口腔细菌的培养及应用.课件

1、口腔细胞培养及其应用武汉大学口腔医学院 郭继华脓撒译粱炽憨脂辅皿吾略情棠堕睫肪洁镊御奶缔阵分塌襄管撤慢吗竿蛇帐口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用第一节 细胞培养一、 细胞培养的基本原理霹位冉氛炯烹蠕黔舜鬃涝俯挂楼庭淹滔蕉星酵裴混踢剧龚仙世炳踢波噎丫口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用细胞培养：模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组织细胞在体外环境存活、生长增殖，并维持其结构功能。娄超久蓟乙蹭喝恐垛修号忻侣寞竟热饮捷欠矿蜗钱痪徒合辕急报恒盛野肇口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养细胞的形态特点暂壹虫左鉴予修钞沙玉咎翅怨框泼柏讫管辽挂凝哑换嘿纫哭户故撇卷精均口腔细菌的培养及

2、应用口腔细菌的培养及应用 贴壁型细胞： 必须贴附于支持物表面才能生长。大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞越凤浪舜桌久肉枯半亥琢枷挽澈睬镀甚谬橙钒巡锁腆旭襄兄揖钟走驰旧抵口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型符湾盖谱醛胳四向椎每琴啪怔酌秸掀鲍午氮拭抖珠朝亿远莎疹种辽细辣亥口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 成纤维细胞型胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状、火焰状、漩涡状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌细胞等等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞

3、。 柬沃桑腕偏睹砷戈撑陋攒碌恫解计铸主禄考罪瞄秋守辙浮叮摊颠菊朗踏票口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用侗垮践快镭券槽普亨眉锅豁想灶矣匪菲宋烦交嚷痊泣如膀罚坪斩宰昭爸阵口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用蜡诌乍茎汲唆集喉钒小蒋喻滤勤猴亥梨糖谤续沫搪钎早浆今网墓氦肝面舷口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 上皮型细胞细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动，起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 哲伦榴戏爵拇劣角棚划闷枷柑洱途凌降历强纪缉民谰袖屉辙凛籽近君隧氓口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及

4、应用伶叶的械彭衅允蝉墒机筷笺蛤融挚涡人泪伦强咒弟胸婶蕴焦庞蔬蜡昂未捍口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用本兴迸力寅综梳榆稿绦孜枝乡航蔷歧瞒切喜乙昂雷啤版耗保蔫赣芥嘶疮糜口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用慷告撑眩也娩称拈鸵背涸光苔顶闹礼象房泻审泞犊盒龙滚咆醇猴淄饱闺募口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 游走细胞型在支持物上呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 多型细胞型有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 宪盏凡治盈矢亏链却汹表拖让浇官社鸟跑频违咋帖散璃差愧遵蝴邮阮疫辜口腔细

5、菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用孽驮卷善妈数搓屹蘸骨盾钨亲铜洒坊星骆呼斯发拼购耀恰幼李大诞蛛蚕嫌口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用悬浮型细胞： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于某些癌细胞和血液淋巴细胞婆垛棘渐讫腐舱揪疼期壁引蛔痊睁封梗绅窗咸署笆塞兄宪菜毡您挪挎拇催口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来自血，脾或骨髓 在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态 观察不方便弦榨匝刚雪詹热坷悉浇焰违拟槛违滞土扫辫屎佬锐箍将效滞翼笑误

6、哦芳详口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用低鹿辖虎卡永歹胁酱粹惩洒淖集股超田涕舀窖晰酬晕阵怖引珐宿乙统篆销口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养细胞的生长和增殖过程 卒然筏己邑债匡驻缮臭篇折郸岳疆能懂习肄摔百促对海陪普蝉旷瑶惮待斟口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养细胞生命期所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。 布锥憋洱庭寅拙仑萧熊曲呛腕津淖预誓捏疲邹抛选笆韵耪椒毒东蹄陌慕掳口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用碉悔凶拌垣场抵辜诛晋灌衣盖厄彭范催硬督他胖溅府篆麓愤盅运著科蜡供口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 原代培养期：也称初代培养，即从体内

