生物化学蛋白质的生物合成翻译PT课件

1、蛋白质的生物合成（翻译）Protein Biosynthesis，Translation蛋白质的生物合成，即翻译，就是将核酸中由 4 种核苷酸序列编码的遗传信息，通过遗传密码破译的方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基酸的排列顺序 。核苷酸三联体决定氨基酸的对应关系主要内容第一节 蛋白质生物合成体系第二节 蛋白质生物合成过程第三节 蛋白质合成后加工和输送第四节 蛋白质生物合成的干扰和抑制蛋白质合成体系Protein Biosynthesis System 第 一 节 20种氨基酸(AA)作为原料酶及众多蛋白因子 如IF、eIF ATP、GTP参与蛋白质生物合成的物质： 三种RNAmRNA（mes

2、senger RNA）rRNA（ribosomal RNA）tRNA（transfer RNA）一、翻译模板mRNA及遗传密码 mRNA是遗传信息的携带者遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子(cistron)。原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位，转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质，为多顺反子(polycistron) mRNA 。真核一个mRNA只编码一种蛋白质，为单顺反子(single cistron) mRNA。 原核生物的多顺反子真核生物的单顺反子非编码序列核蛋白体结合位点起始密码子终止密码子编码序列PPP53蛋白质PPPmG -53蛋白质 mRNA上存在遗传密码m

3、RNA分子上从5至3方向，由AUG开始，每3个核苷酸为一组，决定肽链上某一个氨基酸或蛋白质合成的起始、终止信号，称为三联体密码(triplet coden)。起始密码(initiation coden): AUG 终止密码(termination coden): UAA，UAG，UGA 遗传密码表从mRNA 5端起始密码子AUG到3端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放阅读框架(open reading frame, ORF)。 1. 连续性(commaless)遗传密码的特点编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉。 基

4、因损伤引起mRNA阅读框架内的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变(frameshift mutation)。 Tyr Gly Ser ArgPro Thr Asp2. 简并性(degeneracy)遗传密码中，除色氨酸和甲硫氨酸仅有一个密码子外，其余氨基酸有2、3、4个或多至6个三联体为其编码。2. 简并性(degeneracy)3. 通用性(universal)蛋白质生物合成的整套密码，从原核生物到人类都通用。 少数例外，如动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体。4. 摆动性(wobble)转运氨基酸的tRNA的反密码需要通过碱基互补与mRNA上的遗传密码反向配对结合，但反密码与密码间不严格遵

5、守常见的碱基配对规律，称为摆动配对。 U摆动配对密码子、反密码子配对的摆动现象tRNA反密码子第1位碱基IUGACmRNA密码子第3位碱基U, C, AA, GU, CUG二、核蛋白体是多肽链合成的装置原核生物真核生物核蛋白体小亚基大亚基核蛋白体小亚基大亚基S值70S30S50S80S40S60SrRNA16S-rRNA5S-rRNA23S-rRNA18S-rRNA28S-rRNA5S-rRNA5.8S-rRNA蛋白质rpS 21种rpL 36种rpS 33种rpL 49种 不同细胞核蛋白体的组成 核蛋白体的组成原核生物翻译过程中核蛋白体结构模式:A位：氨基酰位(aminoacyl site)

6、P位：肽酰位(peptidyl site)E位：排出位(exit site)三、tRNA与氨基酸的活化反密码环氨基酸臂tRNA的三级结构示意图氨基酸 + tRNA氨基酰- tRNAATP AMPPPi氨基酰-tRNA合成酶（一）氨基酰-tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetase) 氨基酸的活化 tRNA与酶结合模型tRNA氨基酰-tRNA合成酶ATP第一步反应氨基酸 ATP-E 氨基酰-AMP-E PPi 第二步反应氨基酰-AMP-E tRNA 氨基酰-tRNA AMP E氨基酰-tRNA合成酶对底物氨基酸和tRNA都有高度特异性。氨基酰-tRNA合成酶具有校正活性(p

7、roofreading activity) 。氨基酰-tRNA的表示方法：Ala-tRNAAla Ser-tRNASerMet-tRNAMet 真核生物： Met-tRNAiMet(initiator-tRNA)原核生物： fMet-tRNAifMet (N-formyl methionine)（二）起始肽链合成的氨基酰-tRNA蛋白质生物合成过程 The Process of Protein Biosynthesis 第 二 节 翻译的起始(initiation)翻译的延长(elongation)翻译的终止(termination )整个翻译过程可分为 ：一、肽链合成起始指mRNA和起始氨基

