环境生态工程实验课件

1、环境生态工程实验 1申慧彦 张瑾 洪桂云 实验一生态环境中生态因子的观测与测定一、实验目的通过本实验使学生了解和掌握生态环境中主要生态因子的观测和测定方法及一些常见的测定仪器的使用方法，并比较不同生态环境中主要生态因子的变化规律。二、实验材料照度计、皮尺、卷尺、记录笔、记录纸、地表温度计、土壤温度计、土壤湿度计，风速测定仪、皮尺、卷尺、记录笔、记录纸等。三、实验原理 任何一种生物都生活在错综复杂的生态环境中，不仅受到各生态因子的制约和束缚，同时也能明显地改变各生态因子。本实验通过对不同生态环境中的主要生态因子的观测与测定，使学生掌握几种主要生态因子的观测和测定方法，并通过不同生态环境及同一生态

2、环境中不同位置的比较，了解生态因子的变化规律，认识生物与环境的相互作用和相互关系。 四、实验步骤（一）光照强度的测定1.选取两种不同类型的生境。2.分别在不同类型生境，均匀选取3个测定点，用照度计测定每一点的光照强度，并记录每次测定的数值。3.选择一空旷无林地（最好地面无植被覆盖）作为对照，随机测定3个点，用照度计测定裸地的光照强度，并记录每次测定的数值。（二）不同生境温湿度的测定在上述同样的生境以及对照地中，实施下述内容的测定：1.地表温湿度的测定（1）从林缘向林地中心均匀选取5个测定点，用地表温度计与湿度计分别测定每一点的地表温湿度，并记录每次测定的数值。（2）同时在空旷无林地随机选取5个

3、点，同样测定地表温度和湿度。2.群落内土壤不同深度温湿度的测定（1）在群落中，随机确定2个测定点，用土壤温度计与土壤湿度计分别测定地表5cm、10cm、15cm、20cm、25cm、30cm、35cm深处的土壤湿度与温度，并记录每次测定的数值。（2）在空旷无林地同样随机选取2个点，同样测定距地表5cm、10cm、15cm、20cm、25cm、30cm、35cm深处的土壤湿度与温度。（三）风速的测定1.在上述同样的群落中，从林缘向林地中心1.5m的高处，均匀选5个点。2.用风速测定仪分别测定每点的风速。3.同时在空旷无林地，随机选取5个点，测定每个点的风速。根据测定结果，列表整理得到的气象数据，

4、并分析不同群落中和空旷无林地中的生态因子及其差异性。五、作业1. 选择几个代表性样地，在样地内重复以上步骤，记录数据，多测几次取其平均值。2. 比较不同样地各生态因子的变化规律。实验二 植物希尔反应的观察 离体叶绿体加到具有适当氢受体（A）溶液中，光照后放出氧气。 2H2O +2A 2AH2+O2 实验中用的氧化剂A是2,6二氯靛酚（2,6-D），是一种蓝色染料，接受电子和H+后被还原成无色。在光下，叶绿体将2,6-D还原，从蓝色到无色。通过测定其光密度的变化，可以得出叶绿体的还原能力。光叶绿体【实验原理】 DCMU (二氯苯基二甲基脲，dichlorophenyl dimethylures,

5、商品名为敌草隆，diuron)等除草剂是作用于光合作用光系统II中质体醌QB结合部位 。它们竞争性地替换与DI蛋白结合着的质体醌QB，导致电子传递受阻，抑制Hill反应的发生。 非环式光合磷酸化与假环式光合磷酸化均可被DCMU所抑制，而环式光合磷酸化则不被DCMU抑制。 叶绿体的提取 将4g新鲜叶片去叶脉后剪碎，放于预冷的研钵，加入4mL预冷的提取液，研磨成匀浆，再加4mL预冷的提取液混匀，将所有的匀浆液用4层纱布过滤，弃去杂质。 收集过滤液于离心管中，41000rpm离心 3min，收集上清液于一新的离心管，弃去沉淀。 4 3000rpm离心5min，弃去上清液，将沉淀悬浮于冷的4mL提取液