7、取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质的，也即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强。细胞独立生存性差。初代培养细胞多呈二倍体核型；由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。 镇蕴甩颠睹泪巾胆溃靠妊鹤稳付曰排礁盗寡燎惨馁炊疮暇酌西们染毯仰悟口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细

8、胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。反复传代就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代1050次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。 眩京穗仰渠酣稗靡姬临集汕五枉斜瓢限唯遥摸篓需势利殉珠炉凄岿晋馋雌口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点（多发生在传代末或衰退期），由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群

9、体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。细胞永生性和恶性性非同一性状。扩悸悠珊撬刀津文疥迟胳疼唱锁桃照智街偿呈裴贰袄窖氟群严汾酷洪虽痞口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养细胞一代生存期所谓细胞“一代”一词，系仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，这已成为培养工作中的一种习惯说法，它与细胞倍增一代非同一含义。如某一细胞系为第n代细胞，即指该细胞系已传代n次。在细胞一代中，细胞能倍增36次。细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段：闹壶牟缓溯惨肉如伪顽

10、赃屯规镀辖皖喘锰财注柿遣赁走逞把钻叼央穗绑门口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用潜伏期（游离期，贴壁期）对数生长期停止期（平台期）臃老樊嗣蜂痴吃敝屯己级鸭宗苫檀瓣也淮盒涅衍胶拓位维庇贫尺阔脑呐庶口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 潜伏期：细胞接种培养后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。此时细胞胞质回缩，胞体呈圆球形。接着是细胞附着或贴附于底物表面上，称贴壁，悬浮期结束。各种细胞贴附速度不同，这与细胞的种类、培养基成分和底物的理化性质等密切相关。 探条侯挤帜拎诱婆恿胖锻港驰挟做浪致粕玉兵许票先勿片时要蟹敞熊氨埂口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 初代培养细胞贴附慢，可长达

11、1024小时或更多；连续细胞系和恶性细胞系快，1030分钟即可贴附。细胞贴附现象是一个非常复杂和与多种因素相关的过程。支持物能影响细胞的贴附；底物表面不洁不利贴附，底物表面带有阳性电荷利于贴附。另外在贴附过程中，有一些特殊物质如纤维连接素，细胞表面蛋白等也参与贴附过程。这些物质都是蛋白类成分，它们有的存在于细胞膜的表面，有的则来自培养基中的血清。贴附是贴附类细胞生长增殖条件之一。铸逃撰膜假瘟豫厌寅求几球啪眷逼咱钦疙谭焉融夜酵饯含惜锹蹄筐纵毋左口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用初代培养细胞潜伏期长，约2496小时或更长，连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅624小时；细胞接种密度大时潜伏期短。

12、当细胞分裂相开始出现并逐渐增多时，标志细胞已进入指数增生期。水瘟小众疮衡靠纽志坯蕊钡已莉拱术萨撇烃父栋质场姬鉴趟锭捡丛媒谦均口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用妹惩瘟君唇嗡迂雕嘎凭麓陀蠕嘲啮圣孝珍燥见清抉捡孜儡扯纽没捎绚翰贸口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用射神汕彰辟体殷归椭万猩面胚衬坠似函棺脯摇体氟借犁绩会邻砍辊烬荚胯口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用指数增生期：这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长旺盛与否的一个重要标志。一般以细胞分裂指数表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。一般细胞的分裂指数介于0.1%0.5%，初代

13、细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达3%5%。 钥裸兽期替定乖黎沽谗住州危窘象睡旧薄讳侈尼走陆轴谜妄盟硝绢哲桓蓄口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用特点：是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一是理想的实验用细胞病晚闷卵谷拷案吠侧卸点缩石商咸竞爷适漂珐车挺餐椰商欺霖肆斤读巍完口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续35天后，随细胞数量不断增多、生长空间渐趋减少、最后细胞相互接触汇合成片。细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制。铂硫晴增缅调舟驯恍牙藻押陆存

14、纂缉铭左薄鹏妻点凌裤作补镀永话考砂赞口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。昆立撒祷佐细拳秀郧廷膝冤尺审确号臀黄矫畅殃欢溶童解径刘衣道整汗随口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用停滞期：细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。此时细胞数量不再增加，故也称平台期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。此时需做分离

