细胞病理学技术及脱落形态

1、 细胞病理学检查技术及临床应用 温州医科大学附属第一医院病理科细胞病理学科 细胞病理学概念及内容细胞病理学( cytopathology)，细胞病理学医师运用病理学相关知识、技术、和个人专业实践经验，通过观察细胞形态及细胞结构变化，并密切结合临床资料，进行综合分析研究并作出疾病诊断的一门科学。又名：临床细胞学(clinical cytology)，诊断细胞学(diagnostic cytology)脱落细胞病理学 细针吸取细胞病理学细胞病理学的起源细胞学从无到有、从小到大，经历了将近100年的历程。1928年巴氏首先宣布用细胞学的方法可诊断肿瘤。1943后逐步推广1970年后成常规近十几年来发

2、展较快，出现细针穿刺细胞学：用于早期癌的诊断、淋巴结、肿块的穿刺诊断等。新技术的应用： 液基细胞学技术 免疫细胞化学 DNA分析技术等细胞病理学的应用防癌普查中筛查识别早期癌及癌前病变对占位性病变（炎症或肿瘤）的性质进行诊断或提供线索癌瘤治疗疗效判断及治疗后的随访妇科检测激素水平，指导内分泌治疗PCR、原位PCR、ICM、免疫组化标记等分子病理学检测 第一节 标本的采集和涂片制作标本采集要求部位准确标本新鲜避免干扰物混入采集方法要科学标本类型一 脱落细胞标本咳出：痰液排泄、导尿或膀胱镜挤压：乳头溢液特点易从病变器官获取标本。标本内常含大量各种不同来源、不同类型的细胞。细胞成份保存较差。标本内可

3、含有各类炎症细胞、巨噬细胞、微生物和外源性污染物。能进行多次采样。 标本类型二 刮擦细胞标本刷取：支气管 子宫颈刮取：乳头 子宫颈 皮肤灌洗液：肺泡灌洗液纤维支气管镜刷片特点能直接从病变器官表面采样。使用纤维镜能直接从器官内部获取标本。细胞成份保存良好。能获得上皮细胞下的病变标本。标本类型三 穿刺细胞标本体表肿块体内器官积液体表肿块的操作程序 体内肿块穿刺CT引导超声引导特点良好的穿刺和制片技术可获得最佳的结果。体内任何实体器官都能通过触摸或引导法采样，如借助内窥镜技术可经直肠、阴道、胸腔、腹腔等部位穿刺。需要借助外科病理学知识解释结果。方法简捷、费用低、创伤小、并发症少、禁忌症少，经皮肤穿刺

4、术无需麻醉，易为患者接受，尤适用于门诊。局限性：对结缔组织、透明变性、血管性病变、大量坏死物、囊性变或出血性病变等，可能采样不足。 涂片制作要求标本新鲜操作轻巧玻片清洁牢固 粘附剂保证一定的涂片数量2张必要的粘附剂处理涂片制作方法直接涂片：间接涂片：液体涂片方法推片法： 液滴置于玻片偏右侧端，用推片30度夹角将玻片上检液轻轻向左推。涂抹法： 由玻片中心经顺时针方向外转圈涂抹 ，或由左到右轻轻涂散开。压拉涂片法：将标本夹于横竖交叉的两张玻片之间，然后移动两张玻片，使之重叠，再边压边拉 获得。 印片法： 此方法为活体组织检查的辅助方法。标本浓缩技术离心法和细胞离心法滤膜过滤法细胞蜡块法液基细胞学技

5、术细胞蜡块（Cell Block）法将固定液中的样本通过离心浓缩后处理成块状，石蜡包埋切片再进行观察的细胞病理学技术。其在某种程度上具备组织切片的特点。优点最大限度保留了细胞成份蜡块可重复多次切片，便于进一步开展特殊染色、免疫细胞化学、分子病理学等辅助检查细胞蜡块制作方法琼脂细胞蜡块血浆凝血块酒精凝集组织胶凝集液基细胞学技术一种半自动或全自动标本处理新技术，是将刷取或灌洗法采集的标本，放在特殊的运送液或保存液中，制成细胞悬液，经过进一步处理，除去血液、蛋白和炎性渗出物，制成分布均匀的薄片。 液基细胞学特点涂片上细胞分布均匀、分布范围小、背景清晰。标本筛查简便、快速。能提高诊断灵敏度和特异度。能