6、，即为叶绿体提取液。叶绿素含量的测定 取0.1ml叶绿体悬浮液于7ml离心管，用4.9ml 80丙酮稀释到5ml，混匀后，在652nm下测定吸光度，来计算叶绿素含量。 C(mg/mL)= OD6521/34.5稀释倍数 用预先冷冻的提取液稀释叶绿体悬浮液，总体积8mL，使叶绿体悬浮液浓度约相当于叶绿素浓度为0.04mg/mL。【实验步骤】Hill反应 取9支试管，包好黑纸并编号1-9，按下表所列试剂分别加入9支试管中。 提取缓冲液做参比，600nm读取1号管光密度，分别取0.5mL和1mL叶绿体悬浮液放入2号和3号试管中，立即于600nm读取光密度，再按表中要求加入叶绿体悬浮液于其它试管中，然

7、后把黑纸剥掉, 将4号、6号和8号管放在距光源20cm处，把5号、7号和9号管放在距光源60cm处（注意：试管放在盛有水的烧杯中），10分钟后，立即用黑纸把试管包好放冰浴中，然后于600nm分别读取光密度。试管号提取液/mL叶绿体/mLDCMu/mL2.6-D/mL14.0-1.024.50.5-34.01.0-4和53.50.5-1.06和73.01.0-1.08和9-1.03.01.0【注意事项】叶绿体提取： 在冰浴低温条件下操作， 上清液和沉淀的保留与否。希尔反应: 每管反应的总体积相同，且做好标记； 在反应时，所加溶液为提取液稀释的叶绿体悬浮液，与测定叶绿体含量时用丙酮稀释不同； 光照

8、条件下取放试管时，千万注意不能将水溅到灯泡上（冷水溅到热的灯泡上会引起灯泡爆炸）。 【思考与作业】解释叶绿体浓度和光照强度对希尔反应有何影响？DCMU抑制希尔反应活性的机理何在？为得到理想的实验结果，在实验中应注意的主要问题何在？实验三 逆境条件下的植物体内丙二醛含量的测定16一、实验目的1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。2.了解丙二醛积累对细胞的伤害二、实验原理：硫代巴比妥酸TBA丙二醛3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川） 逆境膜脂的过氧化作用丙二醛酸性粉红色三、实验材料：受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：实验仪器：紫外可见分

9、光光度计 离心机四、实验步骤：1 MDA的提取 称2g叶片，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以12000g 离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为MDA提取液。 2 MDA的测定 取1ml MDA提取液，加3ml 27三氯乙酸和 1ml 2%TBA。混和液在95度水浴中保温30min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定OD值。 五、结果计算以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。 分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(mo

10、l/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(mol/g FW) D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。六、注意事项：0.1-0.5的三氯乙酸对MDATBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmolL-1）可溶

11、性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。思考题：1. 通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？2. 说明膜脂过氧化作用的对植物的影响。3. TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？4. 为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？5. 丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？6. 如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？7. 正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因。实验四 校园内水体富营养化的状态测定-DO的测定25一、概 述1、测定溶解氧

12、的原因：通过测定DO判断水体是否受到污染 是活性污泥处理系统的重要监控指标 为测定BOD5打基础 2、测定方法的选择 碘量法 修正法碘量法 膜电极法 清洁水可直接采用碘量法测定2、测定方法的选择 碘量法 修正法碘量法 膜电极法 叠氮化钠修正法：水样中NO2-N含量0.05mg/L, Fe21mg/L；明矾絮凝修正法：水样有色或有悬浮物；硫酸铜一氨基磺酸絮凝修正法：含有活性污泥悬浊物的水样； 2、测定方法的选择 碘量法 修正法碘量法 膜电极法 根据分子氧透过薄膜的扩散速率来测定水中溶解氧。方法简便、快速，干扰少，可用于现场测定。二、试验目的（1）熟悉碘量法测定水中溶解氧的原理及过程（2）掌握滴定