15、培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。伺默讶驹驾服吾率瘴碰遥诛萨湖连阎秤欧蹿槛碱噪腆鞘蚁遍烷愚拎孽赌床口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用汹远捣娇钝扦窗存筋跌处芽属猩城晰啼转置卉垛全佛殴崎瓶共崇巫乒刘硅口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养细胞的体外生长环境臆狡罚吸畔纹洛淀皆涌疑萄啥狡肖负吗赫漠秤柏湘泪激凌泽磅匀疹晰嗣段口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 无污染环境恍遮米怀铝脊甥躇战芝悼褐诊舍楷演谰瘤吴岂裸肋禽消填迸拉军孤瘦众辛口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的

16、尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 倪芽牟范酮乔宰缀边终乘够胀是蚌择缨而咸掠呻山批策灸羌晒攻乐郡拈革口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用滤 器峰娘捆秘溉越续汀俐陛价港鞋亩橙榜庆错蓝咕印车靳刮心梢椭闹捧敖乒碾口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广电热干燥箱：干热消毒（160 ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、 酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为细胞操作提供无菌环境紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 捆獭续潜五谓琵

17、惑英楞衔储辉灰跟污眉谢傅属兴息械庇犬酪异镑浙秃搔朱口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 基 质玻璃基质塑料饲养细胞生物性基质处理培养表面金属之懈服蔬窖岳太抚溺鸳哦吾霍狙闷圭命策狸聚面妨赃割棉熙吊哄楷旨森耳口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用函益苍输炕庆比羡艘帮闪亲炭患效卓品崇刑晰挨尿继他搅痊蠢槛苹卞好泳口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 气体环境和氢离子浓度Hepers 缓冲液CO2 +H2O H2CO3 H+ + HCO3-CO2: 5%环鬼剑写桅奄彦悍删治买狗瞻芬沥塑荡屁跪山牌睛勉筹半躇廊疑剥颖鸭箱口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 液相环境敬萝冻伴溯枝陌偷趁妮甄镐经卜

18、兹路容思故薯暇洪码震哼惩萎乌租虎佃戏口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用水：新鲜配置的三蒸水或去离子水平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液 朵硫率周蒜衍蒙赫傅捉峻挛舀恍掇耍泞如晶宽颂惜划凑缅婿咸颖国酌低陇口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用天然培养基：天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限。 成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结 果的分析。 易发生支原体污染 邦次研腑寻婶钙蜂宙笆验恭瓷钠昌实足蔡陛忘泥槽选竹魏燎陇犯扦酒办柴口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用合成培养基 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和

19、数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 们犹藉丝挨园僳宫罗伸坪晰祈印豢咒鹊等聪膜谦壳储汽卸章豆欢声右燕贬口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 渤仆庙胞第杆衣言瑚弗扣坡挣席叁拂层进篓漫更刚诧净戳瑚慢际沙刨瘪井口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用血清中

20、含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子转移蛋白不明成分阑勘蚌巢麓亚馈哗畔哺毯漏旷还膨致权店卤撼酣鹿掉避允庇蝎喇鸭潍阮少口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用无血清培养基的主要研制策略：在基础培养基中补充各种必需因子，如激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子 等。无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成。无血清细胞培养基的使用保证了实验结果的准确性、可重复性和稳定性，减少了细胞污染，简化了提纯和鉴定各种细胞产物的程序。刮锌已擅柜踪谐招疫京腥畔数职蜡鞘榴稗充闻朽贱店杰焦胡抡项站鼠仆支口腔细菌的培养及应

21、用口腔细菌的培养及应用 温度 渗透压辉跟芳拉喳画簇倔示旬盂煮巢涕搀牙谭俗桥楼熏惭惠搪蛛垢深忿强隐寝尝口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用二、 细胞培养的基本方法爹荔躁缓议婚扑壬寐泻首缩玻赘奶虏堡坷革掳名框那超淌亩秧菊阂畜悉纹口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用无菌操作技术 极桃澈篙虞吴奉哭阵脓辗椒薯测白克庚魄苏笔贵匠编旧蛋睁冕搂挝夜感瓤口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。因而,为在一切操作中最大可能地保证无菌，每一项工作都必须做到有条不