8、酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物 (translational initiation complex)。原核、真核生物各种起始因子的生物功能 e（一）原核生物翻译起始复合物形成1. 核蛋白体大小亚基分离；2. mRNA在小亚基定位结合；3. 起始氨基酰-tRNA的结合； 4. 核蛋白体大亚基结合。IF-3IF-11. 核蛋白体大小亚基分离AUG53IF-3IF-12. mRNA在小亚基定位结合S-D序列：mRNA 起始密码前的一段富含嘌呤核苷酸的序列,可与核糖体小亚基16S-rRNA上富含嘧啶序列相结合。 IF-3IF-1IF-2GTP3. 起始氨基酰tRNA( fMet-t

9、RNAimet )结合到小亚基AUG53IF-3IF-1IF-2GTPGDPPi4. 核蛋白体大亚基结合，起始复合物形成AUG53IF-3IF-1AUG53IF-2GTPIF-2-GTPGDPPi（二）真核生物翻译起始复合物形成核蛋白体大小亚基分离；起始氨基酰-tRNA结合；mRNA在核蛋白体小亚基准确就位；核蛋白体大亚基结合。met40S60SMetMet40S60SmRNAeIF-2B、eIF-3、 eIF-6 elF-3GDP+Pi各种elF释放elF-5ATPADP+PielF4E, elF4G, elF4A, elF4B,PABMetMet-tRNAiMet-elF-2 -GTP真核

10、生物翻译起始复合物形成过程二、肽链合成延长指根据mRNA密码序列的指导，次序添加氨基酸从N端向C端延伸肽链，直到合成终止的过程。又称为核蛋白体循环(ribosomal cycle)包括以下三步：进位(entrance)成肽(peptide bond formation)转位(translocation)延伸过程所需蛋白因子称为延长因子(elongation factor, EF)原核生物：EF-T (EF-Tu, EF-Ts)EF-G真核生物：EF-1 、EF-2 原核延长因子生物功能对应真核延长因子EF-Tu促进氨基酰-tRNA进入A位，结合分解GTPEF-1-EF-Ts调节亚基EF-1-E

11、F-G有转位酶活性，促进mRNA-肽酰-tRNA由A位前移到P位，促进卸载tRNA释放EF-2肽链合成的延长因子 又称注册(registration)（一）进位指根据mRNA下一组遗传密码指导，使相应氨基酰-tRNA进入核蛋白体A位。 延长因子EF-T催化进位（原核生物） TuTsGTPGDPAUG53TuTsGTP（二）成肽是由转肽酶(transpeptidase)催化的肽键形成过程。（三）转位延长因子EF-G有转位酶( translocase )活性，可结合并水解1分子GTP，促进核蛋白体向mRNA的3侧移动 。fMetAUG53fMetTuGTP进位转位成肽 三、肽链合成的终止当mRNA

12、上终止密码出现后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核蛋白体等分离，这些过程称为肽链合成终止。 终止相关的蛋白因子称为释放因子(release factor, RF) 一是识别终止密码，如RF-1特异识别UAA、UAG；而RF-2可识别UAA、UGA。二是诱导转肽酶变为酯酶活性，使肽链从核蛋白体上释放。 释放因子的功能:原核生物释放因子：RF-1，RF-2，RF-3 真核生物释放因子：eRF 原核肽链合成终止过程 UAG53RFCOO-多聚核蛋白体(polysome)使蛋白质合成高速、高效进行。电镜下的多聚核蛋白体现象蛋白质合成后加工和输送Posttranslational

13、 Processing & Protein Transportation第 三 节主要包括一、多肽链折叠为天然三维结构 二、肽链一级结构的修饰三、空间结构的修饰 一、多肽链折叠为天然功能构象蛋白质新生肽链N端在核蛋白体上一出现，肽链的折叠即开始。 一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。促进蛋白折叠功能的大分子:1. 分子伴侣 (molecular chaperon) 2. 蛋白二硫键异构酶 (protein disulfide isomerase, PDI)3. 肽-脯氨酰顺反异构酶 (peptide prolyl cis-trans isomera