6、显著降低标本的不满意率。能用于原位杂交和免疫细胞化学染色。 涂片固定目的 保持细胞的自然形态 防止细胞自溶和细菌导致的腐败固定液作用 凝固 沉淀细胞内蛋白质和破坏细胞内的溶酶体酶 保持细胞形态 使细胞结构清晰 易于着色固定液 95%酒精 乙醚乙醇 氯仿乙醇固定方法 带湿固定 潮干固定 空气干燥固定 瑞氏染色标本 喷雾固定固定时间 1530分钟 12小时内染色处理涂片染色染色目的 借助与一种或多种染料 使组织和细胞分别着不同的颜色 在显微镜下清楚地观察细胞内部结构 作出正确细胞学诊断染色原理 物理作用 化学作用染色方法苏木素-伊红染色 最常用 透明度好胞浆胞核对比鲜明 效果稳定巴氏染色 宫颈涂片

7、Diff-Quick染色 针吸标本瑞士-吉姆萨染色 血液 骨髓特殊染色 抗酸染色 银染等H-E染色巴氏染色Diff-Quick染色宫颈涂片巴氏染色第二节 显微镜检查显微镜观察方法：先低倍后高倍，细胞群体与器官来源有何关系如细胞群体异常，非特异性异常或明确异常。诊断报告方式 不同的标本不同的报告方式细胞学诊断的质量管理体系 高质量涂片：厚薄适当，分布均匀，细胞结构清晰细胞病理学的诊断原则掌握正常、良性病变和恶性肿瘤细胞的形态特点。结合临床。认真负责无把握时应反复取材检查，诊断客观，不能过分强调最终结论的重要性细胞病理学检查的影响因素患者信息： 年龄和性别；激素水平（如妊娠）；临床表现；病史；其他

8、检验结果病变部位： 局部解剖学知识；放射学特征；技术局限性细胞特点： 细胞量；细胞类型；细胞群体；细胞分布和黏附性；细胞形态；涂片背景其他信息： 电子显微镜；组织化学；免疫细胞化学；流式细胞术；细胞遗传学细胞病理学的诊断要点细胞数量：足够量的标本是提高结果解释 可靠性的重要因素细胞结构特征：细胞核特征：形态 数量 细胞质特征：背景和人为因素：细胞结构特征正常上皮细胞：细胞极性 粘附性腺上皮细胞： 规则排列 蜂窝状 栅栏状增生和良性肿瘤上皮细胞：乳头状 桑椹样恶性上皮细胞：相互重叠 三维状聚集球形癌细胞：异常粘附性 异常聚集性良性基质细胞：梭形 多梭形恶性基质细胞：核浆异常细胞核特征细胞核：反映

9、细胞增殖状态和能力核单形性：同一类型细胞之间的差别很小核多行性(nuclear pleomorphism)：核大小、形态和染色异常核异质（dyskaryosis)：细胞核形态的异常 染色过深（hyperchromasia)：染色质分布不规则，呈粗颗粒状、核膜增厚核质比（N/C)：细胞核和细胞质的相对比例细胞核特征单核：正常细胞双核：再生或修复细胞多核：炎症 肿瘤核仁：小 大核分裂：增生或肿瘤核固缩（karyopyknosis)：变性染色质呈致密浓缩状物质如：核破裂、核溶解、染色质溶解细胞质特征细胞质反映细胞起源、功能状态和分化程度分化越差，细胞质越少。细胞质变性：水肿，空泡变性。细胞溶解（cy

10、tolysis）：质膜完整性丧失使细胞内容物溢出背景和人为因素涂片背景：细胞，非细胞成份肿瘤素质（tumor diathesis）：浸润性肿瘤常伴有血性、炎性坏死物、变性细胞碎片人为因素：人为污染或涂片制作过程中引起细胞形态学变化。内源性：外源性：交叉污染：细胞病理学诊断质量保证灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性假阴性 筛查错误 解释错误假阳性 某些疾病有类似细胞学改变细胞病理学诊断质量保证室内质量控制(IQA)：实验室内部操作所采取的控制方法 继续教育 培训 操作复核 结果解释 审核 随访室间质量控制（EQA）：定期参加区域性能力验证活动 参加自愿的或强制的认证活动。细胞病理学诊