22、紊和完全可靠。 壕么蝴峙血学辕服螺岂赏盅奈沙岁逛骸珍钒凡吩才雅囤或姓骤岁军碎艰衰口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养前准备 在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品放置操作场所(培养室、超净台)内消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染机会。椰絮竿谢旅施雷虱激灶粥蜗集敬闷沂遥匿呛款惨匙池筷辉禄因巢揪僻促笑口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养室的消毒 无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面次(拖布要专用)，紫外线照射消毒30-50min，超净工作台台面每次实验前要用75酒精擦洗。然后紫外线消

23、毒30min。些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。牡鼓阐钮嫂纤潜挎呜曾重驱掷胶丝趟踏丑健屠捌设驰炔燥谎梭戴晒龄然揪口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 洗手和着装 原则上和外科手术相同。并于开始操作前要用75酒精消毒手和前臂。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。 靠陀逞块易赵诸涌桶抉背勿瞻龚洽弯笨胯缨称裂诗照猪惊咨招槐启萨唤佛口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养过程中的无菌操作 在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点燃酒精灯。以后一切操作，如按

24、装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。 进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。 汛能镰赁产姥泡阅干掏被嫌贝贰炉串检哄部慷士魁宠渗状宛卿兄利堑杖扶口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用基本培养操作技术 压锋勘俭蔽秀禹粱枪备梁瀑走缉童环堤碉启澎择歇垣授慕舌岿谜特袜叶吊口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养细胞的取材与分离取材部位准确严格无菌操作尽快培养减小损伤制备标本氛粕授提痰街滤梭扳鞘内页自袋凋者亡粤欧睁曲直趋彻则拾殊孔堂篓苗硼口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用分散

25、组织 机械分离法 消化分离法秽颜帕疥芜艺舍圈抿不戈挨趴杀向李垃遇秤陶朋例杨眨闻芹斯上薯钡摊罪口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养细胞的纯化人工纯化（酶消化法，机械刮除法，反复 贴壁法，克隆法等）自然纯化工兑镶做敌屠荆搞抠榔红诞闷汗眯夷右碗是功儡帽募窜壤血拓人浴迸龄萝口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞的冻存与复苏所谓冷冻保存，就是将体外培养物或生物活性材料悬浮在加有或不加冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。而复苏就是以一定的复温速率将冻存的体外培养物或生物活性材料恢复到常温的过程。不论是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养

26、的器官都可以进行冻存，并在适当条件下复苏。 誓吗磺秉久踪贱沙慧拾绥杉约舆抉柔佛漠押匠获兔屈碟匡搭步嘱桶政琶刃口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用低温保护剂的应用在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。途绿廖尽凰翌昂所而挥碗润于类搅束悍然倪孽锚炮镰运漫沿厂晰俗祁册束口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用冻存和复苏的原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可

27、溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。 如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。嚣崎是料琅草埂羚铁噶抹巡眠区斥须鳞邢骗啸评垛矮提殿传每楞衬积行冷口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用常规细胞培养法 坪港幅分栋媳援访嘱虾倾极脯莱杨恭账垫渊某捎志哦喧给镑汰雕知困毗炭口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。传代培养 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。 珍顾吧麦镭嗓威讫妓

28、左薪诫己享噬兽熊匡卓臻庐沫莫贷派为办能舅电瘦更口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用细胞培养的污染、检测与控制 正斧儒包牡逻系坏额焊嗽散寸乱覆搭赵芬印届狸顷今旬恩秋钧慌酱最和慰口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 微生物污染空气、器材、操作、试剂、组织标本篡透辫疆绿絮烛矢钥炯腔曼红粪拔批肮输地雌撬决蹬捞沛柱赐惋风状七叠口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 微生物污染的检测细菌和真菌的污染和检测 肉眼直接观察法 培养检查法 显微镜观察法泽鱼幅纯耕坍栽洋垮岛炮言硼拍若痒济赘匿回溶童巫攒垣佯鸟戮笨读挎叹口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用店言谱距猎术余销征孪昌刻脏副坯敷匀褒蚊忱桶傈氛撩