13、管的使用（3）熟练掌握滴定终点的控制三、碘量法原理 (白色沉淀)水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾，水中溶解氧将低价锰氧化成高价锰，生成四价锰的氢氧化物沉淀 (棕色沉淀) 加酸后，氢氧化物沉淀溶解并与碘离子反应而释放出游离碘。以淀粉作指示剂，用硫代硫酸钠滴定释出碘，可以计算溶解氧的含量四、试验步骤1、取样水样常采集到溶解氧瓶中 ，注意不要在瓶中留有气泡。 四、试验步骤1、取样水样常采集到溶解氧瓶中 ，注意不要在瓶中留有气泡。 2、固定将吸管插入液面下，加入1ml硫酸锰溶液、2ml碱性碘化钾溶液，盖好瓶塞，颠倒混合数次，静置。待棕色沉淀物降至瓶内一半时，再颠倒混合一次，待沉淀物下降到瓶底。一般在取样现

14、场固定。 3、析出碘轻轻打开瓶塞，立即用吸管插入液面下加入2.0 ml硫酸。小心盖好瓶塞，颠倒混合摇匀，至沉淀物全部溶解为止，放置暗处5min。 4、滴定 吸取100.0ml上述溶液于250ml锥形瓶中用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1ml淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录硫代硫酸钠溶液用量。5、计算式中：M硫代硫酸钠溶液浓度（mol/L）； V滴定时消耗硫代硫酸钠溶液体积（ml）。Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment6、标定硫代硫酸钠 硫代硫酸钠不稳定，在放置过程

15、中Na2S2O3浓度会发生改变，故每次用时应进行标定，以确定其当前浓度。 6、标定硫代硫酸钠250ml碘量瓶 + 100ml蒸馏水 + 1g KI + 10.00ml，0.025mol/l重铬酸钾 5ml（15）硫酸 用Na2S2O3滴定到淡黄色 1ml淀粉溶液继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录硫代硫酸钠溶液用量。 摇匀，放置暗处5min计算： 式中，V滴定时消耗硫代硫酸钠溶液体积（ml）五、注意事项（1）如果水样中含有氧化性物质，应预先于水样中加入硫代硫酸钠去除： 用两个溶解氧瓶各取一瓶水样，在其中一瓶加入5ml 1+5硫酸和1g碘化钾，摇匀，此时游离出碘。以淀粉作指示剂，用硫代硫酸钠溶液滴定

16、至蓝色刚褪，记下用量。于另一瓶水样中，加入同样量的硫代硫酸钠溶液，摇匀后，按操作步骤测定。（2）如果水样呈强酸性或强碱性，可用氢氧化钠或硫酸溶液调至中性后测定。 六、思考题（1）取水样时溶解氧瓶内为什么不能含有气泡？（2）加硫酸时为什么要插入液面以下？（3）当碘析出时为什么把溶解氧瓶放置暗处5min？ 实验五 校园内水体富营养化的状态测定-氨氮的测定41一、概 述1、与氮有关的水质指标（1）总氮：紫外分光光度法测定（2）凯式氮：有机氮+氨氮 蒸馏滴定方法测定 （3）氨氮：NH3+NH4+ （组成取决于溶液的pH值) （4）亚硝酸盐氮（5）硝酸盐氮2、水处理系统中氮的转化过程：3、测定含氮物质的

17、原因测定水中各种形态的氮化合物，评价水体被污染和“自净”状况: 当发现水中氨氮或有机氮的浓度很高时，表明水体刚刚受到污染，其潜在的危害较大。 当水中硝酸盐氮浓度高时，表明水已经过生化自净。二、实验目的（1）了解氨氮的几种测定方法（2）掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及有关计算方法（3）熟悉纳氏试剂光度法测定氨氮的原理及过程三、实验方法的选择氨氮的测定方法： 纳氏试剂比色法 苯酚次氯酸盐比色法 水杨酸次氯酸盐比色法 电极法具有操作简便、灵敏等特点。水中钙、镁和铁等金属离子、硫化物、醛和酮类、颜色，以及混浊等均干扰测定，需作相应的预处理。四、实验原理纳氏试剂分光光度法HgI和KI的碱性溶液与氨

