实验室仪器设备、器皿及用具

1、第二章 实验室仪器设备、器皿(qmn)及用具白凤麟2013.9.12共六十八页一、实验室设置二、实验室仪器三、实验室器皿及用具四、洗涤技术五、灭菌(mi jn)技术六、无菌操作技术 共六十八页 组织培养实验室布局的总体要求 便于隔离(gl) 便于操作 便于灭菌 便于观察一、实验室设置(shzh)基本布局规律根据实验操作程序排列实验室；接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；灭菌室与接种室相邻；其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜。共六十八页基本(jbn)实验室辅助(fzh)实验室实验室组成准备室缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温 室生化分析实验室共六十八页基本(jbn)实验室布

2、局平面图实验台搁架培养(piyng)架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁 架水槽电炉门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室缓冲室无菌室培养室共六十八页植物(zhw)组织培养实验室布局示意图培 养 室准 备 室灭菌室储藏室接种室缓冲室共六十八页组织培养准备(zhnbi)实验室共六十八页1.准备(zhnbi)室1.1 洗涤间 根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿

3、。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子(gu zi)、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。共六十八页超声波清洗器共六十八页 面积60平方米左右，配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉(dinl)、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。1.2培养基配制(pizh)间1.准备室共六十八页共六十八页 配备实验台、高压(goy)灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的

4、要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压(goy)灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。 生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。1.3 消毒(xio d)间1.准备室共六十八页2.缓冲(hunchng)室共六十八页 无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂

5、菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修(zhungxi)，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 3. 无菌操作室共六十八页无菌室共六十八页无菌室共六十八页 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间(fngjin)不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养

6、箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。4. 培养(piyng)室共六十八页设计组培实验室时的注意事项为了减少污染，实验室最好(zu ho)设一走廊且走廊上方最好(zu ho)安装紫外灯；培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。共六十八页二、仪器(yq)与设备1、基本设备 冰箱(bngxing)、电炉、酸度

7、计、纯水器、天平、培养基分装器、搅拌器等。共六十八页酸度计电热(dinr)套共六十八页天平(tinpng)共六十八页培养基分装(fn zhun)器搅拌器共六十八页2、灭菌(mi jn)设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。共六十八页蒸汽压力(yl)灭菌锅共六十八页干热(n r)消毒柜 利用高温干热对微生物有氧化、蛋白质变性、电介质浓缩引起中毒等作用。其中主要是通过氧化作用破坏细胞原生质，使微生物死亡，所以在一定的加热(ji r)时间内可杀死一切微生物。共六十八页无菌瓶顶过滤(gul)装置喷雾消毒器（参考(cnko)图）（参考图）共六十八页接种(jizhng)器具消

8、毒器共六十八页3、无菌操作(cozu)设备 超净工作台共六十八页无菌接种(jizhng)箱共六十八页4、细胞培养设备(shbi) 摇 床共六十八页培养(piyng)架共六十八页恒温(hngwn)振荡培养箱光照(gungzho)培养箱 共六十八页5、细胞学鉴定设备 光学(gungxu)研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜倒置(dozh)显微镜光学显微镜共六十八页1、玻璃器皿三、培养器皿(qmn)及实验用具培养皿三角瓶培养瓶共六十八页2、金属材质(ci zh)用具镊子(ni zi)解剖刀接种针共六十八页1、玻璃器皿洗涤(xd)新购置玻璃器皿1%稀HCl浸渍12h洗衣粉洗涤清水冲洗晾干备用已用过的玻璃

9、器皿四、洗涤(xd)技术共六十八页清洗后器皿内外不可(bk)挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。共六十八页2、塑料用品(yngpn)洗涤新的塑料器皿(qmn)打开即用已用过的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水冲洗2%5%盐酸浸泡30min清水冲洗蒸馏水冲洗晾干备用共六十八页 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后(rnhu)火焰干燥。 3、金属用品(yngpn)洗涤共六十八页（一）、灭菌工作(gngzu)是极其重要的。 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴：有菌：凡是暴露在空气中的物

10、体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。 无菌：高压高温处理（工具、器皿、培养基等） 物理或化学处理； 火烤后的物体； 健康的动植物不与内外部表面接触的组织 内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但 不会影响培养，也不会污染）五. 灭菌(mi jn)技术共六十八页1、物理方法：干热、湿热(sh r)、过滤（0.25微米）紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等。 五. 灭菌(mi jn)技术共六十八页干热灭菌 玻璃器皿、器械 湿热灭菌 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等熏蒸灭菌 接种室、培养室