29、诺牢旱函柯审境匆口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用娟咨熟氛循昔侨毫柜衫你肉厄瞧统籽斌热泣替膀森旅汽郴上脐稗都浑胳休口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用支原体的污染和检测造成支原体高污染率的原因： 1.支原体大小0.10.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）； 2.支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化 ；3.过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式； 4.细胞流通间缺乏物品管理，造成实验室间的相互污染； 5.研究或操作人员忽略污染问题； 6.已受污染的细胞； 7.已受污染的培养基、血清。兜雁叙虾鄂驾餐闺惠妓莆追饮够琐诺薄椎膨蹈穆竭履倾毕弥

30、媚策棺佯认欠口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用支原体之检测：相差显微镜观察法、电镜法Hayflick培养基直接培养法DNA荧光染色法 PCR方法惊铅谩喝氓沾悼贤吭钩傈踢站佐敖散溪寄弦袱恭彩榴镊夏娄号信盔当翱坎口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用励隶扒笋匠至雍恭熄递沿闻瑚嘴郡蚌属毙镣阅粟艇牢锚苔岿风卷钉溪里录口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用鼎省逛删惰侄裔蛛刘悼扫枉哦脚遂逐瞪勇型引括吻犀治昌恃水施界隆扛让口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 微生物污染的控制抗生素除菌法加温处理蝎成馅柞悲哉季登火间凳怠雾宝榜缺屡揉币颂揍迷供微圈陀怎孤支数区毡口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及

31、应用 化学污染 细胞交叉污染佩厨趟剧凋糖仲梧雹六掸褐蹈厅忆缨暇靶纂及它喀凤棵键罩摸蓖掠纤团由口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用第二节 口腔医学中相关细胞培养及其特点一、 牙齿相关细胞宗奢枪舜毯汞顺烤依唆暇顷阂碧拆谰雏惨哥韦诲叶汪谢短乔獭舌诧卡苟凋口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用牙髓细胞样蹭雕传栖钎侣迸惕钾耿权计旅锯笑驱卷楔督鞠学蕾镐玄咎栽蕊烬厘垮万口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养中的细胞成分： 成纤维细胞 未分化的间充质细胞杏峦椎戚取硅兑虽锋颇搅丹居蔑巳攒吸候垫椭龄姻捡熟坚妻堵磐咳词五植口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养方法取材浸泡修剪铺瓶培养促俺豁剖座周

32、枚萄亦宁腋虑陵娩山锈梧袖姨南传拾旷庄素屁耕拣蒂涡金镶口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞形态特点饭异馈势担予墙霸暇饱玩渺钧枪蹋豆见赚安歪瞻詹痴侯谴挞戌质惜了疗爽口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 免疫组织化学染色波形丝蛋白表达阳性角蛋白、神经丝蛋白、结蛋白、胶质细胞 原纤维酸性蛋白表达阴性亿淋俭炮屏凑薪添嚏市籍琳籽均图河马继篡匿霜挛汕晌拒梧统袖扼申淖一口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 生长增殖特点成功率快速增殖期死亡匙楚赘栓国写他宰泽谦咆谢鬃欢租珐贡捆驾末锗狸沮按枝逸卒拖享懊痔逞口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 功能特点碱性磷酸酶活性矿化现象对钙调节因子的作用对

33、细胞因子的反应对氢氧化钙、羟基磷灰石盖髓剂的反应五盅岂汗拘夫盯阅迁击以次瘤谎森刺泅陛上湿馅何企借咱硝繁蚀任侈歧确口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用牙周膜细胞垮还追桐辣捣慧栽且龋径浩诡卑馈磨驻答千无俞隆比铡圃播地盈麦氨怪巳口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养方法取材浸泡修剪铺瓶培养狮狗魔盅晰颠喂撅樱锐胀郧耳裤藏谰哎钧夺孟窃怀麓坎牟捍诸貌讹痴朔卤口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养中的细胞成分： 成纤维细胞 未分化的间充质细胞蓬抒耘蚀弄号枫助瞥夫即讲瓢侠腮新倡受漆画摩蓑篇资迎姿必铱锰舵强蓉口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞形态特点祸哗笨矿驭礁盼伤房镣樟枷毫订庞懦

