第十四章维生素类药物分析

1、维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。 人体不能合成维生素。发现简史公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年-胡萝卜素被发现。1905年-甲状腺肿大被碘治愈。1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。1922年-维E被发

2、现。1928年-科学家发现维B至少有两种类型。1933年-维E首次用于治疗。1948年-大剂量维C用于治疗炎症。1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。1957年-Q10多酶被发现。1969年-体内超级抗氧化酶被发现。1970年-维C被用于治疗感冒。1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果必需维生素 13种 维生素A，维生素B，维生素C，维生素D，维生素E，维生素K，维生素H（生物素），维生素P，维生素PP，维生素M，维生素T，维生素U，水溶性维生素。必需维生素？外源性：人体自身不可合成，需要通过食物补充； 微量性：人体所需量很少，但

3、是可以发挥巨大作用； 调节性：维生素必需能够调节人体新陈代谢或能量转变； 特异性：缺乏了某种维生素后，人将呈现特有的病态。 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺分类：VitMVitPP常见维生素的生理活性维生素A：有VA1-3，其中VA1活性最高，又称为视黄醇；维生素A是眼睛中视紫质的原料，也是皮肤组织必需的材料，人缺少它会得干眼病、夜盲症等。对人体的生长、视觉和生殖功能都很重要 。 维生素D：又称钙化醇，与钙、磷代谢及植物神经系统、内分泌及血管系统有密切关系，具有皮质类固醇激素样作用。可用于治疗异位性皮炎、红

4、斑狼疮、斑秃、聚合性痤疮、泛发性脓疱性银屑病等 ；与晒太阳有关。维生素E可用于治疗冻疮、多形红斑、结节性红斑、单纯性紫癜、色素性紫癜性皮肤病、肢端紫绀症、痛经以及治疗抑郁症。维生素K促进肝脏合成凝血酶原及血浆因子，与皮质类固醇激素有协同作用。可用于治疗紫癜、慢性荨麻疹、淋巴瘤伴皮肤瘙痒病等。维生素B1可用于治疗湿疹、皮炎、脓皮病、念珠菌病、光感性皮肤病、带状疱疹后遗神经痛、多发性神经炎等。维生素B2可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢性脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、寻常须疮、口周湿疹、日光性皮炎等。维生素B6可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢性脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、湿疹、渗出性银屑病、神经性皮炎、妊娠痒疹、斑秃、唇

5、炎等。维生素B12是体内多种代谢过程中必需的辅酶，参与核蛋白的合成，甲基的转换以及脂肪和糖的代谢，可用于治疗慢性荨麻疹、接触性皮炎、早期银屑病、扁平疣、水痘、带状疱疹、扁平苔癣、脂溢性皮炎、光感性皮肤病等。维生素C主要用于抗炎和抗衰老，可用于治疗紫癜性皮肤病、湿疹、荨麻疹、黄褐斑、黑变病、特发性斑状色素沉着、早期银屑病、砷剂皮炎等。 -H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素A的分析全反式（一）为一个具有共轭多烯侧链的环己烯1. 具有UV吸收2.存在多种立体异构化合物结构与性质一、维生素A 325.5 100% 全反式新维生素Aa 32

6、8 75% 2顺新维生素Ab 320.5 24% 4顺新维生素Ac 310.5 15% 2，4顺异维生素Aa 323 21% 6顺异维生素Ab 324 24% 2，6顺 相对生物效价顺反异构VitA2VitA33.易发生脱氢、脱水、聚合反应鲸醇或有金属离子存在时氧化临床使用时成酯后，溶于植物油中；阴凉干燥处保存，还需加入N2或一定抗氧剂提高稳定性。共轭多烯侧链 易被氧化（二）环氧化物VitA醛VitA酸（三）与三氯化锑发生呈色反应CHCl3溶解性（四）不溶于水，微溶于乙醇；易溶于有机溶剂和植物油等(五)紫外吸收特征共轭多烯紫外吸收；325328nm范围内有最大吸收，可用于鉴别和定量测定；三氯化

