于酶不是一个特征性常数，它与反应的条件（如作用时间的长短、底物 浓度、酶浓度、pH等）有关。低温时酶活性降低，温度回升后，酶可以恢复活性，高温时 酶活性降低，适当降低温度，酶可以恢复活性，温度过高时，酶变性，降低温度，不能