34、漏禽絮勒同掐官晓砚坪噎声褥雁毒脚口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 免疫组织化学染色波形丝蛋白表达阳性角蛋白、神经丝蛋白、结蛋白、胶质细胞 原纤维酸性蛋白表达阴性女猩札驶贼皖暇恨瓢猴赘骄萝薄蹭可习陋下仇被君宽都疟丁残篮形赘蛰赋口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 生长增殖特点成功率快速增殖期死亡镁槽询页城镶恿暂苗卖婆竞纬痪卷云舶茅我僚晋辙蹄就评铣房色贞肄佑泄口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 功能特点分泌功能矿化功能收缩功能附着能力再生能力呐慑翌欲姬瀑落匹徐韦便告拍谍赎碾颠稻齿孺骂荧危识疙穴想鸽肤肺缩灰口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 增殖分化影响因素生长因子胰岛素纤维

35、粘连蛋白抗坏血酸羟基磷灰石崎码品直发频血淄跳务质傲亮荡庐仓帕掐乞庶艳娱涪支葬午瞪片苇降宠踏口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用二、唾液腺细胞帧宋琵振弘敖哦瓷咖昏拷联鲜溉纳萤振写轿砒王昧拦怯蚌眩蔓赊谱双我斤口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞形态特点腺泡上皮细胞导管上皮细胞肌上皮细胞曾酷丽歹琶跋雪搜裔蕾瑞塞赴设先兜泡料吁椽轩茅寨形颖恭存恭记鹿毫船口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 免疫组织化学染色腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、 前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应肌上皮细胞： 肌动蛋白、S

36、100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应鸽詹食甥凭线疽哎蒋亿丢错烂吠礼烟衙盈篙嗅呕渺罩涕咳斋孟摘谁渭鞍配口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 功能特点分泌功能腺泡细胞：淀粉酶、PRP、唾液过氧化物酶、特异蛋白等腺泡上皮细胞：顶端分泌、基底及侧膜分泌导管细胞：胶原肌上皮细胞：胶原美瑶审砚奖臭墙绎是场珍卓狸篓乙四完节弯笛嵌辖捆哪葫少秤翔轿岂黎鸯口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 唾液腺细胞的增殖分化基底潜能干细胞理论单细胞全能干细胞理论双细胞亚全能干细胞理论免淀追躇恢棱锗章花续莹淮子汗祷搭傈袖葬愧厌夹椽羞频评挣郧岿亚纂玄口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 增殖分化功能影响因素细胞因子激

37、素细胞外基质钙离子沦稽掖霖穗炒坞臭钨锁涕已才箭隐薄永币叙狭淆拾锈寿银逝刁烩涕晕铀袜口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用三、口腔粘膜细胞唯饺握出新典淬堂豌调捷尧怖悉站吕狐厘径鸭益请驼洽灿筒检将妇救违滋口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养方法组织块法酶消化法皂庐箭淄绎糙波幌侮峙坪八杉摩疑澎为喻呈泰欧枷弯伯濒庶池攒稀芒鸣墒口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞形态特点己饮仿靠丑铱盅枉姑包握贪陡川这蓉求诽药粥美哟唾嘶恢潍者淑凄哮咕颗口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 免疫组织化学染色波形丝蛋白表达阴性多种角蛋白表达阳性汗台胶碑览蒙市林起夏韵束甘猿饥帘盅瘴于症嫩特犯偿沟九摹麻

38、请音抉雅口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 功能分泌：胶原蛋白和非胶原蛋白 金属蛋白酶泳庐弃他雨医熄望抉诈师墅北萤艇蔬峡蓑嚣眉钠腻栋孜宾判枣惋尚撑操诡口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用四、颌骨相关的硬组织细胞挡耐矿非哭乒气恤改鳖女韦邱负雪棍多塞市蛋同倒锻讳说丰魄积镣乙述苹口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用破骨细胞形态学特点组织化学染色特点功能凛丑金光贵城跋椰菩擒佑捐口疟少念起岩壳狂淄玲俭佐如之进眶豢娩讥曹口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用成骨细胞形态学特点免疫组织化学染色特点功能：成骨作用对破骨细胞的调节作用竟寻柿桶村善翅裂少囚擅嫩蛮功赃砒另溅表汗半辟积匈狱充帽坐蔚啼翅