18、反应生成淡红棕色胶态化合物，此颜色在较宽的波长范围内具强烈吸收。通常测量用波长在410-425nm范围。本法最低检出浓度为0.025mgL-1（光度法），测定上限为2mgL-1。采用目视比色法，最低检出浓度为0.02mgL-1。水样作适当的预处理后，本法可适用于地面水、地下水、工业废水和生活污水。 五、实验仪器与试剂仪器：500mL凯氏烧瓶、氮球、直形冷凝管、分光光度计、pH计试剂：无氨水 、1molL-1盐酸溶液、1molL-1氢氧化纳溶液 、纳氏试剂、酒石酸钾钠溶液 六、实验步骤1、水样预处理 絮凝沉淀法： 取100ml水样（进水、出水、无氨水） 1ml 10%硫酸锌溶液 25%的NaOH

19、溶液，调节pH至10.5左右，混匀 静置沉淀 过滤（弃去初滤液20ml）2、校准曲线的绘制：（1）配置铵标准使用液： 移取5.00ml铵标准贮备液于500ml容量瓶，定容。此溶液浓度为0.010 。（2）标准色列配置：移取0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00和10.0ml铵标准使用液于50ml比色管中，加水至标线；1.0ml酒石酸钾钠溶液，混匀；1.5ml纳氏试剂，混匀；放置显色10min后，在波长420nm处，用光程10mm比色皿，以蒸馏水为参比，测量吸光度。（3）绘制标准曲线由测得的吸光度，减去零浓度空白管的吸光度后，得到校正吸光度，绘制以氨氮含量（mg）对校正吸光度的校准

20、曲线。. . . . . . . . . . . . .2、水样的测定取适量经预处理后的水样（使氨氮含量不超过0.1mg），加入50ml比色管中，稀释至标线， 1.0ml酒石酸钾钠溶液，混匀；1.5ml纳氏试剂，混匀；放置10min后，在波长420nm处，用光程10mm比色皿，以蒸馏水为参比，测量吸光度。3、计算由水样测得的吸光度减去空白试验的吸光度后，从校准曲线上查得氨氮含量（mg）。Ax=A - A空白 mx由校准曲线查得的氨氮量（mg） V水样体积（ml）. . . . . . . . . . . . .Axmx七、注意事项（1）纳氏试剂中碘化汞与碘化钾的比例，对显色反应的灵敏度有较大影

21、响。静置后生成的沉淀应除去。（2）滤纸中常含痕量铵盐，使用时注意用无氨水洗涤。所用玻璃器皿应避免实验室空气中氨的沾污。 八、思考题（1）预处理絮凝沉淀时PH值为何调至10.5左右?（2）过滤时为什么要弃去初滤液20ml？（3）如何提高校准曲线的精确度？ 九、分光光度法原理（附）1、光的吸收定律（朗伯比耳定律）分光光度计的定量依据是朗伯比耳定律式中：K比例常数，与入射光的波长及物质的性质有关； L液层的厚度； C溶液的浓度。T为透射度（表征光的透过程度），以百分数表示。T100%，则A0； T0%，则A1。2、分光光度计构成电源开关波长旋钮比色皿槽微安表拉杆调百旋钮调零旋钮灵敏度调节旋钮实验六

22、单种及两种以上种子萌发情况比较-植物的相生相克行为601.实验目的通过单种种子不同密度的萌发实验及两种以上种子的混合萌发实验，观测种内邻接效应、种间竞争现象。通过实验加深对邻接效应及竞争排斥原理的理解。2.实验原理Content 03Content 02邻接效应：指一定空间内种群数目(密度)增加， 必定会出现的邻接的个体之间的相互影响。“最后产量衡值法则”，即种群的密度不同，最后产量却都是一样，主要原因是邻接效应对其个体生长的抑制随密度增大而增大。 2.实验原理“倒数产量法则”，反映密度与产量的线性关系（Shinoyaki & Kila，1956） 其方程为：1/W=Ad + B W为产量，d