7、锑反应（一）条件： 无水、无醇CHCl3鉴别试验二、SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失蓝色紫红max为326nm一个吸收峰UV法（二）max为350390nm三个吸收峰去水VitA（VitA3）VitAUSP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值BP 对照品法 显色剂 三氯化锑TLC法（三）立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（ VitA2）去水维生素A（ VitA3）UV法（三点校正法）（一）含量测定三、三点校正法1. 前提条件：（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。测定对象：VitA醋

8、酸酯第一法 等波长差法第二法 等吸收比法(皂化法)测定对象：VitA醇2. 波长的选择：（1） 1 VitA的max（如VitA酯 328nm）（2） 2 3 分别在1的两侧各选一点第二步：求3、测定法（1）基本步骤: 第一步：A选择，A328测定或A328校正第三步 求效价第四步：求标示量A*D*换算因数*WW*100*标示量100换算因数：单位E1cm数值所相当的效价数（由纯品计算而得） 方法：（2） 第一法维生素A醋酸酯 判断 是否在326329nm之间改用第二法是否 求算 并与规定值比较 规定值 差值 判断差值是否超过03%15%3%第二法第二法 计算 A328（校正） 用A328计算

9、有超过无超过f VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300 A316 A328 A340 A360 A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328 ：0.299 求本品中维生素A的含量？A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328

10、A360/A328 0.555 0.907 1.000 0.811 0 =适用于维生素A醇（等吸收比法） 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、6/7A法 （3）第二法水溶性脂溶性 判断max是否在323327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否 判断 A300 /A325 是否大于是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)03%3%f三氯化锑比色法（二）优点： 简便 快速max 618nm620nm标准曲线法缺点：呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性（三）高效液相色谱法流动相：正己烷异丙醇（9973）检测波长：325

11、nm第二节 维生素B1的分析一、结构与性质1.溶解性(1)易溶于水(2)水溶液呈酸性共轭双键max = 246nm二、性质2.硫色素荧光反应4.与生物碱沉淀试剂反应杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。5.氯化物的特性6.硫元素反应：与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；7.红外光谱特征专属性反应二、鉴别试验（一）硫色素反应硫色素2HVitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应S元素反应Cl-反应（三）其他反应H+三、含量测定喹那啶红亚甲蓝(紫红天蓝)（一）非水溶液滴定法UV法（二）片剂、注射剂= 421（每片）相当于标示量的%=A = EC

12、LChP11 标示量% WEA %cm 100D 100平均片重（每ml）相当于标示量的 标示量% VEA %cm 100D 100注意维生素1的紫外吸收峰随溶液的pH变化而不同：时，最大吸收波长在246nm处；时，2个吸收峰：232233和266；可采用差示分光光度法测定其含量；NaOH（三）硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应原理1、+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇SdAb对照液供试液dSbAC样-=C标特点3、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂分析，体液

13、分析等。硫色素荧光法特点为维生素B1的专属性反应，可用于维生素B1及制剂的含量测定；不受氧化破坏产物的影响，结果较准确；但操作比较复杂，受干扰因素多；氧化剂除了铁氰化钾外，还可以使用氯化汞或者溴化氰；第三节 维生素C的分析L抗坏血酸结构与性质一、（一）结构二烯醇内酯两个手性碳（C4,C5）C3OH的pKaC2OH的pKa2.酸性一元酸（二）性质1.溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）3.旋光性*有活性有活性无活性4.还原性二烯醇结构与碱反应5.水解反应糖类的显色反应50结构与糖类相似6.具糖的性质特征nmnmmaxOHmaxH265l243l-+利用还

14、原性：与氧化剂的反应鉴别试验二、（一）与AgNO3反应（二）与2，6 - 二氯靛酚反应氧化型玫瑰红色还原型蓝色OH（玫瑰色）（无色）与碱性酒石酸铜反应USP与KMnO4反应（三）与其他氧化剂反应（四）糖类的反应（蓝色）(糠醛)（戊糖）50(吡咯)BPHCl（五）UV三、杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查（二）铁、铜离子的检查维生素C原料药 片 剂 注射剂维生素C原料药糠醛缩合呈色催化Vc氧化分解原子吸收法(三)草酸的检查草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对Vc的原料，尤其是注射液，要进行草酸检查；加入CaCl2，比浊法；指示剂 淀粉指示液（一）碘量法四、含量测定原理：利用Vc强的还原性H+ 取