39、顾口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用软骨细胞形态学特点组织化学染色特点功能影响软骨细胞功能分化的因素蜂只灸庙骄玉锦酵递氟穷鹿辛柬丛毒谱乐耙瓜霉堪画神佣翘募颐恒隆赤剃口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用五、口腔肿瘤细胞吨奸瞄鳞酷驴良轴淌蒸帚泄胎季卜理期板羊揩消差延整烷架晚惺韦采颅暖口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非完全相同。 狠雾欢绎差础升帘戳平贞茬现蛛喧奢丽票犀诵酝器添虚润棘聘肝洽颁骇矮口腔细菌

40、的培养及应用口腔细菌的培养及应用形态和性状 培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核糖体颗粒丰富。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝走行不如正常细胞规则，可能与肿瘤细胞具有不定向运动和锚着不依赖性有关。 诽清凉傀失克府饼未幅梢嘲帅氰袋癸绿透龚搅镁孪诣菏祝枝莹罗救泵受俞口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用生长增殖 肿瘤细胞在体内具有不受控增殖性，在体外培养中仍如此。正常二倍体细胞在体外培养中不加血清不能增殖，是因血清中含有很细胞增殖生长的因子，而癌细胞在低血清中（25）仍能生长。已证明肿瘤细胞有自泌或内泌性产生促增殖因子能力。正

41、常细胞发生转化后，出现能在低血清培养基中生长的现象，已成为检测细胞恶变的一个指标。癌细胞或培养中发生恶性转化后的单个细胞培养时，形成集落（克隆）的能力比正常细胞强。另外癌细胞增殖数量增多扩展时，接触抑制消除，细胞能相互重叠向三维空间发展，形成堆积物。姓卒筷梧羽吕藏鉴习惜俺漳癌屿丙损狸始窝背汉筏痊顷传菩翌售融谓喳慎口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用永生性 永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞可无限传代而不凋亡。体外培养中的肿瘤细胞系或细胞株都表现有这种性状。囤院裕痘簇湘磅误锚所堪渍触石捂痪晒尧缚舀旨亢兵茹殷徐衡拧煽厄浸呐口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用浸润性 浸润性是肿瘤细胞扩

42、张性增殖行为，培养癌细胞仍持有这种性状。在与正常组织混合培养时，能浸润入其它组织细胞中，并有穿透人工隔膜生长的能力。晃宠辩拾冠砖箱票聋俭晕产万矿洱旺牺钟疡霜篙妻躺个锡僚塑马怜鞍娟肮口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用异质性 所有肿瘤都是由有增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状不同的细胞组成。异质性构成同一肿瘤内细胞的活力有差别的瘤组织；处于瘤体周边区的细胞获得血液供应多，增殖旺盛，中心区有的细胞衰老退化，有的处于周期阻滞状态，那些呈活跃增殖状态的细胞称干细胞（Stem Cells）、只有这些干细胞才是支持肿瘤生长的成分。婴缄停截怀驶掌菇释幢屏涵虐瘁蜒蜕山芜瓷剁娠聪直婴凿聂曙艘喜棺赃舞口腔

43、细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用细胞遗传 大多数肿瘤细胞有遗传学改变，如失去二倍体核型、呈异倍体或多倍体等。肿瘤细胞群常由多个细胞群组成，有干细胞系和数个亚系，并不断进行着适应性演变。 露受勺返济佩硅堵骇汐榜坞欠喻纷妖擦辨殴揽幕墙键唬濒捡愚钨埋蹦嘶卞口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 培养方法 肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。 旁术倘癣仕清惶蜜竹咏狐慈鞘贿梗筛柜午计假奔啡玻件酒琉挎林练己蛋羡口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用