23、为密度，A、B为常数)。 种子萌发时密度不同而产生的邻接效应 对洋芋、洋葱和白香草木樨的实验证明：发芽种子的密度增加和距离减少，发芽率明显降低（Knapp&FLthmann，1954）。2.实验原理种间竞争，是指两个种在所需环境资源和能量不足的情况下，或因某种必需的环境条件受限制，或因空间不够而发生的相互关系。 在这种相互关系中，对竞争种的个体生长和种群的数量增长都有抑制作用。2.实验原理种间的竞争力，决定于种的生态习性和生态幅度、生长速率、个体大小、抗逆性、叶子和根系的数目、植物的生长习性(一年生还是多年生)、植物化学物质以及禾本科植物的分蘖能力等。种间竞争在决定共存于一起的种类方面起着重要

24、作用。3.仪器、材料仪器 培养皿、滤纸、漂白粉、恒温培养箱材料 莴苣(Aitemisia)、洋葱(Allim cepa)或草木樨(Melilatus)种子(三种任选一种)及黑麦草(Lolim)种子 4.实验方法将莴苣、洋葱、草木樨种子或黑麦草种子按每个培养皿2、10、50、250颗等距离排列于滤纸上，分别加入蒸馏水5 mL，盖好培养皿，置30 恒温箱中培养。每天观察发芽或幼苗生长情况，并作详细记录，填入表3-1和表3-2中，并进行讨论。同样方法做两种以上种子的混合萌发实验。4.实验方法表3-2 邻接效应实验记录表4.实验方法表3-3 竞争现象实验记录表5.结果和讨论将实验结果结合邻接效应及竞争

25、排斥原理进行讨论。思考题 什么是邻接效应，什么是竞争排斥原理？ 同种种子的邻接效应与两种以上种子间的邻接效应在实验过程中哪一类型表现的更显著？实验七 污染胁迫对生物的影响-叶绿素含量的变化72实验目的掌握叶绿素含量的测定了解重金属污染对叶绿素含量的影响了解叶绿素含量在重金属胁迫条件下的变化趋势实验原理高等植物叶绿素分叶绿素a和叶绿素b，其含量的高低是反映植物光合作用能力的一个重要指标。叶绿素含量的变化可以反映污染对植物光合作用的影响。实验仪器与材料仪器：带盖离心管（5ml）、分光光度计、离心机等；材料：小麦、苏丹草、狼尾草、玉米、黄瓜、莫斯科玉米草等；试剂：丙酮水（80%） 、CuSO4、重铬

26、酸钾（Cr6+）系列溶液（0、10、25、30、50mg/L）实验步骤：分组染毒处理实验材料培养各处理组叶片中叶绿素提取测定吸光度计算叶绿素含量统计分析各处理组的差异性实验材料培养：将大小比例均匀的种子用蒸馏水浸泡、吸胀后，移入铺有2层滤纸的培养皿中，置入光照培养箱中培养（2225）。分组染毒处理在种子长出2片真叶后，标记培养皿，分别用5个不同浓度的重金属溶液处理。每组3个平行处理。每天用蒸馏水冲洗1次，再用原组相应浓度的重金属溶液培养。各种材料培养1周后，即可进行叶绿素有提取分析。叶片中叶绿素提取精确称取新鲜植物叶片0.1g，尽量剪碎，放入研钵中，加入少量石英砂研成糊状，用80%的丙酮水分批

27、提取，将丙酮提取液过滤后定容至4ml。精确称取新鲜植物叶片0.1g，尽量剪碎，放入5ml的离心管中，加入80%丙酮水2ml，超声提取30min，浸提1224h（其间每隔3小时摇动30min），再加入2ml丙酮水，离心（4000转、10min），吸取上清液，定容至5ml10ml，备用。（尽量避免光照，以免叶绿素受光分解）。测定吸光度在波长分别为663nm、645nm条件下测定提取液的吸光度。如果浓度较高，适当稀释后比色定量。计算叶绿素含量叶绿素a和b及总叶绿素的浓度分别为：Ca、Cb和CT，可根据下式计算： Ca=12.7A663-2.69A645 Cb=22.9A645-4.68A663 CT