11、过滤灭菌 液体(yt)培养基、蒸馏水药剂灭菌 培养材料烧灼灭菌 器械、瓶口、棉塞、包头纸辐射灭菌 接种室、培养间（一）各种灭菌(mi jn)方法及其使用范围共六十八页 适用(shyng)于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：150 、40min或120 、120min，如果发现芽孢杆菌，160 、90120min（1）干热(n r)灭菌共六十八页 适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121 维持(wich)2030min注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖。（2）湿热(sh r)灭菌共六十八页 培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生

12、长调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌。 灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.220.45微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至50左右(zuyu)时，加入适量的激素，然后分装。（3）过滤(gul)灭菌共六十八页 主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间(shjin)2030min。注意：关灯后5min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。（4）射线(shxin)灭菌共六十八页 用火焰灼烧达到(d do)灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。（5）火焰灼烧(zhu sho)灭菌共六十八页适用外植体、实

13、验器皿、操作表面(biomin)、皮肤等。几种常用消毒剂的效果比较消 毒 剂使用浓度(%)消毒时间(min.)效 果残液去除难易乙醇70-750.1-3好易新洁尔灭1020530好易氯化汞0.11215最好最难过氧化氢1012515较好最易抗菌素450mgl-13060较好较难次氯酸钙/纳9 10530好易（6）消毒剂共六十八页 长期不用(byng)的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后，把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或杯下面铺一张报纸，以利清洗)，然后将甲醛也倒入碗或杯内，立即

14、出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。（7）熏蒸(xnzhng)灭菌共六十八页 甲醛熏蒸接种室应至少在使用前24小时(xiosh)进行，熏蒸后密闭保持4小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、鼻有强烈刺激作用。因此，可在使用前用氨进行中和。取与甲醛等量的氨水，倒在另一个烧杯里，迅速放入熏蒸室内，使甲醛和氨水发生中和反应，以消除甲醛味，减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前2小时进行。 对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸。共六十八页（二）接种(jizhng)室灭菌空气消毒灭菌接种室超净工作台紫外灯

15、照射70%75%的酒精擦洗培养材料的接种紫外灯照射共六十八页（三）外植体灭菌(mi jn)流水冲洗1020min或更长时间70%75%酒精中浸泡30s0.1%0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗45次在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右备用共六十八页常用消毒(xio d)剂消毒(xio d)灭菌比较表消毒剂使用浓度（%）去除难易消毒时间（min）效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗生素硝酸银9102饱和溶液1210120.11707545（mg/L1易易易易最易较难易中较难5305305302105152100.223060530很好很好很好很好好最好好较好好

16、共六十八页污染(wrn)来源人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。物品因素器皿和用具培养皿：洗热压 玻璃器皿：洗干热（干热箱）或晾干 接种用具：用CCL4布擦湿布擦 泡75%95%酒精烧培养基：湿热培养材料外部细菌：用水冲洗化学药剂处理 内部细菌 茎尖培养 加抗生素：青霉素、利福平操作的空气：洗刷地板95%酒精擦超净工作台 用化学试剂薰蒸六、无菌操作(cozu)技术共六十八页1、实验器具和材料的准备2、用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意(zh y)：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。3、关紫外灯、打开风

17、机，过5-10min进入缓冲间，以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不要下工作台）六、无菌操作(cozu)技术共六十八页4、用7075的酒精拭擦台面并消毒双手。试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器械在其火焰上灼烧(zhu sho)，冷却待用。注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不能灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不能时间太长。共六十八页5、取流水冲洗（至少30min）过的外植体，用一定(ydng)的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗34次，放入无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌的接种器械进

18、行分离、切割或其他处理。6、打开培养瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊子(ni zi)将培养材料置于培养基上，灼烧镊子(ni zi)放回，灼烧瓶口，盖上瓶塞。7、用酒精擦洗工作台和手。进行下一轮操作。共六十八页注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用手触及(ch j)已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。 （3）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。共六十八页（5）吸取营养液、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。（6）工作中不能面向操作区讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。（7）手或相对较脏的物品不能经过(jnggu)开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。共六十八页接种时在近火焰(huyn)处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中。正 确错 误共六十八页整个接种操作应在近火焰处进行，且动作(d