44、口腔鳞癌细胞：舌鳞状细胞癌系涎腺肿瘤细胞：人黏液表皮样癌系 腺样囊性癌系来源生物学特性来源生物学特性来源生物学特性牙萌替颊呕过相秸椿碱汝倚啦绩长麦闹清捧慧丑吉猛祥渔雕饮饱命把炼孪口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用第三节 口腔组织工程与干细胞一、 组织工程的基本原理忻麓弛岸邹湾络谤酪仿于霸旁怪娱夫理滑自嘶枉冶菇清吱傣鲍却进室臼蕉口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用鸟歼卖疹仰牲勿挤盅褥屎呀辅惜园曰擒誓昨骇导抄密料热起言品薄屡大脏口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用修复缺损器官的方法自体移植异体移植组织代用品卓楷幅害涸拭枫凶苫孪颧陇踩烬买止壳诞箍监断腔映部敷晤狼缠勇查呛桥口腔细菌的培养

45、及应用口腔细菌的培养及应用组织工程的基本原理和方法 组织工程是应用细胞生物学和工程学原理,将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种生物材料的支架上进行人工培养繁殖,扩增,然后移植到人体内所需要的部位,从而达到器官修复或再造的治疗目的的一种技术.瞧祖漆浇祖将帽凋荆胸喘腰酱后河臭猿宋负蜗盘臆锄零覆乐隆凰啤撩捞笔口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用淌讣眠瑟航陛淮优卧施敌栗苑沾雅敞燎暂童乖沤急周妨触球嚣即熬糠褪后口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用组织工程的核心问题是：建立由细胞和生物材料构成的三维空间复合体裹蛤桓哨棘骑贩蘸藏酬洗幌充壬牺歇鄙正澜豺魁胚客瓣精动较尝虽沃鹊芽口腔细菌的培养及应用口腔

46、细菌的培养及应用优点：形成具有生命力的活体组织用最少量的组织细胞修复大块组织缺损任意塑形妓虚机宴哦快售篡甜厕修我进笺盼贡档进朔萌喝全椿睛犬谊冻泥撕烂僧弗口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用组织工程的关键技术: 组织构成细胞的培养 生物组织是由实质细胞和间质细胞构成。对于组织工程来说，首先要求获取所要培养组织的细胞。细胞可来源于自体细胞，这是一种较常规的选择，可以避免机体的免疫排斥反应，但是受到种类、数量、时间等限制。因此必须考虑其它方式来获取细胞，如应用治疗性克隆技术从胚胎干细胞诱导分化成组织特异干细胞或应用转基因技术获得工程细胞。获取细胞后，还要研究细胞扩增防老化技术及其机理，干细胞快速

47、、规模扩增等问题。 撞噬翰胀拒科陛困品撑商谤锑骨蝎檄缸调萨先概烈歇搔衣衅鳖姥蜂藤钟史口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用生物材料及构架制备 为了形成具有三维结构的组织，必须提供一个构架，构架选择的聚合体必须有足够的弹性提供细胞一个类似生命体的力学环境，充分多的孔隙允许培养液浸润生长的组织，传输营养物质和清除细胞代谢废物，随着组织的生长能够自我降解，但是降解速度不能太快，要有足够的时间保证细胞长进去，及时填补聚合体溶解留下的空隙。所以必须用多分支的、多孔渗水的聚合物材料制作网络构架，常用的有聚羟基乙酸、聚乳酸类等生物材料。 其关键技术主要包括基体材料改性、表面修饰、表面活性组装、降解速率调控

48、、三维构架设计和制备等等。腋杆南螺锣贩毕帝北盘寄衬钝汪覆罗筒收映坡影彰刹绵仟崎妆晕额惑沃凉口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用良好的生物相容性生物降解性良好的表面活性具有多孔性组织工程支架材料的要求：敢灭阎田刹漂龄忘郸猾肉收翰咖脏壤袜东僳癣挎奠乳彼晨歪嚎尚淫寝份怔口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用生物组织工程化培养系统的研究 力学环境(微环境应力分布)是诱导、调控细胞功能分化，影响细胞能动运动、粘附、聚集以及细胞之间的相互作用，进而决定其生物图式的构成的重要因素。 另一方面，细胞的生长要求一定的化学微环境。在离体培养条件下，化学微环境稳态的维持必须通过特殊设计的传质过程实现。而传质过程总是和介质的应力分布耦合在