15、本品约，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于的C6H8O6。2、方法原料药（2）酸性环境 稀醋酸 （1）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰3、讨论4.附加剂干扰的排除片剂 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a(二)2，6 - 二氯靛酚滴定法1、原理2、方法自身指示终点法（2）快速滴定 2min内 （

16、1）酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）亦可剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）3、讨论（4）缺点 需经常标定贮存一周不稳定专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的分析（5）优点（三）高效液相色谱法血浆中维生素C的测定 标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存第四节 维生素D的分析一、结构与性质（一）结构维生素 D2(麦角骨化醇) 维生素D3(胆骨化醇) 1.性状 无色针状结晶或白色结晶性粉 末；无臭，无味。2.溶解性 宜溶于有机溶剂，在植物油中 略溶，在水中不溶。3.不稳定性 含有

17、多个烯键，所以极不稳 定，宜氧化变质，效价降低， 毒性增强。（二）性质4旋光性 维生素D2 6个手性碳原子 维生素D3 5个手性碳原子5显色反应 甾类化合物氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色6紫外吸收特性 无水乙醇 265nm 维生素D2 为460490 维生素D3 为465495醋酐硫酸E1cm1%E1%1cm二、鉴别试验 （一）显色反应1与醋酐-浓硫酸反应 氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色醋酐硫酸2与三氯化锑反应 本品1,2-二氯乙烷 三氯化锑试液 橙红色 粉红色 3其它显色反应 维生素D 三氯化铁 橙黄色 二氯丙醇 乙酰氯 绿色 （二）比旋度鉴别无水乙醇溶液 维生素D2 比旋度为102.5

18、至107.5 维生素D3 比旋度为105至112 （三）其它鉴别方法 薄层色谱法、HPLC法制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱 （四）维生素D2、D3的区别反应维生素D2 维生素D3 96%乙醇 10ml 取 乙醇1ml和85%硫酸5ml 红色max570nm 黄色 max495nm 三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查维生素D290%乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀 （二）前维生素D的光照产物四、含量测定正相高效液相色谱法 （一）维生素D测定法 含量以单位表示每单位相当于维生素g 注意：计算的是维生素D及前维生素D经折 算成维生素D的总量测定在半暗室及避免氧化的情况下进行第一法：无

19、干扰杂质第二法：有VA及其他杂质干扰第三法：用第二法时，前 VD峰受杂质干扰 仅VD峰可分离 第一法内标物：邻苯二甲酸二甲酯色谱条件及系统适用性试验：填充剂：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）检测波长：254nm无干扰杂质维生素D3光照前维生素D3反式维生素D3维生素D3速甾醇D3与维生素D3的比保 留 时 间分离度溶液组成先后进样5次，维生素D3 峰面积的 RSD2.0 % 系统适用性试验校正因子测定：维生素D的校正因子: f1=Asmi/Aims前维生素D折算成维生素D的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量测定：计算维生素D及前维生素D折算成 维生素D的总

20、量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第二法第一步：皂化提取供试品OH-加热回流冷却乙醚提取乙醚提取液挥干乙醚残渣甲醇溶解供试溶液A有VA及其他杂质干扰第二步：分离收集供试品溶液ARP-HPLC维生素D前维生素D维生素A及其他杂质叠峰分离收集供试品溶液B维生素D及前维生素D第三步：按第一法进行含量测定（内标法）挥干内标的正己烷溶液溶解第三法第一步：皂化提取同第二法得供试品溶液A第二步：供试品溶液ARP-HPLC维生素D前维生素D维生素A及其他杂质叠峰分离供试品溶液C收集挥干异辛烷溶解90、挥干正己烷溶解前维生素D维生素D第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量用第二法时，前 VD峰受杂质干扰苯并二氢吡喃醇第五节 维生素E的分析 一、结构与性质（一）结构名 称R1R2相对活性-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）dl生育酚醋酸酯（二）性质1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水4、UV：乙醇溶液中UV284nm2、水解性：酯键易水解3、氧化性：无氧条件下十分稳定，200度也不被破坏；7515（一）硝酸反应橙红色二、鉴别试验（橙红色）生育红生育酚HNO3强氧化剂三氯化铁联吡啶反应O（二）生