无菌保证基本原理与实际应用课件

1、无菌保证基本原理与实际应用马涛人员要求足够的数量、适当资质、实践经验书面的岗位工作职责岗位职责不得遗漏、交叉的职责应有明确规定个人承担的职责不应当过多 所有人员必须经过培训并考核职责委托人员卫生-3-前言基本概念药典和GMP对无菌保证水平的定义系指无菌药品中存在活微生物的概率最终灭菌产品：无菌保证水平不超过一百万分之一非最终灭菌产品：以培养基灌装零污染为目标，实际污染率低于1/5000-4-药品达到法定标准的关键三个关键方面能充分杀灭污染微生物已灭菌的产品不被再污染消除带菌产品混入已灭菌产品的风险三个核心问题产品和灭菌工艺设计达标的基础工程设计和建设实现设计目标的硬件日常的运作管理实现设计目标

2、的软件-5-解决问题的钥匙知识无菌保证的理论技能应用知识解决问题的能力消除威胁无菌保证的潜在风险因素-6-7-第一部分无菌保证基本原理-8-微生物基础常见微生物种类基本特点细菌0.5 5 m，生长态时不耐热，部分能形成耐热芽孢真菌5 m 50 m，形成芽孢随空气扩散，不耐热病毒小于0.1 m，一般不耐热-9-微生物分布特点气源性微生物革兰氏阳性菌较多它们可形成芽孢水源性则革兰氏阴性菌居多不会形成芽孢，耐热性差但会产生细菌内毒素G+G-10-芽孢及其特点（一）当某些细菌遇到不良生存环境条件时，为保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬的休眠体，该休眠体即称芽孢（Spore）或孢子。对不良环境如热、化

3、学消毒剂的耐受性远高于生长态细胞环境条件适宜，恢复生长和繁殖-11-芽孢及其特点（二）耐热80 下长期存活100 下有相当高的存活率100 以上死亡过程符合一级动力学方程影响芽孢耐热性的因素芽孢存在的介质受热时的湿度-12-热对微生物的作用当高温破坏了细胞中起生命作用的蛋白质、酶及核酸时，细胞死亡。实验证明微生物受热死亡速度符合一级动力学方程，简称对数规则-13-微生物存活数与灭菌时间关系图 半对数座标Y轴：活微生物数量的对数X轴：时间为10进制普通座标tlgN102030123-14-芽孢的耐热参数：D值指一定温度下将微生物杀灭90 或下降一个对数单位所需要的时间。lgNt1234t1t2D

4、D=t2-t1单位：分钟-15-灭菌温度对D值的影响 灭菌温度低时，达到同一灭菌效果的时间就长115121125lgNtlgN=1D125D121D115-16-F0值：达到同一灭菌效果的概念 F0值即标准灭菌时间指产品在灭菌过程中获得的与标准参照条件（121）相同灭菌效果的曝热时间lgNtLgNoLgNt121117LgNFot1t2-17-不同灭菌温度下的灭菌率灭菌温度 灭菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59灭菌率：为达到与某一温度下灭菌1分钟相同的灭菌效果，在12

5、1下灭菌所需要的灭菌时100灭菌时1分钟，相当于121 灭菌0.008分钟，即Fo值为0.008分钟105灭菌40分钟时，Fo约为 1分钟，能使D值为1分钟的芽孢数量下降1个对数单位lgN2345-2-3-41-5-6-101234576891012分11-lgSAL F0/D lgN0SAL: 无菌保证水平N0:灭菌前微生物污染量无菌保证水平与F0、D值及带菌量的关系-18-19-灭菌过程的Fo 示意-20-“无菌”的标准及理论“每批产品中，污染品概率不得超过一百万分之一”，无菌的这一量化标准应当可以用试验来证明的。用无菌检查法显然是不可能的。然而，每瓶产品微生物存活的概率却可计算的。这就需

6、要测试产品灭菌前微生物污染数、D值，使用对数规则，并用生物指示剂试验来证实。量化指标 + 计算 + 试验，使无菌标准成为工业界可执行的标准 -21-无菌保证水平举例假定灭菌开始时产品中的污染微生物总数（N0）为100cfu/瓶，污染微生物的耐热参数（D）为1分钟，要达到药典规定的SAL的标准，灭菌F0值应达到多少？相当于121 和115 下灭菌多少分钟？答：F0=（-lgSALlgN0）D =（6+ lg100）1= 8分钟，需在121下灭菌8分钟。 换算成115 下的灭菌时间是： F0 /L115=8/0.25=32分钟。-22-某复方氨基酸注射液采用110，30分钟的灭菌程序，起始污染微生

7、物仍为100cfu/瓶，D值为0.5分钟，请计算无菌保证值和残存微生物污染的概率。答：-lgSAL= F0/D - lgN0 = L110t /D - lg100 = 0.0830/0.5-2 = 2.8残存微生物的概率SAL为10-2.80.00158通过无菌检查的概率为(1-0.00158)20=0.969无菌保证水平举例二-23-第二部分实际应用灭菌工艺的选择欧盟灭菌工艺决策树-24-能否121，15分钟 湿热灭菌121，15分钟湿热灭菌是否能否采用F08的湿热灭菌，以达到SAL10-6采用F08的湿热灭菌，以达到SAL10-6是否能否对药液除菌过滤药液除菌过滤及无菌灌封无菌原料，无菌配

8、制无菌灌封是否-25-灭菌工艺与灭菌前微生物控制的关系灭菌工艺灭菌前微生物风险与控制要求类别过度杀灭F012低，不必每批监控污染菌最终灭菌工艺，无菌保证值6残存概率F08高，应每批监控污染菌，尽量加入除菌过滤器，应有原料微生物标准F01.0 灭菌设备的状态和维护关键仪表的校验灭菌工艺再验证状态设备工作日志、故障、修理、确认设备变更管理设备预修计划和实施防止二次污染系统的日常检查方法与记录-55-灭菌现场管理防止混淆的措施灭菌过程中设备故障中止灭菌程序的管理措施-56-57-总结细菌芽孢死亡规律符合一级动力学方程无菌检查有明显的局限性药典规定最终灭菌产品的污染概率不超过百万分之一，即无菌保证水平SAL不超过10-6-lgSAL F0/D lgN0F0值标准灭菌时间D值微生物耐热参数N0灭菌开始前微生