课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题背景1.尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2.细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)脲酶+ CO2NH3+ H2O研究思路1.筛选菌株在微生物学中，将允许特定微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择则培养基。研究思路2.统计菌落数目（1）显微镜直接计数 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。（2）稀释涂布平板法 在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由 一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原

2、先的一个单细胞。优点：能准确统计微生物的实际数目。缺点：不能区分死菌与活菌；研究思路P22实例：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板）。第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值。研究思路稀释涂布平板法计算注意事项为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中， 经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或两个细胞连 在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌 落数而不

3、是用活菌数来表示。研究思路3.设置对照P23实例：你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学 存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照， 以证明培养基是否受到污染。小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高 实验结果的可信度。实验设计1.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取

4、样，将样品装入事先准备好的信封中。注：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。2.制备培养基制备以尿素为唯一氮源的选择培养基实验设计3.样品的稀释与涂布在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行；实验设计注：在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。4.微生物的培养、观察和计数实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。结果分析与评价结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。对照培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已经筛选出一些菌落。课题延伸在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，pH升高。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。本堂小结一、选择培养基的成分 尿素作为唯一的氮源二、鉴定方法 在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，说明细菌能分解尿素。三、统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法（2）间接计数法（稀释涂布平板计数法）设置重复组，选择菌