28、=8.02A663+20.21A645式中：A663、A645分别为提取液在波长663nm、645nm下的吸光度。数据处理与实验结果分析：每个处理组的平行测定结果用平均数标准误（ SE）表示，分析不同处理间的差异性。可Excel做图，展示实验结果并分析。X实验八 逆境条件对生物的影响-植物体内游离脯氨酸含量的测定83实验目的： 1、学习脯氨酸含量测定方法； 2、研究盐胁迫等逆境对植物体内脯氨酸含量的影响。 实验原理： 胁迫条件下植物体内脯氨酸大量积累，而且胁迫时间越长,积累的脯氨酸越多；因此植物体内的脯氨酸含量在一定程度上反映了植物受胁迫影响的程度，可作为植物对逆境响应的一个参考指标。 在酸性

29、条件下，茚三酮和脯氨酸反应，生成红色化合物，此产物在520nm波长下具有最大吸收峰，可用分光光度计测定，此法具有专一性。在pH1-7时用人造沸石可以除去一些干扰的氨基酸。 仪器与试剂：1、实验试剂：%磺基水杨酸，甲苯，冰醋酸，人造沸石，酸性茚三酮试剂（25g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6mol/L磷酸中,加热（70）溶解。常温保存期24h，冰箱中保存48h），标准脯氨酸溶液（10mg脯氨酸溶于100ml80乙醇中，浓度为100ug/ml） 、实验仪器：天平，研钵，移液管，水浴锅，离心机，试管，722型分光光度计 实验步骤：1、准备实验材料 提前7-10天培养小麦材料并根据实验目的对其分

30、组处理，以备后用。小麦种子黑暗中25下用蒸馏水浸泡24h,使其充分吸涨，然后将吸涨的种子置于培养皿中黑暗25下萌发48h。将萌发一致的种子播种于培养皿中,用1/2的Hoagland营养液培养.材料在第一片新叶完全展开后分为两组，第一组作为对照,继续浇灌1/2Hoagland溶液；第二组为NaCl处理组，浇灌含0.8%NaCl的1/2Hoagland溶液;继续培养三天后，取地上部分以备实验用。 、制作标准曲线 100ug/ml脯氨酸配置成0、0.5、1.0、5、10、20g/ml一系列浓度的标准溶液。取标准溶液各2ml，加入2ml%磺基水杨酸、ml冰醋酸和ml茚三酮试剂于加塞试管中，充分混匀后在

31、沸水浴中加热显色40min，冷却后加入ml甲苯盖好盖子充分震荡，待其静置分层后，吸取红色甲苯相，于波长520nm测定OD值，以OD值为纵坐标，脯氨酸浓度（ g/ml ）为横坐标绘制标准曲线。3、NaCl胁迫对小麦脯氨酸含量的影响 分别取对照和aCl处理的小麦幼苗的地上部分（芽鞘和叶子）0.3g，用%磺基水杨酸ml研磨提取，匀浆移至试管中，在沸水浴中提取10分钟，加入0.5g人造沸石充分震荡，冷却后转移至离心管中，3000r/min离心10min，取上清液待测。 各取对照和aCl处理的提取上清液ml，分别加入ml蒸馏水， ml冰醋酸和ml. %酸性茚三酮试剂，与上述制作标准曲线一样进行显色，萃取和比色，最后从标准曲线中查得脯氨酸含量。按照公式计算,植物体内脯氨酸含量（ug/g）=A./0.3,其中为查表所得的脯氨酸。 注意事项：配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好现用现配；提取、反应要充分；离心前必须平衡；甲苯有毒，需格外小心。 实验九 人体内微生物菌群分布的测定91一、目的 通