14、se, PPI)热休克蛋白(heat shock protein, HSP) 是指细胞在应激原特别是环境高温诱导下所生成的 一组蛋白质。 HSP70、HSP40和GrpE族 2) 伴侣素(chaperonins) 具有独特的双层7-9 元环状结构的寡聚蛋白,它们以依赖ATP 的方式促进体内正常和应急条件下的蛋白质折叠。 GroEL和GroES家族1. 分子伴侣分子伴侣是细胞中一类保守蛋白质，可识别肽链的非天然构象并与之结合，帮助多肽在体内折叠、组装、转运或降解等，完成功能后与之分离，不构成这些蛋白质执行功能时的组份。HSP促进蛋白质折叠基本作用结合保护待折叠多肽片段，再释放该片段进行折叠，形成

15、HSP70和多肽片段依次结合、解离的循环。 HSP40结合待折叠多肽片段 HSP70-ATP复合物 HSP40- HSP70-ADP-多肽复合物 ATP水解GrpE ATPADP复合物解离，释出多肽链片段进行正确折叠 伴侣素的主要作用为非自发性折叠蛋白质提供能折叠形成天然空间构象的微环境。 2、蛋白二硫键异构酶 二硫键异构酶可催化错配二硫键断裂并形成正确二硫键连接，最终使蛋白质形成热力学最稳定的天然构象。3、肽-脯氨酰顺反异构酶 多肽链中肽酰-脯氨酸间的肽键有顺反两种异构体，空间构象明显差别。 肽酰-脯氨酰顺反异构酶可促进上述顺反两种异构体之间的转换。 二、一级结构的修饰（一）肽链N端的修饰（

16、二）个别氨基酸的修饰（三）多肽链的水解修饰鸦片促黑皮质素原(POMC)的水解修饰NC信号肽PMOCKRKR103肽 ( ？)ACTH-LT-MSH-MSHEndophin三、空间结构的修饰（一）亚基聚合 （二）辅基连接（三）疏水脂链的共价连接 蛋白质合成后经过复杂机制，定向输送到最终发挥生物功能的细胞靶部位的过程称为蛋白质的靶向输送。 四、蛋白质合成后的靶向输送蛋白质的靶向输送(protein targeting)所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号，主要为N末端特异氨基酸序列，可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位，这一序列称为信号序列 。 信号序列(signal sequence)靶向输送蛋

17、白信号序列或成分分泌蛋白信号肽内质网腔蛋白信号肽，C端-Lys-Asp-Glu-Leu-COO-(KDEL序列)线粒体蛋白N端靶向序列（2035氨基酸残基）核蛋白核定位序列（-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val-，SV40 T抗原）过氧化体蛋白-Ser-Lys-Leu-（PST序列）溶酶体蛋白Man-6-P（甘露糖-6-磷酸）靶向输送蛋白的信号序列或成分 （一）分泌蛋白的靶向输送真核细胞分泌蛋白等前体合成后靶向输送过程首先要进入内质网。 信号肽(signal peptide) 新生分泌蛋白N端的保守氨基酸序列称信号肽。 信号肽的一级结构信号肽引导真核分泌蛋白进入内质

18、网 （二）线粒体蛋白的靶向输送 （三）细胞核蛋白的靶向输送蛋白质生物合成的干扰和抑制Interference & Inhibition of Protein Biosynthesis第 四 节抗生素(antibiotics)是微生物产生的能够杀灭或抑制细菌的一类药物。抗代谢药物指能干扰生物代谢过程，从而抑制细胞过度生长的药物，如：6-MP。 某些毒素也作用于基因信息传递过程。一、抗生素类抗生素作用点作用原理应用四环素族（金霉素 新霉素、土霉素）链霉素、卡那霉素、新霉素氯霉素、林可霉素红霉素梭链孢酸 放线菌酮嘌呤霉素原核核蛋白体小亚基原核核蛋白体小亚基原核核蛋白体大亚基原核核蛋白体大亚基原核核蛋白体大亚基真核核蛋白体大亚基真核、原核核蛋白体 抑制氨基酰-tRNA与小亚基结合改变构象引起读码错误、抑制起始抑制转肽酶、阻断延长抑制转肽酶、妨碍转位与EFG-GTP结合，抑制肽链延长抑制转肽酶、阻断延长氨基酰-tRNA类似物，进位后引起未成熟肽链脱落抗菌药抗菌药抗菌药抗菌药抗菌