11、断新技术免疫细胞化学核酸原位杂交技术PCR技术DNA测序流式细胞技术全自动细胞DNA定量分析系统细胞学自动阅片系统举例：胸腹水涂片制作取液：生理盐水瓶：轻轻的把送检液体上部倒掉，取下层液体50ml左右，放入离心管。离心沉淀：转速3000/分，5分钟。（注意平衡） 看沉淀物量的多少区别对待： （1）量少：快速倒去液体，将试管竖直倒立于纸巾上，吸干管口的水分，用吸管吸出沉淀物涂片。如果沉淀物太少，可将液体倒去后再加入送检标本，重复离心，反复多次。 （2）量多：用吸管吸掉上清液，然后，用吸管吸取沉淀物上层细胞（上三分之一）涂片。剩余沉淀物制成细胞蜡块。 （3）血多的标本处理：吸取上层沉淀物，放入95

12、%酒精内，打匀，再离心沉淀。然后，吸取沉淀物。 涂片：吸取沉淀物后，滴在玻片上，可采用二张玻片对拉法，也可用吸管涂拉，最好是采用玻片推拉法(玻片与玻片之间角度为5度左右。 吸取沉淀物涂片的关键：吸取沉淀物内不能带有水分。固定： 固定方法：潮干固定 涂片边缘区域出现灰白干燥缘时立即固定 固定液：95%酒精 固定时间： 15分钟左右染色： H-E染色封片： 中性树胶封片显微镜下阅片：胸水细胞蜡块CK7（+）脱落细胞形态学检查温州医科大学附属第一医院病理科细胞病理学科一 鳞状上皮细胞基底层细胞：基底内、外细胞 内底层细胞 最深层 幼稚增生 一般不 脱落 圆形 核圆形或椭圆形 核质比 染色 外底层 在

13、粘膜萎缩、溃疡、糜烂等病变时常见 形状 核质比 染色中层细胞：圆形 多边形等 核质比 染色表层细胞：多角形 胞质透明 边缘皱褶 角化前细胞 浅蓝或淡绿 不全角化细胞 粉红 完全角化细胞 杏黄或桔黄表层鳞状上皮细胞表层鳞状上皮细胞二 柱状上皮细胞纤毛柱状上皮细胞 圆锥形，顶端宽平，表面有密集的纤毛，细胞的底部尖细；核居中下部，呈卵圆形顺细胞长轴排列，核边清晰，两侧常与细胞边界融合。粘液柱状上皮细胞 分泌性腺上皮 细胞肥大，卵圆形、锥形、圆柱形；核卵圆形，月牙形，居底部；胞质丰富，含大量粘液，粘液空泡。储备细胞 增生能力的幼稚细胞纤毛柱状上皮细胞核位于基底部或中下三分之一纤毛终板纤毛柱状上皮纤毛柱

14、状上皮宫颈管上皮细胞三 间皮细胞间皮细胞：呈单层扁平鹅卵石样排列。体积较大，直径约10-20m，呈圆形或卵圆形。胞膜 表面见一圈狭窄淡染带，为间皮细胞刷状缘。胞质 弱嗜酸性或弱嗜碱性，细胞边界清楚。 胞核 增大，圆形或卵圆形，居中，染色质纤细，分布均匀，可见数个清楚的染色质小结。胸膜增生间皮细胞脱落的上皮细胞团形态特点鳞状上皮基底层细胞 多边形 细胞大小一致 核一致 距离相等 铺砖状纤毛柱状上皮细胞 紧密聚合成堆，细胞界限不清 融合体样 胞质带 纤毛粘液柱状上皮细胞 细胞体积较大 蜂窝状结构 粘液间皮细胞团 增生型间皮细胞 特殊排列的细胞群：梅花状、腺腔样、乳头状四 非上皮细胞成份（背景成份）

15、血细胞：红细胞，中性白细胞，嗜酸性白细胞，淋巴细胞，浆细胞巨噬细胞，组织细胞，巨细胞；粘液、坏死物及异物等。 细胞损伤形态学组织学损伤 可逆性损伤： 变性（细胞水肿、脂肪变、玻璃样变、 淀粉样变、粘液样变性、病理性色素沉着、病理性钙化） 不可逆性损伤 ： 坏死（凝固性、液化性、纤维素性、）细胞学损伤 可逆性（退变） 不可逆性（坏死） 引起细胞损伤的原因物理和化学因素感染因子内部因子细胞生长异常可逆性退化变性（退变）定义 细胞从器官内表面脱落后由于得不到血液供应,缺乏氧气和养料,加上粘膜表面酶的作用,很快就会发生变性直至坏死称退化变性(简称退变). 分类 肿胀性退变和固缩性退变一般的涂片,可见无

16、退变细胞及不同程度退变细胞同时存在。若全为退变严重的细胞,则应考虑固定不良、取材不当等，需重新取材。退变肿胀性退变 细胞的肿胀变性 表现为细胞 体积增大，胞浆空泡化、泡沫状、云雾状，细胞核挤压至一边，最后细胞核溶解消失。固缩性退变 细胞内的水分脱失 表现为细胞变小皱缩变形，胞浆深红色，胞核深蓝色，核周晕（细胞核与胞浆之间形成的空隙）。影细胞 退变的细胞核破裂为碎片或溶解成淡染的核阴影，称影细胞（ghost cell）间皮细胞退变示意图不可逆性坏死与凋亡坏死细胞的溶酶体膜破裂，释放大量酸性水解酶，引起整个细胞发生自溶性改变，包括细胞核、细胞浆及间质均见发生变化，其中核的变化是细胞坏死的主要组织学

17、标志。 核固缩pyknosis 核碎裂karyorrhexis 核溶解karyolysis不可逆性坏死与凋亡凋亡细胞的程序性死亡 与炎症无关 细胞核 染色质致密 核破裂 凋亡小体 细胞质皱缩 细胞膜破裂 不可逆性细胞死亡凋亡图片坏死的类型凝固性坏死：干酪样坏死 坏疽液化性坏死：由于坏死组织中可凝固的蛋白质少，或坏死细胞自身及浸润的中性粒细胞等释放大量水解酶，或组织富有含水分和磷脂，则细胞组织易发生溶解液化。纤维素性坏死：坏死组织呈细丝、颗粒状的红染的纤维素样聚集成片状，因其染色性质与纤维素相似而得名。多见于变态反应性疾病炎性坏死、干酪样坏死、肿瘤性坏死的区别？修复损伤、死亡更新或再生 再生：组

18、织损伤后，由其临近健康组织的生发层细胞分裂增生进行修复的过程。 新上皮更新 不典型良性上皮异常（适应）增生(hyperplasia)：细胞分裂繁殖增强，数目增多，常伴有细胞体积增大。常指非肿瘤性增生，多见于慢性病。 特点：核增大，可见核仁；核分裂活跃；浆嗜碱性；浆少，核浆比略大；鳞状上皮细胞的增生主要发生在基底细胞。纤毛柱状上皮增生有时可见双核或多核细胞。 良性上皮异常（适应）化生(metaplasia)：已分化成熟的组织，在慢性炎症或其它理化因素作用下。其形态和功能均转变为另一种成熟组织的过程。 鳞化，肠化等。 异型化生或不典型化生：化生的细胞出现核染色质增粗，染色深，核体积增大并有大小、形

19、态异常，则表明在化生的基础上发生了核异质。良性上皮异常（适应）萎缩（atrophy)：细胞数量减少，体积缩小肥大(hypertrophy)：细胞体积增大hyperplasiahypertrophyhypertrophy and hyperplasiaatrophymetaplasia炎症脱落细胞学变质：致炎因子导致的组织细胞变性坏死渗出：机体血管反应，炎症局部组织血管内的液体成分、蛋白质和各种炎症细胞通过血管壁进入组织间质、体腔、体表和粘膜表面的过程。增生：局限杀灭损伤因子和局部组织细胞的（增生），修复损伤组织。炎症时上皮细胞形态变化鳞状上皮细胞：基底层和中层细胞 细胞核核肥大 细胞增生、生长活跃的表现 核体积增大 圆形或卵圆形 染色质颗粒细致均匀 细胞体积不变 轻度异型 核固缩 细胞退变和坏死的表现核碎裂 细胞退变和坏死的表现异形细胞 形态的变化 梭形 蝌蚪形 不规则形等 鳞化过程炎症时上皮细胞形态变化柱状上皮细胞：纤毛柱状细胞 成排或成片脱落，以固缩退变为主。还可见增生的储备细胞或鳞状化生的细胞。核固缩 仅正常细胞核的一半大小 核形不规则 染色深 重叠状细胞形态 缩小 呈锥形 胞浆色深红 病毒感染所致的上皮细胞形态改变 主要在呼吸道、阴道和泌尿道等。单纯性疱疹病毒： I型：主要侵犯腰以上部位的皮肤、口腔、眼结膜、角膜和脑组织等。 II型：性传播为